Trên các tiêu bản nhuộm thể hiện rõ: vi khuẩn E. coli đối chứng bắt màu Gram
âm (màu hồng), trong khi các vi khuẩn còn lại đều là các cầu khuẩn Gram dƣơng (màu tím), khơng thấy có sự khác biệt giữa các tiêu bản nhuộm. Trên hình 13 cũng cho thấy vi khuẩn S. aureus có thể đứng đơn lẻ, ghép đôi hay kết thành cụm dạng chùm nho khi nhuộm Gram. Nhƣ vậy, tất cả 19 mẫu vi khuẩn nghiên cứu đều có hình thái khuẩn lạc, hình dạng, kích thƣớc và tính chất bắt màu Gram dƣơng hoàn toàn giống nhau.
Kết quả thử phản ứng coagulase 3.1.3.
Từ khuẩn lạc điển hình của S. aureus trên đ a thạch BP, tiến hành tăng sinh
chúng trên môi trƣờng canh thang não tim BHI ở 37o trong 24 giờ. Sau 24 giờ nuôi
cấy, lấy dịch huyền phù tế bào thử phản ứng đông huyết tƣơng trên huyết tƣơng thỏ bằng phƣơng pháp ống nghiệm: nhỏ 100µl dịch huyền phù tế bào vào 300µl huyết tƣơng thỏ. ối chứng âm bổ sung môi trƣờng canh thang não tim BHI và đối chứng
dƣơng là chủng chuẩn Staphylococcus aureus subsp. aureus Rosenbach (ATCC®
27664™). ọc kết quả thử phản ứng sau 4 giờ ủ ở 37oC. Kết quả thử phản ứng đông
huyết tƣơng đƣợc thể hiện ở hình 14:
E. coli
Hình 14. Kết quả thử phản ứng đông huyết tƣơng của S. aureus
Phần lớn các chủng S. aureus tạo ra một hoặc hai loại coagulase: coagulase cố định (bound coagulase) gắn vào thành tế bào và coagulase tự do (free coagulase) đƣợc giải phóng khỏi thành tế bào. Trong phản ứng đơng huyết tƣơng với các chủng
S. aureus đã phân lập đƣợc, không phải tất cả các chủng đều cho phản ứng đơng
huyết tƣơng dƣơng tính trong ống nghiệm mà vẫn có 06/19 chủng cho phản ứng âm
tính. iều đó cho thấy trong số các chủng S. aureus mà chúng tôi phân lập đƣợc từ
thực phẩm tạo ra 2 dạng coagulase: dạng tự do và dạng liên kết trên thành tế bào, chứng tỏ các chủng Staphylococcus aureus trong các thực phẩm nhóm thực phẩm khá đa dạng xét về đặc tính sinh coagulase. ể khẳng định chắc chắn các chủng S. aureus đã phân lập sinh coagulase, chúng tôi tiến hành chạy phản ứng khuếch đại gen P R gen coa mã hóa cho coagulase.
3.2. Kết quả phân loại các gen coa và gen sinh độc tố ruột của S.aureus bằng
kỹ thuật PCR
Kết quả phân tích gen coa bằng PCR 3.2.1.
ể tiến hành phản ứng khuếch đại gen, DN của vi khuẩn phải đƣợc bộc lộ hồn tồn. Do đó, chúng tơi tách chiết DN của toàn bộ 19 chủng S. aureus mà
chúng tôi phân lập đƣợc bằng phƣơng pháp đã nêu ở trên.
trong ống nghiệm là âm tính. húng tơi tiến hành chạy phản ứng khuếch đại gen coa mã hóa cho coagulase trên 06 chủng S. aureus cho phản ứng coagulase âm tính và các chủng S. aureus cịn lại cho phản ứng coagulase dƣơng tính để khẳng định chắc chắn phản ứng thử đơng huyết tƣơng khơng có trƣờng hợp nào là dƣơng tính giả và tất cả các chủng S. aureus trong thực phẩm mà chúng tôi phân lập đƣợc đều sinh coagulase. Trong phản ứng P R này, chúng tôi sử dụng đối chứng dƣơng là chủng chuẩn
Staphylococcus aureus subsp. aureus Rosenbach ( T ® 27664™). Kết quả phân
tích PCR gen coa đƣợc thể hiện ở hình 15.