CHƢƠNG 2 : ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIấN CỨU
2.2. Cỏc phƣơng phỏp nghiờn cứu
+ Phương phỏp thu thập tài liệu
Đõy là phƣơng phỏp nghiờn cứu cỏc tài liệu, sỏch, bỏo, tạp chớ, cỏc bỏo, tham luận ngành...Để tỡm kiếm, thu thập thụng tin cú liờn quan đến đề tài mỡnh đang quan tõm. Qua những thụng tin này ta cú thể cú đƣợc những nhận định, đỏnh giỏ chớnh xỏc mang tớnh logic và thuyết phục cao.
Hỡnh 2.1- Hỡnh ảnh SEM của than cacbon húa ở nhiệt độ 640oC. nhiệt độ 640oC.
Sau khi ỏp dụng phƣơng phỏp tài liệu đó thu nhập đƣợc những thụng tin cú liờn quan đến đề tài nhƣ sau:
- Tổng quan về cụng nghệ Bio-toilet khụ và những ứng dụng trờn thế giới.
- Cỏc loại vật liệu đệm sinh học, đặt biệt là đặc điểm của than cacbon hoỏ, từ đú lựa chọn đƣợc chế phẩm vi sinh thớch hợp với cụng nghệ Bio-toilet khụ.
+ Phương phỏp thực nghiệm
Đõy là phƣơng phỏp đƣợc dựng trong quỏ trỡnh tiến hành nghiờn cứu cụng nghệ Bio-toilet khụ. Qua đú tỡm ra cỏc thụng số, cỏc số liệu thực nghiệm nhƣ: độ pH, độ ẩm phự hợp của than cacbon hoỏ tre và chế phẩm vi sinh. Đặc biệt tụi quan tõm đến chỉ tiờu về mựi (H2S, NH3), tỷ lệ phối trộn của giỏ thể, chế phẩm vi sinh và lƣợng chất thải phự hợp; tốc độ khuấy trộn tối ƣu nhất để việc tiến hành ỏp dụng cụng nghệ cú kết quả cao hơn.
+ Phương phỏp đo mật độ vi sinh vật
Trong luận văn này, mật độ vi sinh đƣợc xỏc định bằng phƣơng phỏp đếm số lƣợng khuẩn lạc trờn mụi trƣờng đặc.
Nguyờn lý của phƣơng phỏp: Đối với vi sinh vật đơn bào, ta cú thể xem mỗi khuẩn lạc là kết quả của sự phỏt triển từ một tế bào ban đầu. Do vậy đếm số khuẩn lạc trờn mụi trƣờng đặc sẽ cho ta kết quả về số lƣợng vi sinh vật ban đầu.
Tiến hành:
Phƣơng phỏp làm mụi trƣờng nuụi cấy
- Cõn, đong thật chớnh xỏc từng thành phần mụi trƣờng cho vào bỡnh tam giỏc, sau đú đem khử trựng mụi trƣờng ở 121o
C trong 30 phỳt.
- Phõn phối mụi trƣờng đó khử trựng vào cỏc đĩa Petri (tiến hành thao tỏc này trong tủ cấy vụ trựng). Cỏc thao tỏc phõn phối vi sinh phải nhanh, gọn, khộo lộo để mụi trƣờng khụng dớnh lờn miệng dụng cụ hoặc nỳt bụng và việc phõn phối cần thực hiện xong trƣớc khi mụi trƣờng bị đụng đặc
Những điểm cần chỳ ý:
- Thao tỏc đổ thạch phải hết sức khẩn trƣơng và khộo lộo để hạn chế sự nhiễm khuẩn.
- Mặt thạch phải phẳng, nhẵn, cú độ dày khoảng 2mm. Thụng thƣờng cứ 1/4 lớt mụi trƣờng cú thể phõn phối đƣợc 22 - 25 đĩa petri.
- Sau khi đổ mụi trƣờng vào đĩa petri, 1 - 2 ngày sau khi kiểm tra lại xem mụi trƣờng cú bị nhiễm khuẩn khụng rồi mới sử dụng.
Phƣơng phỏp xỏc định số lƣợng tế bào vi sinh vật
Lấy mẫu: Tuỳ theo loại vật phẩm cần xỏc định mà ta lấy mẫu để nghiờn cứu với số lƣợng và khối lƣợng khỏc nhau cho phự hợp. Yờu cầu của việc lấy mẫu bao gồm: - Lấy mẫu cú tớnh chất đại diện
- Lƣợng mẫu lấy vừa phải, đủ để phõn tớch cỏc đặc tớnh lý, hoỏ, sinh học. - Dụng cụ lấy mẫu, chứa mẫu phải vụ trựng
- Lấy mẫu xong phải phõn tớch ngay và khụng đƣợc để quỏ 24h.
