Phần 3 Vật liệu, nội dung và phương pháp nghiên cứu
3.1. Vật liệu nghiên cứu
3.1.2. Nguyên liệu, hóa chất nghiên cứu
- Vắc xin viêm gan vịt - Trứng vịt có tinh.
- Trứng gà Leghorn có phơi đã ấp được 9 ngày - Vịt xiêm 1 - 3 ngày tuổi đạt tiêu chuẩn thí nghiệm. - Mơi trường ni cấy tế bào Eagle MEM.
- Trypsin, Phenol red, NaHCO3, Na2HPO4,... Các chất dùng để tách ARN của virus: - Nito lỏng
- Trizol (Life Technologies): 1ml
- Men sao chép ngược: Reverse Transcriptase. - SDS 0,5%.......
- Bộ kit tách chiết RNA tổng số, “QIAamp Viral Mini kit (QIAGEN Inc, USA)” và hoá chất do hãng QIAGEN cung cấp.
- Bộ kit dùng cho phản ứng RT-PCR do hãng Invitrogen cung cấp. - Bộ kit dùng cho phản ứng chuyển đổi cDNA hãng Fermentas cung cấp.
- Bộ kit dùng cho phản ứng PCR do hãng Fermentas cung cấp.
- Bộ kit dùng để tinh sạch sản phẩm PCR/RT-PCR do hãng QIAGEN và BIOONER cung cấp.
- Bộ kit dùng để tách DNA từ thạch agarose ”MinElute Gel Extraction Kit” do hãng QIAGEN cung cấp.
- Bộ kit tách dòng “TA-cloning kit” do hãng Invitrogen cung cấp. - Kháng sinh kanamycin, ampicilin (50 mg/ml), X-gal, cồn tuyệt đối.
- Bộ kit tách DNA plasmid tái tổ hợp, “QIAprep Spin Miniprep Kit” do hãng QIAGEN cung cấp.
- Bộ kit dùng cho phản ứng PCR giải trình tự.
- Bộ kit dùng để tinh sạch sản phẩm PCR giải trình tự. - Các dung dịch sử dụng trong tách dòng.
- Các dung dịch dùng để điện di trên thạch agarose
Các chất tham gia phản ứng PCR có trong bộ Kit của Hãng Qiagen:
- RT Buffer. - RNase inhibitor
- AMV-RT (enzym sao chép ngược) - 25 mM MgCl2.
- Taq DNA polymerase - DNA Marker.