Vị trí [27] Tham khảo [28] GL-5
*δCg,h *δCd,e *δHd,f δCa,b δHa,c mult (J = Hz) HMBC H → C 1 35,2 35,7 1,57 m, 1,90 m 35,7 2,96 dt (3,5), 1,06 m 2 28,9 35,2 2,43 m, 2,71 m 28,5 1,70 m,1,64 m 3 77,1 214,5 79,4 3,19 dd (4,5, 11,5) 4, 29, 30 4 40,1 47,7 40,1 5 49,6 51,0 2,17 m 53,2 0,98 m 7, 9 6 37,2 37,8 2,45 m,2,60 m 18,4 1,81 m, 1,52 m 5 7 198,7 198,2 31,1 2,47 m, 2,36 m 5, 8 8 138,9 139,8 167,5 9 164,9 163,4 140,7 10 39,5 40,0 38,8 11 23,8 24,6 2,20 m 201,7 12 30,5 30,9 1,70 m 53,0 2,75 d (16,5) 2,43 d (16,5) 13 45,2 48,6 48,5 14 48,2 45,7 52,9 15 28,3 34,8 2,44 m, 1,77 m 31,1 1,87 m, 1,42 m 16 32,7 29,7 2,01 m, 1,39 m 27,9 2,08 m, 1,49 m 17 50,6 50,1 1,53 m 51,4 1,83 m 18, 21 18 16,1 16,7 0,71 s 17,1 0,88 s 12, 17 19 18,3 18,2 1,24 s 19,4 1,15 s 1, 5, 9, 10 20 37,3 37,6 1,52 m 37,8 1,50 m 21 19,3 20,5 1,05 d (6,0) 19,1 0,96 d (6,5) 17, 20 , 22 22 34,5 33,3 2,38 m, 1,90 m 34,5 1,85 m, 1,05 m 23 29,1 37,3 2,43 m, 1,53 m 28,6 1,84 m, 1,20 m 24 77,1 76,7 4,23 d (12,0) 77,1 3,40 d (10,0) 22, 23, 25, 26, 27 25 74,8 75,3 75,4 26 69,3 69,7 4,17 d (6,0), 4,35 d (6,0) 68,9 3,56 d (11,0) 3,48 d (11,0) 25 27 20,1 21,0 1,68 s 18,8 1,10 s 24, 25, 26 28 27,9 25,8 1,08 s 26,0 1,19 s 8, 13, 14, 15 29 25,2 25,6 1,06 s 28,9 1,03 s 3, 4, 5, 30 30 16,0 18,1 1,25 s 16,4 0,48 s 3, 4, 5, 29
a đo trong CD3OD, b 125 MHz, c 500 MHz
d đo trong C5D5N, e 150 MHz, f 600 MHz
g đo trong CDCl3, h 67,8 MHz,
nguyên tử carbon nối đôi dạng (>C=C<) tại C 167,5 (C-8)/140,7 (C-9). Trên vùng
trường trung bình xuất hiện hai tín hiệu của methine tại C 79,4 (C-3) và 77,1 (C-24), một carbon không liên kết với hydro tại C 75,4 (C-25) và một nhóm methylene tại C 68,9 (C-27), các nhóm này đều cơng hưởng về phía vùng trường thấp hơn so với các nhóm methine, carbon, methylene thơng thường do chịu ảnh hưởng của hiệu ứng thuận từ của nguyên tố oxy.
