Phần 3 Đối tượng, nội dung và phương pháp nghiên cứu
3.1. Đối tượng nghiên cứu
3.1.1. Địa điểm nghiên cứu
Trạm Nghiên cứu và sản xuất tinh đông lạnh Moncada (Tản Lĩnh, Ba Vì, Hà Nội) .
3.1.2. Thời gian nghiên cứu
- Từ tháng 01/2016 đến tháng 04/2017.
- Đồng thời thu thập số liệu một số chỉ tiêu số lượng, chất lượng tinh dịch và khả năng sản xuất tinh đông lạnh của bò đực giống HF từ tháng 1/2013 đến tháng 12/2016 trong khuôn khổ đề tài cấp Bộ “Nghiên cứu tiêu chuẩn, khẩu phần thức ăn thích hợp nhằm nâng cao khả năng sản xuất tinh của bò đực giống Holstien Friensian tại Việt Nam”.
3.1.3. Đối tượng nghiên cứu
Đối tượng nghiên cứu trong đề tài là bò đực giống HF thuần, trưởng thành, tuổi (5 - 7 tuổi), khối lượng cơ thể (từ 900 - 1.100kg), đang sản xuất tinh và tương đối đồng đều về năng suất và chất lượng tinh.
3.1.4. Điều kiện chăm sóc nuôi dưỡng bò thí nghiệm
- Tất cả bò đực giống sử dụng trong nghiên cứu này đều được chăm sóc theo cùng quy trình kỹ thuật đáp ứng đầy đủ tiêu chí theo quy định của Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn, phê duyệt các chỉ tiêu định mức kinh tế kỹ thuật chăn nuôi gia súc gia cầm giống gốc.
- Mỗi cá thể bò đực được nuôi trong một ô chuồng riêng với diện tích là 45m2, trong đó gồm 20m2 chuồng có mái che và 25m2 sân chơi không mái, có máng ăn và máng uống riêng cho từng con. Quản lý cá thể và phòng bệnh cho đàn bò được thực hiện nghiêm ngặt, kiểm tra thú y định kỳ 2 lần/năm.
- Khẩu phần thức ăn thí nghiệm được chia đều làm 2 bữa/ngày, thức ăn tinh và thóc mầm được cho ăn trước, thức ăn xanh/cỏ khô cho ăn sau.
- Chế độ khai thác tinh 2 lần/tuần và vận động, tắm chải được áp dụng như nhau cho tất cả các bò đực ở các lô thí ngiệm ở tất cả các nội dung.
- Ba Vì là huyện thuộc vùng bán sơn địa, nằm về phía Tây Bắc thủ đô Hà Nội. Địa hình của huyện thấp dần từ phía Tây Nam sang phía Đông Bắc. Về khí hậu, Ba Vì nằm trong vùng đồng bằng sông Hồng chịu ảnh hưởng khí hậu nhiệt đới gió mùa.
- Thời tiết khí hậu khu vực Ba Vì được chia ra làm bốn mùa Xuân, Hạ, Thu, Đông. Mùa Xuân từ tháng 1 đến tháng 3 hàng năm; mùa Hè từ tháng 4 đến tháng 6 hàng năm; mùa Thu từ tháng 7 đến tháng 9 hàng năm; mùa Đông từ tháng 10 đến tháng 12 hàng năm.
- Số liệu quan trắc nhiệt độ và độ ẩm ngoài trời từ tháng 1 năm 2013 đến tháng 4 năm 2017 được thu thập từ Trạm Khí tượng Ba Vì (Tản Lĩnh, Ba Vì, Hà Nội).
Bảng 3.1. Nhiệt độ và độ ẩm ở khu vực nghiên cứu theo từng mùa trong giai đoạn 2013-2017
Mùa Tháng Nhiệt độ trung bình (
0C) Ẩm độ trung bình (%) Mean SD Mean SD Xuân 1-3 17,96 4,53 89,33 6,39 Hạ 4-6 27,42 2,94 83,66 6,91 Thu 7-9 27,53 1,81 88,48 5,12 Đông 10-12 21,26 4,01 84,77 7,18 3.2. NỘI DUNG NGHIÊN CỨU
- Đánh giá thực trạng về dinh dưỡng và khả năng sản xuất tinh của đàn bò đực giống HF nuôi tại Trạm nghiên cứu và sản xuất tinh đông lạnh Moncada.
- Nghiên cứu ảnh hưởng của các mức năng lượng và protein thô trong khẩu phần trong mùa hè - thu và đông - xuân đến năng suất và chất lượng tinh dịch của bò đực sản xuất tinh giống Holstein Friesian nuôi tại Trạm nghiên cứu và sản xuất tinh đông lạnh Moncada.
