Hợp chất 2 được phân lập dưới dạng dầu, không màu. Trên phổ 1H-NMR (hình 4.1.2a) xuất hiện các tín hiệu của 03 nhóm methyl tại H 0,71; 0,87 và 0,96. Phổ 13C-NMR (hình 4.1.2a) xuất hiện tín hiệu của 15 carbon bao gồm 05 methine carbon, 04 carbon methylene lai hóa sp3, 01 exomethylene carbon, 03 methyl carbon và 02 carbon bậc 4. Phân tích các tương tác 1H-13C thu được từ việc phân tích phổ HSQC (hình 4.1.2c) của hợp chất 2 cho thấy các tín hiệu cộng hưởng của proton H 0,87 (H3-12) với C 16,22 (C-12), giữa proton H 0,96 (H3-13) với C 21,1 (C-13) và giữa proton H 2,24 (H-11) với C 26,05 (C-11), cùng với hằng số tương tác tại H3-12 và H3-13 ở dạng doublet và độ chuyển dịch hóa học của các vị trí này cho thấy sự có mặt của nhóm isopropryl. Phân tích tiếp các tín hiệu cộng hưởng
giữa proton H 0,71 (H3-14) với C 11,6 (C-14) cùng với hằng số tương tác ở dạng singlet có thể nhận dạng đây là nhóm tert-methyl. Các tín hiệu cộng hưởng giữa proton H 4,75 (H-15a) và 5,02 (H-15b) với C 107,82 cùng với sự có mặt của carbon bậc 4 tại C 146,26 (C-4) cho thấy sự có mặt của liên kết đôi ngoại vòng,
tương ứng với sự có mặt của nhóm exomethylen trên phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton. Tín hiệu cộng hưởng giữa proton H 3,43 với C 79,06 (C-1), giữa proton
H 3,72 với C 67,04 (C-6) cho thấy sự có mặt của methin carbon có liên kết trực tiếp với oxy, xác định sự có mặt của 02 nhóm oxymethine trong phân tử.
Hình 4.1.2a. Phổ 1
H-NMR của hợp chất 2
Hình 4.1.2b. Phổ 13
Hình 4.1.2c. Phổ HSQC của hợp chất 2
Tiếp tục phân tích tiếp các tương tác 1H-13C thu được từ việc phân tích phổ HSQC (hình 4.1.2c) của hợp chất 2, các số liệu thu được trình bày trong bảng 4.2
Bảng 4.2 Số liệu phổ NMR của hợp chất 2 C aC Cb,c Hb,d dạng pic (J = Hz) HMBC (1H 13C) 1 79,0 79,06 3,43 dd (4,5; 11,5) 2 31,9 31,95 1,55 m/1,85 m 3 35,1 35,12 2,07 dt (5,5; 13,5) 2,33 ddd (2,0; 5,0; 13,5) 4 146,2 146,26 - 5 55,9 55,93 1,75 d (10,0) 6 67,0 67,04 3,72 t (10,0) 7 49,3 49,37 1,28 m 8 18,2 18,21 1,23 m/1,53 m 9 36,3 36,33 1,17 m/1,92 m 10 41,7 41,72 - 11 26,0 26,05 2,24 m
12 16,2 16,22 0,87 d (7,0) 7, 13
13 21,1 21,10 0,96 d (7,0) 7, 11, 12
14 11,6 11,60 0,71 s 1, 9, 10
15 107,8 107,82 4.75 br s/5.02 br s 3, 4, 5
aCcủa hợp chất 4(15)-eudesmene-lβ,6-diol, b đo trong CDCl3, c125 MHz, d500 MHz
Các phân tích trên phổ HMBC (hình 4.1.2d) cho thấy: Tương tác HMBC giữa proton H3-12 (H 0,87) với C-7 (C 49,37); C-11 (C 26,05); C-13 (C 21,10); Tương tác giữa proton H3-13 (H 1,25) với C-7 (C 49,37), C-11 (C 26,05), C-12 (C 16,22); Tương tác giữa proton H3-14 (H 0,71) với C-1 (C 79,06), C-5 (C
