3.1. Tối ưu hóathành phần mơi trường lên men
3.1.1. Lựa chọn môi trường lên men cơ sở
Chất dinh dưỡng bao gồm các nguồn C, N, các muối khống là ngun liệu cung cấp cho q trình sinh tổng hợp các chất, các enzyme tạo ra các thành phần của tế bào và phục vụ cho các quá trình trao đổi năng lượng ở vi sinh vật. Vì vậy cần xác định loại mơi trường thích hợp với nồng độ các chất có trong đó, với tỷ lệ C/N nhất định để q trình lên men có thể thu được lượng enzyme cao nhất. Các môi trường MT1, MT2, …, MT10 được lựa chọn cho lên men thử khả năng sinh tổng hợp NK của chủng B. subtilisBD170 tái tổ hợp. Hoạt tính protease và NK đã
được xác định theo các phương pháp đã nêu. Kết quả được thể hiện ở bảng 3.1.
Kết quả đạt được cho thấy, thành phần mơi trường có tác động rất lớn đến khả năng sinh NK làm tan huyết khối của chủng B. subtilisBD170 tái tổ hợp. Chủng có khả năng tổng hợp NK trên tất cả các mơi trường thí nghiệm, tuy nhiên sự tổng hợp NK cao nhất trên môi trường MT2 cho lượng huyết khối tan là 28,2% và hoạt tính protease là 1821 U/ml. Do vậy, môi trường này được lựa chọn là mơi trường cơ sở thích hợp nhất cho các nghiên cứu tiếp theo.
Bảng 3.1. Hoạt tính protease và NK của dịch lên men chủng B. subtilisBD170 tái tổ hợp trong một số môi trường cơ sở
Môi Trường LB MT1 MT2 MT3 MT4 MT5 MT6 MT7 MT8 MT9 MT10
Hoạt độ Protease
(U/ml)
Lượng huyết tan (%) 25,7
a 21,6b 28,2c 7,9d 7,1d 20,5b 16,1e 15,5e 8,3d 10,2f 6,7d
Ghi chú: Sự khác nhau giữa các chữ cái trên cùng một hàng biểu thị sự sai khác có ý nghĩa thống kê (P< 0,05) của giá trị trung bình giữa các nghiệm thức.
3.1.2. Lựa chọn nguồn C
Hai thành phần chủ yếu trong môi trường lên men cung cấp chất dinh dưỡng cho sinh trưởng của vi sinh vật và ảnh hưởng lớn đến sinh tổng hợp NK là C và N. Để xác định nguồn C thích hợp, lần lượt thay thế Maltose trong môi trường MT2 bằng các nguồn C khác thường dùng trong lên men với hàm lượng tính theo C tương đương với Maltose. Các thành phần khác của môi trường được giữ nguyên. Kết quả được trình bày ở bảng 3.2.