hóa chất nhưng vẫn đạt được kết quả như mong muốn. Thành phần của từng tube được trình bày ở bảng dưới đây.
Bảng 3.7: Các thành phần phản ứng PCR Thành Thành phần phản ứng Tube 1 Tube 2 Master mix 6,25μl 6,25μl Primer SRY,sY86,sY127,sY 254 (Mỗi cặp mồi F: 0.25 μl, R: SRY,sY84,sY134,s Y153 (Mỗi cặp mồi F: 0.25 μl, R:
0.25 μl) 0.25 μl)
Templa
te 2-3 μl 2-3 μl
H2O Vừa đủ Vừa đủ
Tổng 12,5 μl 12,5 μl
Thể tích cụ thể của từng mẫu làm khn trong phản ứng PCR dựa vào nồng độ ADN của từng mẫu đó tách chiết được, có thể dao động từ 2- 3 µl. Từ đó, tính ra thể tích lượng H2O tương ứng trong mỗi tube. Chứng âm chúng tôi sử dụng H2O cất nhằm kiểm tra sự lây nhiễm.
Dựa vào kích thước chênh lệch giữa các sản phẩm của phản ứng Multiplex PCR chúng tôi tiến hành chạy điện di sản phẩm thu được trên gel agarose 2% trong thời gian 1h 30phút với hiệu điện thế 100V và cường độ dòng điện là 100mA.
Sau khi kiểm tra kết quả sản phẩm phản ứng Multiplex PCR với chu trình nhiệt và thành phần phản ứng như trên chúng tơi thấy các gen được nhân lên với đúng kích thước mong muốn, khơng xuất hiện các băng phụ.
3.3.2 Tỷ lệ và phân bố các mất đoạn vùng AZF ở bệnh nhân vô sinh nam giới. Với 248 bệnh nhân vô sinh nam giới đã kiểm tra là khơng có bất thường về Với 248 bệnh nhân vơ sinh nam giới đã kiểm tra là khơng có bất thường về nhiễm sắc thể đồ sẽ được tiến hành phân tích ADN bằng cách chạy Multiplex PCR với 7 cặp mồi giới thiệu ở trên. Kết quả về tỷ lệ mất đoạn ở các bệnh nhân vô sinh nam giới được biểu diễn qua biểu đồ sau:
19 (8%)
229 (92%)
Không phát hiện mất đoạn Mất đoạn trên AZF
Hình 3.3: Phân bố tỷ lệ bệnh nhân bị mất đoạn trên vùng AZF
Kết quả cho thấy trong tổng số 248 bệnh nhân được xét nghiệm ADN, phát hiện có 19/248 bệnh nhân bị mất đoạn trên vùng AZF, chiếm tỷ lệ là 8%.