Bệnh viện Trung ương Quân đội 108
(Nguồn: Tác giả chụp)
Hình 2.4. Máy ly tâm Rotofix 32A tại khoa Sinh hóa – Bệnh viện Trung ương Quân đội 108 (Nguồn: Tác giả chụp)
+ Hóa chất xét nghiệm apoA-I của hãng Beckman Coulter - mã số OSR 6142, Lot 2090 sẵn sàng để sử dụng và được đặt trên khay hóa chất của máy xét nghiệm. Khi chưa mở nắp ở 20C - 80C, độ ổn định theo thời gian ghi trên vỏ hộp. Khi mở nắp xếp trên khay hóa chất của máy, độ ổn định của hóa chất là 90 ngày.
Thành phần thuốc thử như sau:
Đệm TRIS (pH 7.4) 8 mmol/L
Natri clorua (NaCl) 106 mmol/l Polyethylene glycol 6000 3.5 % w/v Kháng thể kháng apolipoprotein A-I ≈ 0.14 g/L
Chất bảo quản
Hình 2.5. Hóa chất xét nghiệm apolipoprotein A-I
(Nguồn: tác giả chụp)
+ Hóa chất để xây dựng đường chuẩn của hãng Beckman Coulter - mã số ODR3005. Có thể truy xuất các giá trị apoA-I trong hóa chất dựng đường chuẩn theo tài liệu tham khảo của tổ chức Y tế Thế giới mã số SP3-01.
+ Hóa chất để thực hiện nội kiểm tra chất lượng của hãng Beckman Coulter - mã số ODC0003 và ODC0004 kèm theo các giá trị để kiểm soát chất lượng (Giá trị trung bình, độ lệch chuẩn, hệ số biến thiên) của nhà sản xuất nghiên cứu.
+ Dung dịch diluent NaCl 0,9%.
+ Ống xét nghiệm 5 ml (75 x 13 mm) có chất chống đơng Li-heparin. + Bộ dụng cụ lấy máu xét nghiệm.
- Các bước tiến hành xét nghiệm: + Chuẩn bị
Thiết bị: được chuẩn theo hướng dẫn sử dụng và kiểm sốt chất lượng theo tiêu chuẩn ISO 15189:2012.
Hóa chất: sẵn sàng sử dụng và được nạp vào máy theo hướng dẫn sử dụng thiết bị.
Bệnh phẩm: máu toàn phần được ly tâm 3600 vòng/phút trong vòng 5 phút, tách lấy huyết tương.
+ Tiến hành xét nghiệm: thực hiện thao tác phân tích bệnh phẩm theo hướng dẫn sử dụng thiết bị.
+ Tính tốn kết quả: máy xét nghiệm tự động tính toán ra kết quả của từng mẫu và chuyển sang phần mềm quản lý xét nghiệm VIMES.
+ Nhận định kết quả
. Nếu kết quả vượt q giới hạn tuyến tính (thơng qua cờ báo trên máy), người làm xét nghiệm pha loãng mẫu bằng dung dịch NaCl 0,9%, thông qua chức năng chạy mẫu theo tỷ lệ 1/2,1/3, 1/4…, kết quả từ những mẫu được pha loãng máy sẽ tự động nhân lên với hệ số pha loãng.
. Kết quả bất thường hoặc bị lỗi, sẽ được kiểm tra xác định nguyên nhân và thực hiện phân tích lại.
- Giá trị tham chiếu: Nam 1,05 - 1,75 g/l; Nữ 1,05 - 2,05 g/l.
Khoảng tham chiếu có thể thay đổi theo độ tuổi, giới tính, loại mẫu, chế độ ăn uống và vùng địa lý. Mỗi phòng xét nghiệm phải xác minh sự phù hợp các giá trị tham chiếu đối với cộng đồng khu vực đó và nên xác định khoảng tham chiếu của riêng phòng xét nghiệm theo nguyên tắc “Thực hành tốt phịng thí nghiệm” (Good Laboratory Practice - GPL). Đối với mục đích chẩn đốn, điều trị, kết quả phải luôn được đánh giá dựa trên bệnh sử, khám lâm sàng và các phát hiện khác.
