CHƯƠNG 3 : KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
3.3 Đánh giá chất lượng các chủng gốc giống
3.3.3 Đánh giá tính ổn định hiệu giá virút qua các đời nuơi cấy
Các chủng gốc giống dengue sau khi nuơi cấy đạt yêu cầu về hiệu giá nhưng chủng cĩ đảm bảo yêu cầu để đưa vào sản xuất hay khơng thì vẫn cần phải được đánh giá khảo sát tính ổn định của chủng qua các đời nuơi cấy. Nếu chủng bị giảm hiệu giá chỉ sau 1 đến 2 đời nuơi cấy thì sẽ khơng thể đưa vào quá trình sản xuất vắcxin. Việc đánh giá được tiến hành ở 4 đời liên tiếp sau đĩ từ đời P2 đến P5 Q trình đánh giá tính ổn định qua các đời nuơi cấy được thực hiện như sau:
- Gây nhiễm chủng gốc giống virút dengue tái tổ hợp với quy trình đã được xây dựng ở trên.
- Các chủng sau khi nuơi cấy được thu hoạch và được kí hiệu là đời P2. - Đánh giá hiệu giá các chủng dengue đời P2.
- Tiếp tục tiến hành gây nhiễm các chủng dengue tái tổ hợp đời P2, nuơi cấy và thu hoạch các chủng virút dengue được đời P3.
- Lặp lại các quá trình trên cho đến khi thu được chủng virút đến đời P5. Hiệu giá các chủng virút dengue qua 5 đời nuơi cấy được tĩm tắt theo .
- Chủng rDEN1∆30: hiệu giá của chủng tăng nhẹ ở đời P2, P3, P5. Tuy nhiên
sự tăng hay giảm giữa các đời là rất ít 100.1 đến 100.2 PFU/ml, khác biệt này gần như khơng đáng kể, chủng giữ được tính ổn định về hiệu giá khoảng 107.4 PFU/ml cho đến đời thứ 5.
- Chủng rDEN2/4∆30(ME) : hiệu giá của chủng tăng nhẹ ở đời P3, P5. Tuy
nhiên giống như chủng rDEN1∆30 khác biệt này cũng rất thấp, chủng giữ được tính ổn định về hiệu giá khoảng 107.3 PFU/ml cho đến đời thứ 5.
- Chủng rDEN3∆30/31: hiệu giá của chủng tăng nhẹ ở đời P3, P4. Khác biệt
này là rất thấp, chủng giữ được tính ổn định về hiệu giá khoảng 106.4 PFU/ml cho đến đời thứ 5.
- Chủng rDEN3-3’D4∆30: hiệu giá của chủng tăng nhẹ ở đời P2, P3. Khác
biệt này là rất thấp, chủng giữ được tính ổn định về hiệu giá khoảng 106.7
PFU/ml cho đến đời thứ 5.
- Chủng rDEN4∆30: hiệu giá của chủng tăng nhẹ ở đời P2, P3, P4. Khác biệt
này là rất thấp, chủng giữ được tính ổn định về hiệu giá khoảng 107.6 PFU/ml cho đến đời thứ 5.
- Chủng rDEN4∆30-200,201 : hiệu giá của chủng tăng nhẹ ở đời P2, P3, P5.
Khác biệt này khoảng 100.2PFU/ml, chủng giữ được tính ổn định về hiệu giá khoảng 107.2 PFU/ml cho đến đời thứ 5.
Trong quá trình phát triển chủng và sản xuất sau này, đời P2 sẽ được sử dụng như là chủng sản xuất và đời P3 được sử dụng như là đời để làm vắcxin dengue sống giảm độc lực.
Kết quả nghiên cứu trên cho thấy các chủng virút gốc giống sản xuất được cĩ hiệu giá cao và ổn định qua các đời nuơi cấy, đạt tiêu chuẩn để đưa vào trong sản xuất vắcxin.
Bảng 7. Kết quả chuẩn độ hiệu giá virút dengue qua các đời nuơi cấy
rDEN1∆30 rDEN2/4∆30( ME) rDEN3∆30/31 rDEN3- 3’D4∆30 rDEN4∆30 rDEN4∆30- 200,201 Đời P1 7.3 7.2 6.3 6.6 7.4 7.1 Đời P2 7.5 7.2 6.4 6.8 7.6 7.3 Đời P3 7.5 7.4 6.5 6.8 7.6 7.3 Đời P4 7.4 7.2 6.5 6.7 7.7 7.2 Đời P5 7.5 7.3 6.4 6.7 7.5 7.3 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Hi ệ u g iá vir ú t lg PFU /m l