3. Nội dung nghiên cứu gồm
3.3. Xác định gen CagA của vi khuẩn H.pylori bằng Nested PCR
Tiếp theo việc phát hiện H. pylori, chúng tôi tiếp tục xác định có hay không gen CagA trong các mẫu bệnh phẩm dịch dạ dày. Để thực hiện điều này, chúng tôi đã tiến hành phản ứng Nested PCR để khuếch đại đoạn gen CagA.
Hình 3.5. Hình ảnh điện di sản phẩm PCR gen CagA vòng 1. Các giếng từ 1 - 3 tương ứng với 3 chủng 1,2,3. M: Marker 1kb, ĐC+: Đối chứng dương
Kết quả trình bày trong hình 3.5 cho thấy, với cặp mồi thứ nhất (PCR vòng 1), chỉ có mẫu đối chứng có một đoạn DNA được khuếch đại với kích thước xấp xỉ 430bp theo như tính toán lý thuyết.
Từ kết quả PCR vòng 1, sản phẩm PCR của các mẫu bệnh phẩm 1,2,3 và đối chứng được pha loãng về nồng độ 1ng/µl và tiến hành PCR vòng 2 với cặp mồi CagAF2/CagAR2. Kết quả điện di sản phẩm PCR vòng 2 được trình bày trong hình 3.6.
Hình 3.6. Hình ảnh điện di sản phẩm PCR gen CagA vòng 2. M: Marker 1kb. Các giếng từ 1 -3 là các mẫu bệnh phẩm
Từ kết quả điện di trong hình 3.6 cho thấy rằng, cả 3 mẫu bệnh phẩm cũng như đối chứng đều cho kết quả dương tính với gen CagA
Hình 3.7. Hình ảnh điện di sản phẩm PCR khuếch đại DNA đặc trưng của vi khuẩn H. pylori (vòng 2) từ một số mẫu bệnh phẩm.
M: Marker 100bp; 23 – 29: số mẫu bệnh phẩm
Kết quả hình 3.7 điện di sản phẩm PCR khuếch đại DNA đặc trưng của vi khuẩn H. pylori (vòng 2) ở các mẫu bệnh phẩm 23 đến mẫu bệnh phẩm 29 cho thấy chỉ có mẫu bệnh số 24, 29 âm tính với gen CagA, các mẫu còn lại cho kết quả dương tính với gen CagA.
Tương tự với hình 3.8, hình ảnh điện di sản phẩm PCR khuếch đại DNA đặc trưng của vi khuẩn H. pylori (vòng 2) mẫu bệnh phẩm 1 đến mẫu 4 dương tính với CagA, mẫu số 5 và 6 âm tính. Kết quả này đã cho thấy phản ứng Nested PCR đã khuếch đại một cách hiệu quả gen CagA ở các mẫu bệnh phẩm là dịch dạ dày.
Hình 3.8. Hình ảnh điện di sản phẩm PCR khuếch đại DNA đặc trưng của vi khuẩn H. pylori (vòng 2) từ một số mẫu bệnh phẩm. M: Marker 1kb
Báo cáo trước đó của Hirai đã sử dụng các cặp mồi này để phát hiện các chủng dương tính với gen CagA trong các mẫu phân [26]. Tương tự như vậy, cũng bằng kỹ thuật Nested PCR với độ nhạy cao, được nghiên cứu sử dụng để chẩn đoán chủng H. pylori mang gen CagA trong các mẫu bệnh phẩm gồm mẫu sinh thiết dạ dày, mẫu nước tiểu [48].