Vùng trường mạnh xuất hiện bảy tín hiệu của các nhóm methyl tại C 17,1 (C-
18), 19,4 (C-19), 19,1 (C-21), 18,8 (C-26), 26,0 (C-28), 28,9 (C-29) và 16,4 (C-30). Ngồi ra là những tín hiệu của các nhóm methine, methylene thơng thường khác. So sánh phổ 1H NMR và phổ 13C NMR của hợp chất này với hợp chất ganoderiol H thì chúng gần giống nhau [27], chỉ khác nhau ở vị trí nhóm ketone. Hợp chất ganoderiol H có nhóm ketone ở vị trí C-7, cịn hợp chất GL-5 nhóm ketone được xác định ở vị trí C- 11 dựa trên tương tác phổ HMBC, Hb-12 (H 2,75) tương tác lên C-11 (C 201,7) nên tại vị trí C-11 của khung steroid là nhóm ketone. Ngồi ra trên phổ HMBC xuất hiện một số tương tác khác: H-29 (H 1,03) và H-30 (H 0,48) tương tác lên C-3 (C 79,4) cho thấy tại vị trí tại vị trí C-3 của khung steroid có nhóm thế -OH. H-24 (H 3,40) tương tác lên C-25 (C 75,4) , C-26 (C 68,9) cho thấy tại các vị trí C-24, C-25 và C-26 của khung chất đều có nhóm thế -OH.
So sánh phổ 1H NMR và phổ 13C NMR tại vị trí C-24 [77.1 (C-24)/3.40 (d, J = 10.0 Hz, H-24)] của hợp chất GL-5 với hợp chất 24S,25R-dihydroxy-3,7-dioxo-5α- lanost-8-en-26-ol [28] thấy có sự giống nhau về giá trị hằng số tương tác. Vậy tại vị trí C-24 của hợp chất GL-5 có cấu hình là S. So sánh tương tự tại vị trí C-25, Proton H-26 của hợp chất GL-5 có hằng số tương tác [J = 11.0 Hz], cịn ở chất 24S,25R-dihydroxy- 3,7-dioxo-5α-lanost-8-en-26-ol tại H-26 có hằng số tương tác [J = 6.0 Hz], vậy cho gợi ý tại C-26 hợp chất GL-5 có cấu hình là S. Hơn nữa trên phổ NOESY xuất hiện tương tác H-20 (H 1,50) tương tác với Hb-23 (H 1,84), Hb-23 với H-24 (H 3,40), H-24 với Hb-26 (H 3,56), Ha-26 với H-27 (H 1,10). Như vậy tại vị trí C-25 cũng có cấu hình là S.
Hình 26. Cấu trúc hợp chất GL-5
Từ những dữ kiện phân tích trên và so sánh với tài liệu tham khảo cho thấy số liệu phổ hợp chất này phù hợp với một số các vị trí với hợp chất ganoderiol H. Kết hợp với phổ khối lượng xuất hiện pic m/z 513.3552 [M + Na]+ nên hợp chất có khối lượng phân tử M = 490. Vậy khẳng định được hợp chất GL-5 là 3S,24S,25,26-tetrahydroxy- 5α-lanosta-8-en-11-one.
Hình 28. Phổ 13C NMR của hợp chất GL-5
Hình 30. Phổ HSQC của hợp chất GL-5
Hình 32. Phổ COSY của hợp chất GL-5
4.1.6. Hợp chất 6 (GL-6): ganoderma acid AM1 (3β-hdroxy-7,11,15,23-tetraoxo 5α-lannost-8-en-26-oic acid) 5α-lannost-8-en-26-oic acid)
Hình 35. Cấu trúc hợp chất GL-6
Hợp chất GL-6 thu được dưới dạng chất bột màu vàng. Trên phổ 1H-NMR trên vùng trường mạnh xuất hiện tín hiệu đặc trưng của 7 nhóm methyl tại H 0,87 (3H, s, H- 18), 0,90 (3H, s, H-30), 0,99 (3H, d, J = 6,5 Hz, H-21), 1,02 (3H, s, H-29), 1,19 (3H, s, H-27), 1,31 (3H, s, H-27) và 1,57 (3H, s, H-19). Ngồi ra cịn xuất hiện tín hiệu của một proton nhóm methine liên kết trực tiếp với nguyên tử oxy tại H 3,42 (H-3).
