- Vùng gene SodC: đây là gene điều hòa thay đổi ion Cu, Zn và muối
Ca, nó khơng thuộc vùng gene mã hóa capsule, thử nghiệm trên gene SodC để phát hiện khả năng hình thành vỏ của cầu khuẩn (encapsuleated), nhưng nó có vùng đặc hiệu cho não mô cầu trên người bệnh và nhất là ở người mang mầm bệnh khơng triệu chứng mà ở đó khơng có gene CtrA, đó là lý do cần thiết gene SodC bổ xung trong việc phát hiện N. meningitidis.
+ Cặp mồi khảo sát theo tác giả:[21]
Kết quả so sánh [phụ lục 6]
+ Tiến hành phản ứng PCR trên 32 chủng N. meningitidis đã phân lập
Trình tự mồi (5’-3’) trên acce.no
GCA CAC TTA GGT GAT TTA CCT GCA T CCA CCC GTG TGG ATC ATA ATA GA
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 M 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 M 28 29 30 31 32 (-)
+ Kết quả của phản ứng PCR
Hình 3.6: Khảo sát gene SodC trên 32 chủng N. meningitidis
Kết quả khảo sát sự xuất hiện của gene Sod C trên 32 chủng N. meningitidis đã phân lập cho thấy có 4/32 chủng khơng thấy xuất hiện band ở vị trí đặc hiệu, điều này chứng tỏ co 4/32 chủng khơng có gene Sod C
Khảo sát bằng các cặp mồi phát hiện nhóm N. Meningitidis
Khảo sát cự có mặt của gene siaDc phát hiện nhóm A của N. meningitidis [31].
+Tiến hành phản ứng PCR trên 32 chủng N. meningitidis đã phân lập Trình tự mồi (5’-3’) trên acce.no
TTTTATTCTTAGATGTTGACGTTTT ATGCCAGAAATGTTTAGGAGTT
1 2 3 4 5 6 7 8 9 M 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 M 25 26 27 28 29 30 31 32
+ Kết quả của phản ứng PCR
Hình 3.7 : Khảo sát gene siaDc phát hiện N. meningitidis nhóm huyết thanh A,
Bằng việc chạy PCR với cặp mồi phát hiện N. meningitidis nhóm A trên
32 chủng đã phân lập cho thấy khơng có mẫu não dương tính với N. meningitidis nhóm A
Khảo sát sự có mặt của gene siaDb phát hiện nhóm B của N. meningitidis
+ Kết quả so sánh trên ngân hàng gene [phụ lục 7]
+ Thực hiện phản ứng PCR:
Trình tự mồi (5’-3’) trên acce.no NC_003112
TTTTTAGCATATTCAGGAAAGG TTCAATGTGGTTGACAAC ATC
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 M 11 12 13 14 15 1617 18 19 20 21 22 23 24 25 26 M 27 28 29 30 31 32
+ Kết quả của phản ứng PCR
Hình 3.8: Khảo sát gene siaDb phát hiện N. meningitidis nhóm B
Kết quả bảng trên cho thấy: khảo sát sự xuất hiện của gene siaDb trên
tổng số 32 chủng N. meningitidis 10 dương tính với N. meningitidis nhóm B
Khảo sát cự có mặt của gene siaDc phát hiện nhóm huyết thanh C của N. meningitidis [31]. + Thực hiện phản ứng PCR Thành phần Trình tự mồi (5’-3’) trên acce.no NC_008767 Thể tích (µl) Nồng độ cuối cùng Sản phẩm (bp) Nước cất khử ion 6,5 381bp wl-37469 TGTGCTAATCCCGCCTGA 0,5 0,2µM Wl-37470 AGAAAGCCGGGAATCGTT 0,5 0,2µM Taq PCR-Master 12,5 Template 5 µl Tổng 25 µl
Chu kỳ nhiệt: Chu kỳ nhiệt: Chu kỳ nhiệt: 950C/5 phút; 30 chu kỳ (950C/30 giây, 560
C/ 45 giây ;720C/1 phút), 720C/5 phút,40C-∞
1 2 3 4 5 6 7 8 9 M 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 2324 M 25 26 27 28 29 30 31
+ Kết quả của phản ứng PCR