CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3. Phương pháp nghiên cứu
2.3.1. Phương pháp chuẩn bị mẫu đánh giá tác dụng sinh học
Lá cây Hồng được tách riêng khỏi các phần dược liệu khác, sấy ở nhiệt độ 55 oC để đạt độ ẩm < 10%, sau đó được nghiền thơ bằng thuyền tán, đem chiết bằng phương pháp chiết siêu âm với dung môi ethanol 96% ở nhiệt độ 65 oC (8 lít x 3 lần); cất thu hồi dung mơi được cắn gọi là cao tồn phần.
Cao toàn phần đem hịa vào lượng nước cất vừa đủ (1 lít), rồi lần lượt chiết phân đoạn với dung mơi có độ phân cực tăng dần, mỗi dung mơi chiết 3 lần (1 lít x 3 lần) theo
thứ tự lần lượt là n-hexan; ethyl acetat; n-butanol. Cất thu hồi dung môi các phân đoạn thu được cao n-hexan (cao Hexan); cao ethyl acetat (cao EtOAc); cao n-butanol (cao BuOH); cao nước.
Sơ đồ 2.5. Sơ đồ chiết suất phân đoạn
Kí hiệu mẫu:
- Cao tổng: cao tổng
- HR.EA: cao chiết phân đoạn ethyl acetat - HR.Bu: cao chiết phân đoạn n-butanol - HR Hex: cao chiết phân đoạn n-hexan - HR. H2O: cao chiết phân đoạn nước
- HR1: chất sạch Acid ursolic phân lập từ phân đoạn ethyl acetat - HR2: chất sạch Corchoionol C phân lập từ phân đoạn ethyl acetat - HR3: chất sạch Acid betulinic phân lập từ phân đoạn ethyl acetat - HB3: chất sạch Mearnsitrin phân lập từ phân đoạn n-butanol
Dược liệu
- Chiết với ethanol 96%, 3 lần x 30 phút/ lần - Thu hồi dung mơi
Cao tồn phần
- Phân tán trong nước
- Chiết với n-hexan ( 1 lít x 3 lần)
- Thu hồi dung môi
Phân đoạn nước
- Thu hồi dung môi
Phân đoạn nước
- Chiết với n-butanol (1 lít x 3 lần)
Phân đoạn n-butanol Phân đoạn nước
Phân đoạn
n-hexan
Phân đoạn ethyl acetat
- Thu hồi dung môi