2. CÁC CÔNG TRÌNH NGHIÊN CỨU IÊN QUAN
3.1. Phƣơng pháp xử lý mẫu
Do ảnh hưởng của chất nền, quá trình định lượng các chất phụ gia thực phẩm trong hầu hết các trường hợp cần bước xử lý mẫu trước khi phân tích. Các mẫu thực phẩm được đặc trưng bởi sự phức tạp của nền mẫu. Carbohydrate, protein, lipid, khoáng chất, chất bảo quản, màu, chất làm đặc và vitamin có thể tồn tại riêng lẻ hoặc song song trong một nền mẫu thực phẩm, vốn có thể ảnh hưởng đến việc xác định Coumarin. Quy trình xử lý mẫu chủ yếu bao gồm ba bước. Thứ nhất, mẫu cần được làm đồng nhất. Thứ hai, Coumarin được chiết xuất từ nền mẫu thực phẩm. Thứ ba, làm sạch thêm dịch chiết trước khi phân tích. Bước thứ tư và bước cuối cùng (nếu cần) có thể là cô đặc trước phần chiết xuất và pha loãng lại với dung môi thích hợp.
Một số phương pháp làm sạch mẫu phổ biến bao gồm chiết pha rắn (SPE), thẩm tách, chiết lỏng-lỏng (LLE), kết tủa và lọc. Mẫu có thể cần ly tâm trước khi phân tích để được làm sạch tốt hơn. Trong đó, phương pháp SPE là một trong những phương pháp phổ biến nhất hiện nay. Kỹ thuật chiết pha rắn phân đoạn các hợp chất phân tích dựa trên ái lực của chúng với pha tĩnh. Quy trình chiết pha rắn cơ bản chủ yếu bao gồm bốn bước. Đầu tiên là nhồi và cân bằng cột, tiếp theo là nạp dịch chiết thực phẩm, rửa giải các chất nhiễu và cuối cùng là rửa giải các chất phân tích với các loại dung môi thích hợp. Các thông số khảo sát cần lưu ý là loại pha rắn, dung môi, độ pH và tốc độ rửa giải.
Trong các nghiên cứu định lượng Coumarin được công bố, nhiều loại nền mẫu thực phẩm đã được xử lý thích bằng các phương pháp thích hợp trước khi phân tích. Nước giải khát Cola thường được khử khí trong bể siêu âm (Demiralay và cộng sự, 2006). Quy trình tương tự cũng áp dụng cho đa số đồ uống có ga. Quá trình khử khí được thực hiện bằng siêu âm, sục khí
nitơ hoặc trong môi trường chân không. Các mẫu kẹo cao su được chiết bằng hỗn hợp axit axetic băng, nước và cloroform. Các mẫu kẹo cứng hoặc mềm được lắc với nước cho đến khi hòa tan (Biemer, 1989). Sữa và các sản phẩm từ sữa được đồng nhất trước khi phân tích và pha loãng với nước cất. Hỗn hợp được khuấy kỹ và sau đó lọc (Ni và cộng sự, 2009). Coumarin được xác định trong các loại mứt ăn kiêng bằng cách trộn với nước và đun. Sau đó, hỗn hợp được pha loãng đến một thể tích nhất định và lọc (Boyce, 1999). Mẫu trái cây đã qua xử lý bảo quản được xay nhuyễn và đồng nhất. Sau đó, nước được thêm vào và hỗn hợp tạo thành được chiết xuất bằng sóng siêu âm và pha loãng với nước đến một thể tích nhất định (Chen và cộng sự, 2001). Khi phân tích mẫu nước trái cây, cần phải thực hiện bước ly tâm trước khi lọc. Các nền mẫu tương đối đơn giản như chất làm ngọt lỏng, có thể chỉ cần pha loãng hoặc hòa tan trong nước khử ion hoặc trong dung dịch đệm thích hợp [7], [8], [11], [13].