peak
T lệ pha động (ACN: H2O v/v)
PI (đơn vị)
Thời gian lƣu
(phút) As
50:50 5,10 13,311 1,404
60:40 4,08 9,750 1,312
70:30 3,06 8,582 0,883
80:20 2,04 7,850 1,472
Ta thấy có sự khác nhau khi thay đổi t lệ thành phần pha động. Nguyên nhân của hiện tƣợng này đƣợc giải thích dựa vào sự thay đổi độ phân cực của pha động khi thay đổi t lệ giữa Acetonitril: đệm. Khi nào độ phân cực của pha động gần với độ phân cực của chất phân tích nhất thì khi đó nó sẽ kéo theo các chất đi ra khỏi cột
tách tốt nhất.
Kết quả cho thấy khi tăng thành phần ACN trong pha động từ 50% đến 80%, độ phân cực của pha động giảm dẫn đến thời gian lƣu của 2,4-D ngắn hơn. Ở tỷ lệ 50:50 thời gian lƣu của chất phân tích trên cột là lớn nhất, tính đối xứng peak kém. Ở tỷ lệ 80:20 tín hiệu đo thấp, tính đối xứng của peak kém. Ở tỷ lệ 70:30, peak chất cân đối với AS= 0,883 thời gian phân tích hợp lý. Do đó chúng tơi chọn tỷ lệ thể tích 70:30 là điều kiện tối ƣu.
3.1.4. Khảo sát ảnh hưởng pH của pha động
Sau khi chọn đƣợc hệ dung môi pha động phù hợp là ACN- đệm t lệ 70:30, chúng tôi khảo sát lại pH của pha động. Trong sắc kí lỏng pha đảo RP-HPLC, pH có vai trị quan trọng, nó ảnh hƣởng tới dạng tồn tại của chất phân tích, dạng tồn tại thay đổi thì thời gian lƣu trữ chất phân tích trên cột cũng thay đổi. Do đó phải lựa chọn pH cho phù hợp với q trình tách và sự an tồn của cột tách. Trong trƣờng hợp này chúng tôi lựa chọn khảo sát pH trong khoảng từ 2,5-4
Tiến hành khảo sát các pH khác nhau sử dụng pha động ACN: CH3COOH (70:30,v/v), với tốc độ dịng là 0,4ml/phút, 2,4-D có nồng độ 5mg/L, thể tích bơm mẫu là 20µl.
Kết quả khảo sát các giá trị pH đƣợc cho trong hình 3.3 và bảng 3.3
pH=2.5
pH=3.5
pH=4
Hình 3.3. S c đ khảo sát pH pha động