- Kết quả phân tích bị ảnh hưởng bởi các yếu tố:
+ Nồng độ bilirubin 684 µmol/l gây nhiễu dưới 3% kết quả. + Nồng độ haemoglobin 5g/l gây nhiễu dưới 3% kết quả. + Nồng độ intralipid 900 mg/dl gây nhiễu dưới 10% kết quả. * Phương pháp định lượng apolipoprotein B huyết tương [71].
Định lượng apoB theo phương pháp miễn dịch đo độ đục và tiêu chuẩn kỹ thuật của hãng Beckman Coulter.
- Nguyên lý của xét nghiệm: khi mẫu hoặc chất chuẩn được trộn với hóa chất, apoB có trong mẫu hoặc chất chuẩn sẽ kết hợp với kháng thể kháng apoB có trong hóa chất để tạo thành phức hợp ngưng kết và được đo độ đục ở bước sóng 340 nm. Phổ hấp thụ tỷ lệ thuận với nồng độ apoB có trong phức hợp. Kết quả đo phổ sẽ được máy xét nghiệm so sánh với chuẩn để tính ra kết quả.
- Đường chuẩn: sau khi dựng đường chuẩn, phải xem xét đồ thị trực quan trên máy phân tích Beckman Coulter thơng qua các giao diện điều khiển (Quy trình thực hiện, màn hình hiệu chuẩn, đường cong hiệu chuẩn). Phải thực hiện nội kiểm tra chất lượng ngay sau khi xây dựng đường chuẩn. Tiến hành xây dựng lại đường chuẩn ở một số trường hợp: khi thay đổi lơ hóa chất hoặc có sự thay đổi đáng kể các giá trị nội kiểm tra chất lượng; Sau bảo trì
bảo dưỡng hoặc thay thế các thiết bị của máy phân tích.
- Nội kiểm tra chất lượng: mỗi phòng xét nghiệm cần thiết lập tần suất nội kiểm tra riêng. Theo ngun tắc thực hành phịng thí nghiệm tốt, cần thực hiện nội kiểm tra chất lượng hàng ngày trước khi phân tích mẫu bệnh nhân và sau mỗi lần xây dựng đường chuẩn, chạy trắng.
Mỗi phòng xét nghiệm cần xây dựng riêng các giá trị để kiểm soát chất lượng. Các giá trị này phải nằm trong giới hạn mà nhà sản xuất đưa ra. Khi có bất kỳ xu hướng dịch chuyển hoặc có sự thay đổi đột ngột giá trị nội kiểm tra chất lượng, cần rà sốt lại tất cả các thơng số, quy trình vận hành.
Mỗi phịng xét nghiệm cần xây dựng các hướng dẫn hành động khắc phục khi kết quả nội kiểm tra không đạt.
- Khoảng tuyến tính: 0,40 - 2,00 g/l (40 - 200 mg/dl). - Độ nhạy: 0,007 g/l.
- Độ chính xác:
n = 60 Các thơng số thống kê
Apolipoprotein B (g/l) Độ lệch chuẩn Hệ số biến thiên (%)
0,61 0,01 1,92
1,49 0,02 1,27
1,98 0,03 1,33
- Mẫu xét nghiệm:
+ 2 ml máu toàn phần sau khi lấy được đựng trong ống nghiệm chống đông bằng Li-heparin. Mẫu ổn định trong 8 ngày ở 20C - 80C và ổn định 1 ngày ở 150C - 250C. Các mẫu bị tan huyết, mẫu đục sẽ bị loại bỏ.
- Thiết bị, dụng cụ, hóa chất
+ Máy xét nghiệm sinh hóa tự động AU5800 của hãng Beckman Coulter. + Máy ly tâm 4000 vòng/phút, Rotofix 32A Hettich SN 0027157 - 03.
+ Pipet tự động 100 µl hãng Eppendorf.
+ Hóa chất xét nghiệm apoB của hãng Beckman Coulter - mã số OSR 6143, Lot 2605 sẵn sàng để sử dụng và được đặt trên khay hóa chất của máy xét nghiệm. Khi lọ hóa chất chưa mở nắp, ở 20C - 80C độ ổn định theo thời gian ghi trên vỏ hộp, khi mở nắp xếp trên khay hóa chất của máy, độ ổn định là 90 ngày. Thành phần thuốc thử như sau:
Đệm TRIS (pH 7.4) 8,6 mmol/l
Natri clorua (NaCl) 125 mmol/l
Polyethylene glycol 6000 4% khối lượng/thể tích
Kháng thể kháng apolipoprotein B 1,93 g/l
Chất bảo quản
Hình 2.6. Hóa chất xét nghiệm apolipoprotein B
(Nguồn: tác giả chụp)
+ Hóa chất để xây dựng đường chuẩn của hãng Beckman Coulter - mã số ODR3005.
