10, p16INK4α, RASSF1A và DAPK
3.4. Khảo sát tính chất biểu hiện miR-21, miR-141 và miR-155 trên bệnh nhân UTVH
UTVH
Tổng số miRNA của mẫu sinh thiết UTVH và mẫu dịch phết vòm họng được tách chiết bằng bộ kit mirVanaTMmiRNA Isolation Kit (Invitrogen, Cat: AM1560). cDNA được chuyển đổi bằng bộ kit TaqMan® Advanced miRNA cDNA Synthesis Kit (ThermoFisher Scientific, Cat: 28007). Nồng độ cDNA được điều chỉnh nồng độ/hàm lượng từ hai nguồn mẫu sinh thiết mô và dịch phết tế bào về tương đương nhau, nằm trong khoảng 200 ng để thực hiện phản ứng Realtime PCR. Việc kiểm tra sự biểu hiện của miR-21, miR-141 và miR-155 được thực hiện với bộ kit TaqMan™ Pri-miRNA Assays hsa-mir-155, hsa-mir-21, hsa-mir-141, Thermo Fisher Scientific). Chứng nội cho phản ứng được sử dụng là U6snRNA. Kết quả kiểm tra chứng nội ở các mẫu thí nghiệm được thể hiện ở hình 3.15.
(A) (B)
Hình 3.15. Kết quả khuếch đại gene chứng nội U6snRNA ở các mẫu thí nghiệm
(A) chu kỳ khuếch đại; (B) Đường cong nóng chảy của gene U6snRNA
Dựa trên kết quả phân tích, chu kỳ ngưỡng của U6snRNA ở mẫu sinh thiết UTVH và mẫu lành lần lượt là: 29,41 ± 1,56; 30,11 ± 1,61. Điều này cũng đồng thời khẳng định lượng vật liệu di truyền ở hai nguồn mẫu là rất tương đương nhau, đảm bảo cho các tiêu chí phân tích sự khác nhau về tính biểu hiện của các micro-RNA mục tiêu về sau này là rất đáng tin cậy giữa hai nguồn mẫu ca – chứng. Đồng thời, chúng tôi không ghi nhận
130
được sự khác biệt có ý nghĩa giữa giá trị trung bình giá trị chu kỳ ngưỡng của U6snRNA ở mẫu sinh thiết UTVH và mẫu lành (p = 0,53). Do đó, việc sử dụng U6snRNA làm chứng nội là rất phù hợp để tính toán sự biểu hiện của miR-21, miR-141 và miR-155 ở các mẫu thí nghiệm.
Kết quả khuếch đại của gene miR-21, miR-141 và miR-155 được thể hiện ở hình 3.16.
(A) (B) (C)
Hình 3.16. Kết quả Real-time RT-PCR (A) miR-155, (B) miR-21, và (C) miR-141 trên
một số mẫu thực nghiệm
Kết quả khảo sát sự biểu hiện của miR-21, miR-141 và miR-155 trên các mẫu