3.3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.3.1. Phương pháp đánh giá thực trạng về dinh dưỡng và khả năng sản xuất tinh của đàn bò đực giống HF nuôi tại Trạm Moncada xuất tinh của đàn bò đực giống HF nuôi tại Trạm Moncada
Phương pháp đánh giá thực trạng nuôi dưỡng bò đực giống HF tại Trạm Moncada
- Khẩu phần cung cấp cho bò đực giống HF trong 2 mùa vụ được thu thập thông qua sổ sách ghi chép của Trạm Moncada.
- Giá trị dinh dưỡng của khẩu phần trong 2 mùa được xác định bằng cách lấy mẫu theo hai mùa vụ đông - xuân; hè - thu và phân tích tại Phòng Phân tích thức ăn và sản phẩm chăn nuôi, Viện Chăn nuôi các chỉ tiêu: VCK, protein thô, Ca, P.
- So sánh, đánh giá khẩu phần cung cấp; lượng ăn vào thực tế so với tiêu chuẩn ăn theo khuyến cáo của NRC (1988) bằng cách:
+ Lượng thức ăn cho ăn và ăn vào thực tế của bò đực giống HF thu thập qua sổ sách ghi chép hàng ngày của Trạm nghiên cứu và sản xuất tinh đông lạnh Moncada và được kiểm tra bằng cách cân thức ăn cho ăn và thức ăn thừa.
+ So sánh được tính toán theo các chỉ tiêu: năng lượng trao đổi, protein thô của các loại thức ăn trong khẩu phần cung cấp; lượng ăn vào thực tế theo mùa vụ. Tổng số năng lượng trao đổi, protein thô, tính toán từ khẩu phần ăn cung cấp và lượng ăn vào thực tế so sánh với tiêu chuẩn ăn khuyến cáo của NRC (1988) để xác định tỷ lệ % đáp ứng của khẩu phần cho từng nhóm bò.
Phương pháp đánh giá thực trạng về số lượng, chất lượng tinh dịch của bò đực giống HF tại Trạm nghiên cứu và sản xuất tinh đông lạnh Moncada.
- Thu thập dữ liệu sơ cấp qua sổ sách ghi chép của những lần khai thác được tinh dịch của 30 bò đực giống HF thông qua các chỉ tiêu: Thể tích tinh dịch, hoạt lực tinh trùng, nồng độ tinh trùng; pH; tỷ lệ tinh trùng sống, tỷ lệ tinh trùng kỳ hình, màu sắc tinh dịch.
3.3.2. Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng của các mức năng lượng và protein trong khẩu phần trong mùa hè - thu và đông - xuân đến năng suất protein trong khẩu phần trong mùa hè - thu và đông - xuân đến năng suất và chất lượng tinh dịch của bò đực sản xuất tinh giống Holstein Friesian nuôi tại Trạm nghiên cứu và sản xuất tinh đông lạnh Moncada
a. Bố trí thí nghiệm
Hai thí nghiệm được tiến hành vào hai thời vụ khác nhau trong năm (mùa hè - thu từ tháng 01/5 - 31/8/2016 và mùa đông - xuân từ 01/11/2016 - 28/02/2017).
Trong mùa hè - thu (từ 01/5/2016 - 31/8/2016), thí nghiệm được thực hiện trên 9 bò đực giống HF (từ 5 – 6 tuổi), khối lượng cơ thể trung bình 1035,8 kg, đồng đều về năng suất và chất lượng tinh. Thí nghiệm được thiết kế theo phương pháp khối ngẫu nhiên hoàn toàn, theo đó, bò đực giống được phân ngẫu nhiên vào 3 lô, mỗi lô 3 con, mỗi con được coi như một đơn vị thí nghiệm, đồng thời là một lần lặp lại.
Trong mùa đông - xuân (từ 01/11/2016 - 28/02/2017) thí nghiệm được thực hiện trên 9 bò đực giống HF (từ 5 – 6 tuổi), khối lượng cơ thể trung bình 1035,9 kg, đồng đều về năng suất và chất lượng tinh. Thí nghiệm được thiết kế theo phương pháp ngẫu nhiên hoàn toàn, theo đó, bò đực giống được phân ngẫu nhiên vào 3 lô, mỗi lô 3 con, mỗi con được coi như một đơn vị thí nghiệm, đồng thời là một lần lặp lại.
- Bò đực giống HF ở lô I được ăn khẩu phần (tương ứng với từng mùa) tương đương mức năng lượng trao đổi và protein thô bằng 100% theo tiêu chuẩn ăn của NRC (1988) cho bò đực giống HF trưởng thành.
- Bò đực giống HF ở lô II được ăn khẩu phần (tương ứng với từng mùa) tương đương mức năng lượng trao đổi và protein thô bằng 105% theo tiêu chuẩn ăn của NRC (1988) cho bò đực giống HF trưởng thành.
