CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
3.3. Bàn luận
3.3.2. Về phương pháp chiết xuất, phân lập
Phương pháp chiết xuất sử dụng trong nghiên cứu là phương pháp ngâm có sự hỗ trợ của siêu âm với dung môi ethanol 96%. Phương pháp ngâm kết hợp hai cách ngâm, gồm ngâm lạnh và ngâm ấm. Đầu tiên, bột lá cây được ngâm lạnh trong 24 giờ để bột lá cây được ngấm dung môi; tiếp tục ngâm ấm trong máy gia nhiệt ở 45oC trong 24 giờ để tăng tốc độ hòa tan hoạt chất trong bột lá cây vào dung mơi; sau đó được siêu âm trước khi lọc nóng, siêu âm làm tăng q trình hịa tan chất tan vào dung mơi, tăng khuếch tán chất tan vào dung mơi và có thể phá vỡ tế bào làm tăng sự dịch chuyển của các phân tử chất tan qua vách tế bào vào dung mơi giúp thúc đẩy q trình chiết tăng lên nhờ cơ chế tạo bọt, tăng cường sự xáo trộn dược liệu, làm tăng bề mặt tiếp xúc, tăng nhiệt độ, … Phương pháp trên đơn giản, dễ thực hiện, có ứng dụng cơng nghệ hiện đại là siêu âm, phù hợp với lượng mẫu lớn. Tuy nhiên, phương pháp nếu chỉ chiết 1 lần thì khả năng chiết hết chất tan từ bột lá cây thấp, do đó, nghiên cứu tiến hành chiết 3 lần để đảm bảo có thể chiết kiệt mà dịch chiết khơng q lỗng, tốn khơng q nhiều dung mơi và tiết kiệm thời gian.
Ethanol 96% được lựa chọn là dung mơi trong q trình chiết do cần chiết lấy tồn bộ các hợp chất trong bột lá cây. Dung mơi này là dung mơi vạn năng, có thể chiết hịa tan chọn lọc được nhiều nhóm hoạt chất, có khả năng thấm xuyên qua màng tế bào thực vật, cũng như tạo cầu nối hydrogen liên phân tử với các nhóm phân cực khác nhau, có thể chiết
34
được cả hợp chất có độ phân cực mạnh, vừa và yếu [9]. Ngồi ra, dung mơi này có nhiệt độ sơi thấp nên dễ thu hồi dung môi; hạn chế thủy phân hoạt chất; giá thành thấp; độ tinh khiết cao; ít độc hại do ethanol là dung môi sinh học thu được khi lên men các nguyên liệu giàu đường như củ cải đường, mía hoặc ngũ cốc, là dung mơi được lựa chọn phổ biến nhất trong “chiết xuất xanh” [10].
Cao toàn phần (cao thu được sau khi dịch chiết ethanol 96% của bột lá cây được cô quay thu hồi dung môi) sử dụng kỹ thuật chiết lỏng - lỏng để chia cao toàn phần thành những phân đoạn có tính phân cực khác nhau để dễ phân lập các hợp chất tinh khiết hơn do cao toàn phần chứa các hợp chất hữu cơ có độ phân cực rất khác nhau, từ phân cực đến không phân cực. Việc chiết trong nghiên cứu được thực hiện lần lượt từ dung môi hữu cơ kém phân cực đến dung môi phân cực, cụ thể theo thứ tự n-hexan, ethyl acetat, n-butanol [9].
Phương pháp phân lập các chất là phương pháp sắc ký cột – phương pháp tách chất hiệu quả. Đây là phương pháp dễ thực hiện; dụng cụ, hóa chất, dung mơi phổ biến, phù hợp với lượng mẫu lớn và quy mơ phịng thí nghiệm. Sắc ký lớp mỏng là phương pháp được sử dụng để lựa chọn phân đoạn có tiềm năng phân lập được hợp chất tinh khiết; thăm dị hệ dung mơi rửa giải; theo dõi sự rửa giải các chất trong quá trình phân lập. Phương pháp này đơn giản, dễ thực hiện, chi phí thấp và được sử dụng rất rộng rãi trong nghiên cứu. Bên cạnh đó, q trình triển khai sắc ký lớp mỏng khá nhanh vì vậy mà qua sắc ký đồ có thể sơ bộ xác định mẫu có chứa bao nhiêu hợp chất khác nhau trong thời gian ngắn.