Trên phổ 13C-NMR và DEPT xuất hiện tín hiệu của 30 nguyên tử carbon bao gồm 7 nhóm methyl, 7 nhóm methylene, 5 nhóm methine và 11 nhóm ngun tử carbon khơng liên kết với hydro. Trong đó tại vùng trường thấp xuất hiện năm tín hiệu nhóm –C=O trong đó có bốn nhóm ketone tại C 201,3 (C-7), 201,8 (C-11), 210,7 (C-15) và 210,8
(C-23) và một nhóm carboxylic tại C 180,7 (C-26), tín hiệu 2 ngun tử carbon nối đơi dạng (>C=C<) tại C 153,4 (C-8)/147,8 (C-9).
Trên vùng trường trung bình xuất hiện một tín hiệu của nhóm methine tại C 78,2 (C-3), tín hiệu này cộng hưởng phía vùng trường thấp hơn so với các nhóm methine thơng thường vì chịu ảnh hưởng của hiệu ừng thuận từ do liên kết trực tiếp với nguyên tử oxy hút điện tích mạnh. Vùng trường mạnh xuất hiện bảy tín hiệu của các nhóm methyl tại C 17,5 (C-18), 18,1 (C-19), 20,2 (C-21), 16,5 (C-27), 21,9 (C-28), 28,3 (C-29) và
số liệu phổ hợp chất này phù hợp hồn tồn tất cả các vị trí với hợp chất 3β-hydroxy- 7,11,15,23-tetraoxo5α-lanost-8-en-26-oic acid [22].
Xét tiếp trên phổ khối lượng xuất hiện pic mz 515 [M+H] + nên hợp chất có khối lượng phân tử M = 514. Vậy khẳng định được hợp chất GL-6 là 3β-hydroxy-7,11,15,23- tetraoxo5α-lanost-8-en-26-oic acid.
Hình 36. Phổ 1H của hợp chất GL-6
Hình 38. Phổ DEPT của hợp chất GL-6
4.1.7. Hợp chất 7 (GL-7): Ganoderic acid C6 (3β,12β-dihydroxy-7,11,15,23-tetraoxo-5α-lanost-8-en-26-oic acid). tetraoxo-5α-lanost-8-en-26-oic acid).
Hình 40. Cấu trúc của hợp chất GL-7
Hợp chất GL-7 thu được dưới dạng chất bột màu vàng chanh. Trên phổ 1H-NMR trên vùng trường mạnh xuất hiện tín hiệu đặc trưng của 7 nhóm methyl tại H 0,70 (3H, s, H-18), 0,91 (3H, s, H-30), 1,02 (3H, s, H-29), 1,12 (3H, d, J = 6,5 Hz, H-21), 1,18 (3H, brs, H-27), 1,62 (3H, s, H-19) và 1,68 (3H, s, H-28), những tín hiệu của nhóm methine, methylene dịch chuyển trong vùng trường yếu hơn từ H 1,27 → 2,86. Ngoài ra cịn xuất hiện tín hiệu của hai proton nhóm methine liên kết trực tiếp với nguyên tử oxy tại H 3,42 (H-3) và 4,60 (1H, s, H-12).
Trên phổ 13C-NMR và DEPT xuất hiện tín hiệu của 30 nguyên tử carbon bao gồm 7 nhóm methyl, 6 nhóm methylene, 6 nhóm methine và 11 nhóm ngun tử carbon khơng liên kết với hydro. Trong đó tại vùng trường thấp xuất hiện năm tín hiệu nhóm –C=O trong đó có bốn nhóm carbonyl tại C 201,4 (C-7), 202,9 (C-11), 209,6 (C-15), 211,2 (C- 23) và một nhóm carboxylic tại C 180,0 (C-26), tín hiệu 2 ngun tử carbon nối đơi
dạng (>C=C<) tại C 147,3 (C-8)/137,8 (C-9). Trên vùng trường trung bình xuất hiện hai tín hiệu của nhóm oxymethine tại C 78,1 (C-3) và 78,9 (C-12).