Truy xuất các giá trị apoB của hóa chất dựng đường chuẩn theo tài liệu tham khảo của tổ chức Y tế Thế giới mã số SP3-07.
+ Hóa chất kiểm tra chất lượng hãng Beckman Coulter - mã số ODC0003 và ODC0004.
+ Dung dịch diluent NaCl 0,9%.
+ Ống xét nghiệm 5 ml (75 x 13 mm) có chất chống đơng Li-heparin. + Bộ dụng cụ lấy máu xét nghiệm.
- Các bước tiến hành xét nghiệm: + Chuẩn bị
Thiết bị: được chuẩn theo hướng dẫn sử dụng thiết bị và kiểm soát chất lượng theo tiêu chuẩn ISO 15189:2012.
Hóa chất: sẵn sàng sử dụng và được nạp vào máy theo hướng dẫn sử dụng thiết bị.
Bệnh phẩm: máu toàn phần được ly tâm 3600 vòng/phút trong vòng 5 phút tách lấy huyết tương.
+ Tiến hành xét nghiệm: thực hiện thao tác phân tích bệnh phẩm theo theo hướng dẫn sử dụng.
+ Tính tốn kết quả: máy xét nghiệm tự động tính tốn ra kết quả của từng mẫu và chuyển sang phần mềm quản lý xét nghiệm VIMES.
+ Nhận định kết quả
. Nếu kết quả vượt q giới hạn tuyến tính (thơng qua cờ báo trên máy), người làm xét nghiệm pha loãng mẫu bằng dung dịch NaCl 0,9%, thông qua chức năng chạy mẫu theo tỷ lệ 1/2,1/3, 1/4…, kết quả từ những mẫu được pha loãng máy sẽ tự động nhân lên với hệ số pha loãng.
. Kết quả bất thường hoặc bị lỗi sẽ được kiểm tra xác định nguyên nhân và phân tích lại.
- Giá trị tham chiếu: Nam 0,6 - 1,4 g/l; Nữ 0,55 - 1,3 g/l.
Giá trị tham chiếu có thể thay đổi theo độ tuổi, giới tính, loại mẫu, chế độ ăn uống và vùng địa lý. Mỗi phòng xét nghiệm phải xác minh sự phù hợp các giá trị tham chiếu đối với cộng đồng khu vực đó và nên xác định khoảng tham chiếu của riêng phòng xét nghiệm theo nguyên tắc “Thực hành tốt phịng thí nghiệm”. Đối với mục đích chẩn đốn, điều trị, kết quả phải luôn được đánh giá dựa trên bệnh sử, khám lâm sàng và các phát hiện khác.
- Kết quả phân tích bị ảnh hưởng bởi các yếu tố:
+ Nồng độ bilirubin 684 µmol/l gây nhiễu dưới 3% kết quả. + Nồng độ haemoglobin 5g/l gây nhiễu dưới 5% kết quả.
+ Nồng độ intralipid 200 mg/dl gây nhiễu dưới 10% kết quả [71].
2.4. Xử lý số liệu
Phương pháp thống kê y học trên phần mềm SPSS 16.0 và excel 2010. - Các số liệu được tính tốn giá trị trung bình (TB); Độ lệch chuẩn (ĐLC); Số lượng (n); Tỷ lệ phần trăm (%) và vẽ biểu đồ.
- Kiểm định sự khác biệt giữa 2 giá trị trung bình bằng test T- student. - Kiểm định sự khác biệt giữa 2 tỷ lệ bằng Chi bình phương (χ2).
- Khảo sát tỷ suất chênh (OR) của các YTNC bằng hàm hồi qui đa biến. - Đánh giá tương quan bằng tính hệ số tương quan r và độ tin cậy p.