55,93), C-9 (C 36,33) và C-10 (C 41,72). Tương tác giữa proton H-15a (H 4,75)/ H-15b (H 5,02) với C-5 (C 55,93), C-3 (C 35,12). Cùng với các tương tác HMBC khác cho phép xác định sự có mặt của nhóm carbon bậc 3 mang oxy tại C-1, C-6, nhóm isopropyl và nhóm methyl góc liên kết với carbon bậc 4 tại vị trí C-10, nhóm methine carbon tại vị trí C-5, C-7. Từ các dữ kiện nêu trên có thể khẳng định bộ khung của hợp chất ở dạng sesquiterpene eudesmane [9], các vị trí lập thể của hợp chất này là C-1, C-5, C-6, C-7 và C-10. Có thể nhận thấy hợp chất có hai vòng cyclohexane, liên kết giữa hai vòng cyclohexane tại vị trí C-5 và C-10, vị trí tert- methyl ở C-10 ở dạng . Do đó tùy thuộc vào lập thể của proton H-5 ở dạng hoặc , hình thành dạng cis hoặc dạng trans tương tự như đối với cis-decalin và trans- decalin. Tiếp tục phân tích độ chuyển dịch hóa học của proton H-5 với H 1,75 (1H; d; j= 10 Hz) và proton H-6 với H 3,72 (1H; t; j=10 Hz), với hằng số tương tác giữa proton H-5 và H-6 cho thấy hai proton có góc lệch >900, và hai proton này ở hai vị trí đối ngược nhau (Trong trường hợp hai proton này cùng phía, góc lệch trong khoảng 600 sẽ không làm xuất hiện được hằng số tương tác lớn trên proton H- 6 theo tính toán lý thuyết của phương trình Karplus) [12]. Đồng thời với hằng số tương tác proton H-6 ở dạng triplet cho thấy sẽ tồn tại đồng thời hai giá trị J lớn tương ứng với J5,6diaxial và J6,7diaxial minh chứng này cho thấy H-6 cũng ở vị trí ngược lại so với H-7, điều này cho thấy H-5 và H-7 ở cùng phía.
Hình 4.1.2d. Phổ HMBC của hợp chất 2
Tác giả Cocker và cộng sự [9] đã chứng minh các hợp chất eudesmane sesquiterpene có nhóm isopropyl ở vị trí equatorial đối với vòng cyclohexane. Nếu như nhóm isopropyl ở dạng equatorial đối với vòng cyclohexane vậy có thể khẳng định H-7 cùng phía với H-5 và ở vị trí axial, tương ứng với H-6 ở vị trí axial và ngược phía với H-5, H-7. Hiệu ứng -gauche của nhóm hydroxy tại vị trí C-1 và ảnh hưởng hiệu ứng không gian của proton H-5 ở dạng hoặc trực tiếp lên độ chuyển dịch hóa học của nhóm methyl bậc 3 liên kết trực tiếp với carbon bậc 4 tại C-10 đã được chứng minh bởi các tác giả [5][ 27][ 31][ 35], trong khi hai vòng cyclohexane liên kết ở dạng cis thì độ chuyển dịch hóa học 13C của nhóm methyl C- 14 dịch chuyển về phía trường thấp hơn với C >20 ppm [5][ 27][ 31][ 35]. Trong khi đó vòng cyclohexane liên kết ở kiểu trans thì độ chuyển dịch hóa học 13C của nhóm methyl C-14 dịch chuyển về phía trường cao với C <20 ppm tính cả hiệu ứng của -gauche của nhóm hydroxy tại vị trí C-1 ở dạng hoặc [5][ 27][ 31][ 35]. Đối với hợp chất 2, độ chuyển dịch hóa học của 13
C tại C-14 tương ứng là C 11,60 cho thấy liên kết giữa 2 vòng cyclohexane ở kiểu trans, khi đó cả H-5 và H-7 ở dạng , H-6 ở dạng . Đồng thời độ chuyển dịch hóa học 13C tại C-1 (C 79,06), độ
chuyển dịch hóa học của proton tại H-1 (H 3,43 ) phù hợp hoàn toàn với các giá trị về độ chuyển dịch hóa học tương ứng của hợp chất 4(15)-eudesmene-lβ, 6-diol, các kết quả so sánh được trình bày trên bảng 4.2. Từ các dẫn liệu nêu trên, có thể khẳng định hợp chất 2 là 4(15)-eudesmene-lβ, 6-diol (hình4.1.2e).
Hình 4.1.2e. Các tương tác HMBC chính và cấu trúc hóa học của hợp chất 2