Vùng trường mạnh xuất hiện của 7 tín hiệu của các nhóm methyl tại C 11,5 (C- 18), 16,2 (C-19), 21,9 (C-21), 17,5 (C-27), 20,7 (C-28), 28,3 (C-29) và 16,1 (C-30). Ngồi ra những tín hiệu của các nhóm methine và methylene dịch chuyển trong vùng
trường từ C 28,0 → 59,2. Trên phổ HMBC xuất hiện những tương tác chính: H-29, 30 tương tác lên C-3, H-18 tương tác lên C-12 cho phép xác định được vị trí hai nhóm hydroxy; H-5 tương tác lên C-7, H-12 lên C-11, H-28 lên C-15, H-20 lên C-23 cho phép xác định được vị trí của 4 nhóm ketonee; H-6, 28 lên C-8, H5, 19 lên C-9 cho phép xác định được vị trí liên kết đơi trên khung lanostane; H-25, 27 tương tác lên C-26, cho phép xác định được vị trí nhóm carboxylic.
Từ những dữ kiện phân tích trên và so sánh với tài liệu tham khảo cho thấy số liệu phổ hợp chất này phù hợp hoàn toàn tất cả các vị trí với hợp chất 3β,12-dihydroxy- 7,11,15,23-tetraoxo-5α-lanost-8-en-26-oic acid [15].
Bên cạnh đó phân tích trên phổ khối lượng xuất hiện pic mz 553 [M+Na]+ nên hợp chất có khối lượng phân tử M = 530. Vậy khẳng định được hợp chất GL-7 là 3β,12- dihydroxy-7,11,15,23-tetraoxo-5α-lanost-8-en-26-oic acid.
Hình 42. Phổ 13C NMR của hợp chất GL-7
Hình 44. Phổ HSQC của hợp chất GL-7
Hình 46. Phổ MS của hợp chất GL-7 4.1.8. Hợp chất 8 (GL-8): ganoderic acid C
Hình 47. Cấu trúc của hợp chất GL-8
Hợp chất GL-8 thu được dưới dạng chất kết tinh hình kim, màu trắng. Trên phổ
1H-NMR trên vùng trường mạnh xuất hiện tín hiệu đặc trưng của 7 nhóm methyl tại H 0,83 (3H, s, H-19), 0,86 (3H, d, J = 6,0 Hz, H-21), 0,89 (3H, s, H-19), 1,04 (3H, s, H- 30), 1,05 (3H, s, H-29), 1,21 (3H, d, J = 7,0 Hz, H-27) và 1,26 (3H, s, H-28), những tín hiệu của 3 nhóm methine tại H 3,27 (1H, t, J = 7,5 Hz, H-3), 4,52 (1H, m, H-15), 4,55 (1H, m, H-7). Các tín hiệu methine này dịch chuyển về vùng trường yếu hơn so với các
nhóm methine thơng thường khác do nó liên kết trực tiếp với nhóm hút điện tử mạnh và chịu ảnh hưởng của hiệu ứng thuận từ như nhóm OH.
Trên phổ 13C-NMR và DEPT xuất hiện tín hiệu của 30 nguyên tử carbon bao gồm 7 nhóm methyl, 8 nhóm methylen, 7 nhóm methine và 8 nhóm nguyên tử carbon khơng liên kết với hydro. Trong đó tại vùng trường yếu xuất hiện ba tín hiệu nhóm –C=O trong đó có hai nhóm carbonyl tại C 200,2 (C-11), 209,3 (C-23) và một nhóm cacboxyl tại C 177,8 (C-26), trong vùng trường thấp xuất hiện hai tín hiệu của liên kết đôi tại C 160,3 (C-8), 140,9 (C-9). Trên vùng trường trung bình xuất hiện ba tín hiệu của nhóm oxy methine tại C 77,6 (C-3), 67,2 (C-7) và 71,1 (C-15). Bên cạnh đó vùng trường mạnh
xuất hiện của 7 tín hiệu của các nhóm methyl tại C 16,4, (C-18), 16,6 (C-19), 20,3 (C- 21), 16,6 (C-27), 18,6 (C-28), 27,3 (C-29) và 15,2 (C-30). Ngồi ra những tín hiệu của các nhóm methine và methylene dịch chuyển trong vung trường từ C 28,0 → 59,2. Từ những dữ kiện phân tích trên và so sánh với tài liệu tham khảo cho thấy số liệu phổ hợp chất này phù hợp hồn tồn tất cả các vị trí với hợp chất ganoderic acid C [17].