Hệ số tương quan Ý nghĩa
0,0 đến ±0,1 Tương quan rất yếu
±0,1< đến ± 0,3 Tương quan yếu
±0,3 < đến ±0,5 Tương quan trung bình
- Đường cong ROC: xác định mức độ chính xác của xét nghiệm chẩn đoán dựa vào hệ thống điểm sau đây:
Diện tích dưới đường cong ROC (AUC) Ý nghĩa
Trên 0,90 Rất tốt
Trên 0,80 đến 0,90 Tốt
Trên 0,70 đến 0,80 Trung bình
Trên 0,60 đến 0,70 Chấp nhận Từ 0,50 đến 0,60 Khơng có giá trị
Một phương pháp xét nghiệm có giá trị phải có diện tích AUC trên 0,5. Theo qui ước thì một phương pháp xét nghiệm với AUC trên 0,8 được xem là tốt hay rất tốt; AUC dưới 0,6 được xem là không tốt và không thể áp dụng vào lâm sàng được.
- Độ nhạy (Se), độ đặc hiệu (Sp):
Tình trạng bệnh Có bệnh Khơng có bệnh Kết quả xét nghiệm (+) Dương tính thật (a) Dương tính giả (c) (-) Âm tính giả (b) Âm tính thật (d)
- Độ nhạy (Se): a/a+b
2.5. Đạo đức nghiên cứu
Quá trình nghiên cứu tuân thủ theo các quy định trong quy chế hoạt động của Hội đồng đạo đức trong nghiên cứu Y sinh học ban hành kèm theo quyết định số 5129/2002/QĐ-BYT ngày 19/12/2002 của bộ trưởng bộ Y tế. Những khía cạnh đạo đức chính liên quan đến quyền lợi của đối tượng nghiên cứu như sau:
Lợi ích, nguy cơ đối với đối tượng nghiên cứu
Trong nghiên cứu này, các bệnh nhân có đủ các điều kiện theo tiêu chuẩn lựa chọn sẽ được đưa vào nghiên cứu sau khi bệnh nhân và/hoặc người nhà đã nghe giải thích và tình nguyện tham gia. Các bệnh nhân đều được chẩn đoán và điều trị theo quy trình thống nhất. Các xét nghiệm được thực hiện theo đúng chế độ và quy trình chun mơn của Bệnh viện Trung ương Qn đội 108.
Bảo mật thông tin
Tồn bộ các thơng tin cá nhân của bệnh nhân được thu thập từ quá trình nghiên cứu chỉ nhằm mục đích phục vụ cho nghiên cứu này, khơng được sử dụng cho mục đích nào khác. Các thông tin cá nhân của bệnh nhân sẽ được đảm bảo bí mật, khơng cơng bố tên của cá nhân bệnh nhân trên các bản cơng bố kết quả nghiên cứu (tạp chí khoa học, bài báo cáo hội nghị khoa học...).
SƠ ĐỒ NGHIÊN CỨU
1. LÂM SÀNG
2. XÉT NGHIỆM (chỉ số apo, lipid..) 3. HÌNH ẢNH: CT, CTA, MRI, MRA. 4. CHIA NHÓM (TOAST):
- Nhồi máu não do xơ vữa mạch máu lớn (n =146): ICAS (n=88) - ECAS (n=31) - ICAS + ECAS (n=27)
- Nhồi máu não do tắc mạch nhỏ (n=102)
2. Đánh giá mối liên quan giữa nồng độ một số apolipoprotein huyết tương và tình trạng xơ vữa động mạch não 1. Mô tả đặc điểm lâm sàng, hình ảnh học và sự
thay đổi nồng độ một số apolipoprotein huyết tương bệnh nhân nhồi máu não do xơ vữa động mạch 1. LÂM SÀNG