- Mẫu lấy phải cú nhón ghi ký hiệu và ghi vào sổ những đặc điểm của mẫu và nơi thu mẫu.
Pha loóng mẫu: Chuẩn bị một số bỡnh tam giỏc chứa 90 ml nƣớc cất vụ trựng, một số ống nghiệm chứa 9ml nƣớc cất vụ trựng và đầu cụn 1ml vụ trựng (đầu cụn dựng cho pipetman).
- Cõn 10 g mẫu cho vào bỡnh tam giỏc chứa 90 ml nƣớc cất vụ trựng, lặc đều 5 phỳt, để lắng 30 giõy rồi tiếp tục pha loóng mẫu theo dóy thập phõn.
- Tuỳ theo sự ƣớc đoỏn số lƣợng vi sinh vật trong mẫu mà pha loóng nhiều hay ớt. Phƣơng phỏp cấy gạt trờn bề mặt đĩa thạch:
- Ghi vào đỏy đĩa petri cú mụi trƣờng thạch cỏc thụng tin: nồng độ pha loóng, ngày cấy.
- Dựng pipet đó vụ trựng lấy 0,1 ml dịch pha loóng ở cỏc nồng độ khỏc nhau nhƣ 10-1, 10-2, 10-3,10-4, 10-5... cho vào mỗi đĩa thạch (mỗi nồng độ lặp lại 3 đĩa). Số tế bào cấy trờn bề mặt thạch phải đƣợc dàn đều và khụng nờn vƣợt quỏ vài trăm.
- Khi tất cả cỏc thể tớch 0,1 ml tế bào ở cỏc độ pha loóng khỏc nhau đều đó đƣợc chuyển lờn bề mặt thạch của đĩa petri, sử dụng que cấy gạt bằng thuỷ tinh để dàn đều cỏc tế bào trờn bề mặt thạch. Lƣu ý rằng que cấy gạt thuỷ tinh phải đƣợc vụ khuẩn trƣớc khi đƣợc đƣa và đĩa petri tiếp theo, bằng cỏch nhỳng vào trong cồn, đốt chỏy que cấy trờn ngọn lửa đốn cồn để khử trựng. Làm nguội que cấy bằng cỏch đặt nhẹ nú vào bề mặt thạch (chỗ thạch khụng cú tế bào vi sinh vật), rồi dàn đều lƣợng chất lỏng chứa tế bào trờn đú.
- Đặt cỏc đĩa thạch vừa cấy vào tủ ấm ở nhiệt độ 30oC và ủ từ 48 - 72 giờ, tuỳ thuộc vào từng chủng vi sinh vật.
- Kết thỳc thời gian ủ, lấy cỏc đĩa thạch ra, tiến hành đếm khuẩn lạc. Mật độ tế bào vi sinh vật trong mẫu ban đầu tớnh từ số liệu của độ pha loóng Di đƣợc tớnh theo cụng thức là:
Mi (CFU/gam) = Ai x Di x 10
Trong đú : Ai là số khuẩn lạc trung bỡnh trờn cỏc đĩa Di là nghịch đảo nồng độ pha loóng
+ Phương phỏp thống kờ
Dựa vào kết quả khảo sỏt hiện trƣờng, điều tra phỏng vấn và đặc tớnh của than cacbon hoỏ cũng nhƣ khả năng xử lý, hấp phụ cỏc chất ụ nhiễm của than.
+ Phương phỏp đỏnh giỏ hiệu quả xử lý của mụ hỡnh
Hiệu quả xử lý của mụ hỡnh đƣợc đỏnh giỏ bằng khối lƣợng chất thải sinh học thụng qua thụng số thể tớch. Buồng chứa chất thải sinh học cú kớch thƣớc cụ thể, do đú dễ dàng đo đƣợc thể tớch khi biết độ cao của khối chất thải sinh học.
+ Phương phỏp tớnh toỏn thiết kế
Tớnh toỏn cỏc thụng số cụng nghệ và kớch thƣớc thiết bị và lắp rỏp thiết bị để thiết kế mụ hỡnh Bio-toilet khụ.
+ Phương phỏp kế thừa
Dựa vào cỏc thụng tin điều tra khảo sỏt, cỏc kết quả nghiờn cứu của cỏc nhà khoa học, chuyờn gia và tài liệu tham khảo để bổ sung vào luận văn cao học này.