Tiếp tục phân tích trên phổ khối lượng xuất hiện pic m/z 553 [M+Cl]- nên hợp chất có khối lượng phân tử M = 518. Vậy khẳng định được hợp chất GL-8 là acid ganoderic C.
Hình 49. Phổ 13C NMR của hợp chất GL-8
Hình 51. Phổ MS của hợp chất GL-8
4.1.9. Hợp chất 9 (GL-9): Ganodermadiol (Lanosta-7,9(11),24-triene-3,26-diol)
Hình 52. Cấu trúc hợp chất GL-9
Hợp chất GL-9 thu được dưới dạng chất kết tinh hình kim, màu trắng. Trên phổ
1H-NMR trên vùng trường mạnh xuất hiện 7 tín hiệu đặc trưng của các nhóm methyl tại
H 0,56 (3H, s, H-18), 0,88 (6H, s, H-28, 30), 0,92 (3H, d, J = 6,5 Hz, H-21), 0,98 (3H,
s, H-19), 1,00 (3H, s, H-29) và 1,67 (3H, s, H-27). Dịch về phía vùng trường trung bình xuất hiện hai tín hiệu proton nhóm methin liên kết trực tiếp với nguyên tử oxy tại H 3,25 (H-3) và 4,00 (H-26). Vùng trường yếu xuất hiện 3 tín hiệu của ba proton olefin tại H
5,32 (1H, d, J = 6,0 Hz, H 24), 5,40 (1H, t, J = 6,0 Hz, H-24) và 5,47 (1H, d, J = 4,5 Hz, H-7). Ngồi ra những tín hiệu dịch chuyển trong vùng trường H 0,82 – 2,22 làn những tín hiệu của các nhóm methylene và methine.
Trên phổ 13C-NMR và DEPT xuất hiện 30 tín hiệu của 30 nhóm nguyên tử carbon bao gồm 7 nhóm methyl, 9 nhóm methylene, 6 nhóm methine và 7 nhóm nguyên tử carbon không liên kết với hydro. Trong đó tại vùng trường thấp xuất hiện 6 tín hiệu carbon của 3 cặp liên kết đôi dạng (–CH=C<) tại C 120,2 (C-7)/142,6 (C-8), 145,9 (C- 9)/116,2 (C-11) và 126,9 (C-24)/134,3 (C-25). Trên vùng trường trung bình xuất hiện tín hiệu của nhóm methine tại C 78,9 (C-3) và và nhóm methylene tại C 69,0 (C-26). Hai tín hiệu này cộng hưởng vùng trường thấp hơn so với các nhóm methine, methylene thông thường do chịu ảnh hưởng của hiệu ứng thuận từ vì chúng liên kết trực tiếp nguyên tử oxy hút điện tích mạnh. Vùng trường mạnh xuất hiện 7 tín hiệu singlet đặc trưng của các nhóm methyl tại C 15,6 (C-18), 22,7 (C-19), 36,0 (C-20), 18,4 (C-21), 35,9 (C-22), 24,5 (C-23), 126,9 (C-24), 134,3 (C-25), 69,1 (C-26), 13,6 (C-27), 25,5 (C-28), 28,1 (C- 29) và 15,7 (C-30).
Từ những dữ kiện phân tích trên và so sánh với tài liệu tham khảo cho thấy số liệu phổ hợp chất này phù hợp hoàn toàn tất cả các vị trí với hợp chất lanosta-7,9(11),24- triene-3,26-diol [9]. Cùng với việc phân tích phổ khối lượng xuất hiện pic m/z 463 [M+Na]+ nên hợp chất có khối lượng phân tử M = 440. Vậy khẳng định được hợp chất GL-9 là lanosta-7,9(11),24-triene-3,26-diol.