2. XÉT NGHIỆM (chỉ số apo, lipid..) 3. HÌNH ẢNH: MRI, MRA.
Khơng có hình ảnh nhồi máu não Khơng có hình ảnh xơ vữa mạch não
LIÊN QUAN GIỮA NỒNG ĐỘ APO VỚI TÌNH TRẠNG XƠ VỮA ĐỘNG MẠCH NÃO
- Xơ vữa mạch máu lớn - Vị trí xơ vữa: ICAS – ECAS - Số vị trí xơ vữa: ít - nhiều - Mức độ hẹp (nặng, vừa, tắc) - Tỷ lệ % hẹp lòng mạch
ĐẶC ĐIỂM LÂM SÀNG, HÌNH ẢNH
- Nhóm nhồi máu não do xơ vữa mạch máu lớn - Nhóm nhồi máu não do tắc mạch nhỏ
NHĨM BỆNH NHÂN
248 bệnh nhân nhồi máu não
SO SÁNH NỒNG ĐỘ APO GIỮA CÁC NHĨM
- Nhóm chứng
- Nhóm nhồi máu não do xơ vữa mạch máu lớn - Nhóm nhồi máu não do tắc mạch nhỏ
NHÓM CHỨNG
CHƯƠNG 3
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1. Đặc điểm chung
3.1.1. Đặc điểm phân bố theo giới tính và tuổi
Bảng 3.1. Phân bố theo giới tính của các nhóm
Giới tính Nhóm NMN do XVMML (n = 146) Nhóm NMN do TMN (n = 102 ) Nhóm chứng (n = 40) p Số lượng (n) Tỷ lệ (%) Số lượng (n) Tỷ lệ (%) Số lượng (n) Tỷ lệ (%) Nam 118 80,82 78 76,47 27 67,50 > 0,05 Nữ 28 19,18 24 23,53 13 32,50 > 0,05 Tỷ số nam/nữ 4,2/1 3,3/1 2,08/1 Nhận xét:
- Nam giới chiếm tỷ lệ chủ yếu trong cả 3 nhóm.
- Khác biệt tỷ lệ nam (hoặc nữ) giữa 3 nhóm khơng có YNTK (p > 0,05).
Biểu đồ 3.1. Phân bố theo giới tính của các phân nhóm xơ vữa mạch máu lớn
Nhận xét:
Nam giới chiếm tỷ lệ chủ yếu trong cả 3 phân nhóm ICAS, ECAS và ICAS + ECAS. 75,0 93,5 85,2 25,0 6,5 14,8 0 20 40 60 80 100
ICAS ECAS ICAS + ECAS
Tỷ lệ (%)
Nữ Nam
Phân nhóm Nhóm NMN do XVMML
Bảng 3.2. Phân bố theo tuổi của các nhóm Tuổi Nhóm NMN do XVMML (n = 146) Nhóm NMN do TMN (n = 102) Nhóm chứng (n = 40) p Số lượng (n) Tỷ lệ (%) Số lượng (n) Tỷ lệ (%) Số lượng (n) Tỷ lệ (%) < 50 14 9,59 7 6,86 6 15 > 0,05 50 - 70 96 65,75 64 62,75 20 50 > 70 36 24,66 31 30,39 14 35 TB ± ĐLC 63,75 12,64 63,75 12,65 61,85 12,54 > 0,05 Nhận xét:
- Tuổi trung bình cũng như tỷ lệ bệnh nhân ở từng độ tuổi (50 <, 50 - 70 và > 70 tuổi) giữa 3 nhóm khác biệt khơng có YNTK với p > 0,05.
- Các bệnh nhân có độ tuổi 50 - 70 chiếm tỷ lệ cao nhất trong cả 3 nhóm: nhóm chứng (50,0%), nhóm nhồi máu não do xơ vữa mạch máu lớn (65,75%), nhóm nhồi máu não do tắc mạch nhỏ (62,75%).
Biểu đồ 3.2. Phân bố theo tuổi của các phân nhóm xơ vữa mạch máu lớn Nhận xét: Nhận xét:
Các bệnh nhân có độ tuổi 50 - 70 chiếm tỷ lệ cao nhất trong cả 3 phân nhóm: ICAS (65,91%), nhóm ECAS (70,97%), nhóm ICAS+ECAS (59,26%).
0 20 40 60 80 100
ICAS ECAS ICAS + ECAS
11,36 9,68 3,70 65,91 70,97 59,26 22,73 19,35 37,04 Tỷ lệ (%) < 50 50 - 70 > 70 Nhóm NMN do XVMML Phân nhóm
3.1.2. Đặc điểm phân bố theo BMI
Bảng 3.3. Phân bố theo BMI
BMI (kg/m2) Nhóm NMN do XVMML n = 146 Nhóm NMN do TMN n = 102 Nhóm chứng n = 40 p Số lượng (n) Tỷ lệ (%) Số lượng (n) Tỷ lệ (%) Số lượng (n) Tỷ lệ (%) < 18,5 8 5,5 7 6,9 2 5 > 0,05 18,5 - < 25 114 78,1 72 70,6 31 77,5 25 - < 30 23 15,8 21 20,6 7 17,5