M: marker 100bp ĐC: đối chứng 8T1-8T9, 8T31-8T36: sự phân tách sợi đơn từ các mẫu
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ I KẾT LUẬN
I. KẾT LUẬN
Từ những kết quả thu đƣợc với việc ứng dụng kỹ thuật PCR-SSCP và PCR- RFLP trong phân tích đột biến gen sửa chữa bắt cặp sai MLH1 liên quan đến ung
thƣ đại trực tràng không polyp di truyền, chúng tôi đƣa ra kết luận nhƣ sau:
1. Đã tách chiết thành công ADN tổng số từ 50 mẫu mô và 20 mẫu máu bệnh phẩm.
2. Đã nhân bản thành công 7 exon quan tâm của gen MLH1, bao gồm việc thiết kế các cặp mồi đặc hiệu và tối ƣu hóa phản ứng PCR.
3. Đã phát hiện đƣợc các mẫu phân đoạn gen MLH1 từ những bệnh nhân có mơ hình phân tích băng điện di khác biệt ở các exon 13 (mẫu 13T6) và exon 14 (mẫu 14T18 và 14T19) gen MLH1 khi so sánh với đối chứng, sử dụng kỹ thuật PCR-SSCP.
4. Đã phát hiện đƣợc các mẫu phân đoạn gen MLH1 từ những bệnh nhân có mơ hình phân tích băng điện di khác biệt ở exon 18 gen MLH1 từ các bệnh nhân số 19 và bệnh nhân số 20 khi so sánh với đối chứng, sử dụng kỹ thuật PCR- RFLP.
5. Đã phát hiện đƣợc một đột biến ở thể dị hợp tử thay thế nucleotit G>A tại vị trí 203 trên exon 13 từ mẫu mơ bệnh phẩm của bệnh nhân số 6 (mẫu 13T6), một đột biến thay thế nucleotit C>G tại vị trí 176 và một đột biến thay thế T>A ở vị trí 185 thuộc exon 14 gen MLH1 từ mẫu mô bệnh phẩm ngƣời số 19 (mẫu 14T19) bằng giải trình tự gen.
6. Những sai khác về mơ hình điện di SSCP và RLFP cũng nhƣ những thay đổi trình tự nucleotit đều đƣợc phát hiện ở các mẫu mô, không phát hiện đƣợc ở các mẫu máu tƣơng ứng. Điều này chứng tỏ những đột biến mà chúng tôi xác định đƣợc đều là các đột biến soma.
II. KIẾN NGHỊ
Trên cơ sở kết quả nghiên cứu này, chúng tơi có một số kiến nghị nhƣ sau: 1. Tiếp tục tiến hành phân tích đột biến ở các exon cịn lại của gen MLH1 bằng
kỹ thuật PCR-SSCP và các kỹ thuật di truyền khác (SSR, HET, DGGE...) để xác định các dạng đột biến thuộc gen MLH1 có thể có ở bệnh nhân ung thƣ đại trực tràng Việt Nam.
2. Mở rộng nghiên cứu các gen MMR khác (MSH2, MSH6…) nhằm xây dựng một cơ sở dữ liệu về đột biến gen MMR ở ngƣời Việt Nam.