Hình 54. Phổ 13C NMR của hợp chất GL-9
Hình 56. Phổ MS của hợp chất GL-9
4.1.10. Hợp chất 10 (GL-10): methyl 3β-hydroxy-12β-acetoxy-7,11,15,23-tetraoxo- 5α-lanosta-8-en-26-oate
Hình 57. Cấu trúc của hợp chất GL-10
Hợp chất GL-10 thu được dưới dạng chất bột màu vàng nhạt. Trên phổ 1H-NMR trên vùng trường mạnh xuất hiện tám tín hiệu đặc trưng của các nhóm methyl tại H 0,83 (3H, s, H-18), 0,90 (3H, s, H-30), 1,00 (3H, d, J = 6,0 Hz, H-21), 1,02 (3H, s, H-29),
1,19 (3H, d, J = 7,0 Hz, H-27), 1,36 (3H, s, H-19), 1,73 (3H, s, H-28) và 2,23 (3H, s, CH3CO). Dịch về phía vùng trường yếu hơn xuất hiện một tín hiệu singlet đặc trưng cho nhóm methoxy tại H 3,35 (3H, s, COOCH3) và hai tín hiệu methine tại H 3,24 (1H, m, H-3) và 5,71 (1H, s, H-12), hai tín hiệu này xuất hiện về phía vùng trường thấp hơn so với các nhóm methine thơng thường do chúng liên kết trực tiếp với nhóm hút điện tử mạnh của ngun tử oxy. Ngồi ra những tín hiệu của nhóm methine, methylen thơng thường khác dịch chuyển trong vùng trường mạnh hơn từ H 1,17 → 2,90.
Trên phổ 13C-NMR và DEPT của hợp chất GL-10 xuất hiện 33 tín hiệu của các nhóm ngun tử carbon bao gồm 9 nhóm methyl, 6 nhóm methylene, 6 nhóm methine và 12 nhóm nguyên tử carbon khơng liên kết với hydro. Trong đó trên vùng trường thấp xuất hiện sáu tín hiệu nhóm –C=O trong đó có bốn nhóm carbonyl tại C 201,1 (C-7),
195,5 (C-11), 205,6 (C-15), 210,5 (C-23) và hai nhóm cacboxylic tại C 179,5 (C-26) và
C 171,6 (CH3CO), tín hiệu 2 nguyên tử carbon nối đôi dạng (>C=C<) tại C 153,2 (C-
8)/147,1 (C-9).
Trên vùng trường trung bình xuất hiện hai tín hiệu của nhóm oxymethine tại C
78,0 (C-3) và 80,7 (C-12), Hai nhóm methine này chịu ảnh hưởng của hiệu ứng thuận từ nên cộng hưởng ở vùng trường thấp hơn so với các tín hiệu methien thơng thường khác. Dịch chuyển về phía vùng trường mạnh hơn xuất hiện tín hiệu methyl đặc trừng cho nhóm (COOCH3) tại C 49,8. Vùng trường mạnh xuất hiện của 8 tín hiệu của các nhóm methyl tại C 12,6 (C-18), 18,2 (C-19), 22,1 (C-21), 17,5 (C-27), 21,4 (C-28), 28,2 (C- 29), 16,1 (C-30) và 28,0 (CH3CO). Ngồi ra những tín hiệu của các nhóm methine và methylene dịch chuyển trong vùng trường từ C 28,0 → 59,6. Từ những dữ kiện phân tích trên và so sánh với tài liệu tham khảo cho thấy số liệu phổ hợp chất này phù hợp hoàn toàn tất cả các vị trí với hợp chất methyl 3β-hydroxy-12β-acetoxy-7,11,15,23- tetraoxo-5α-lanost-8-en-26-oate [13].
Kết hợp với phổ khối lượng xuất hiện pic m/z 609 [M+Na]+ nên hợp chất có khối lượng phân tử M = 586. Vậy khẳng định được hợp chất GL-10 là methyl 3β-hydroxy- 12β-acetoxy-7,11,15,23-tetraoxo-5α-lanosta-8-en-26-oate.
Hình 58. Phổ 1H của hợp chất GL-10
Hình 60. Phổ DEPT của hợp chất GL-10