- Bò đực giống HF ở lô III được ăn khẩu phần (tương ứng với từng mùa) tương đương mức năng lượng trao đổi và protein thô bằng 110% theo tiêu chuẩn ăn của NRC (1988) cho bò đực giống HF trưởng thành.
- Khẩu phần thí nghiệm được thiết lập bằng phần mềm chuyên dụng Ultramix của trường Đại học tổng hợp Oxford (Vương quốc Anh), đảm bảo cơ cấu (tỷ lệ giữa các loại thức ăn tinh và thô) và các thành phần dinh dưỡng khác (khoáng đa, vi lượng) trong các khẩu phần ở các lô là như nhau theo NRC (1988). Sơ đồ bố trí thí nghiệm được trình bày ở bảng 3.2.
Bảng 3.2. Sơ đồ bố trí thí nghiệm
Các chỉ tiêu Lô I Lô II Lô III
- Số bò thí nghiệm trong mùa hè – thu 3 3 3 - Số bò thí nghiệm trong mùa đông – xuân 3 3 3 - Yếu tố thí nghiệm
+ Mức năng lượng trao đổi và protein thô cung cấp hàng ngày 100% NRC (1988) 105% NRC (1988) 110% NRC (1988) + Các mức dinh dưỡng khác (Khoáng,
Bảng 3.3a. Khẩu phần thí nghiệm mùa hè - thu Chỉ tiêu ĐVT Mức I Chỉ tiêu ĐVT Mức I (100% NRC) Mức II (105 %NRC) Mức III (110%NRC) 1/Khẩu phần ăn Cỏ Ghinê tươi kg VCK 6,8 7,2 7,42 Cỏ Pangola khô kg VCK 3,6 3,5 3,63 Thóc mầm kg VCK 0,5 0,7 0,72 Thức ăn tinh hỗn hợp kg VCK 2,2 2,4 2,55 2/Dinh dưỡng VCK kg/con/ngày 13,1 13,7 14,3 Tổng ME MJ/con/ngày 114,8 119,8 125,2 Tổng protein thô g/con/ngày 1.371,5 1.435,9 1.501,9 Mật độ năng lượng MJ/kg VCK 8,7 8,7 8,7
Bảng 3.3b. Khẩu phần thí nghiệm mùa đông - xuân
Chỉ tiêu ĐVT Mức I (100% NRC) Mức II (105 %NRC) Mức III (110%NRC) 1/Khẩu phần ăn Cỏ Ghinê tươi kg VCK 2,9 3,1 3,2 Cỏ Pangola khô kg VCK 8,5 8,9 9,2 Thóc mầm kg VCK 0,4 0,5 0,9 Thức ăn tinh hỗn hợp kg VCK 2,5 2,6 2,9 2/Dinh dưỡng VCK kg/con/ngày 14,3 15,2 16,1 Tổng ME MJ/con/ngày 113,6 119,8 128,7 Tổng protein thô g/con/ngày 1.349,0 1.415,8 1.523,2 Mật độ năng lượng MJ/kg VCK 8,4 8,4 8,4
b. Các chỉ tiêu theo dõi
- Sự thay đổi khối lượng. - Thể trạng (mức độ béo gầy).
- Lượng thức ăn ăn vào hàng ngày của từng bò đực giống.
- Các chỉ tiêu số lượng, chất lượng tinh dịch: Thể tích tinh dịch, màu sắc, độ pH, nồng độ, hoạt lực tinh trùng, tỷ lệ tinh trùng chết, tỷ lệ tinh trùng kỳ hình, hoạt lực tinh trùng sau giải đông, số lần khai thác, số lần khai thác đạt tiêu chuẩn và số tinh cọng rạ sản xuất được xác định bằng các phương pháp đã được chuẩn hóa thành tiêu, chuẩn TCVN 8925:2012.
c. Phương pháp theo dõi các chỉ tiêu nghiên cứu của thí nghiệm
- Lượng dinh dưỡng thu nhận: Lượng dinh dưỡng thu nhận được xác định hàng ngày thông qua cân tổng lượng thức ăn cho ăn (được cân bằng cân đồng hồ Nhơn Hòa loại 100kg ± 30g) và thức ăn thừa hàng ngày (được cân bằng cân kỹ thuật, khả năng chịu tải tối đa 6200g, của hãng Shimadzu) của từng cá thể trong suốt thời gian theo dõi chính thức.
* Đối với thức ăn thô xanh
Thu cắt theo nguyên tắc đường chéo ô vuông, ít nhất là 5 điểm (5 m2) trên ruộng được chọn để thu cắt mẫu, đảm bảo đồng đều.
Sau khi lấy mẫu cỏ ban đầu thì việc lấy mẫu trung bình phải tiến hành ngay và hàm lượng nước phải được xác định tức thời.
Sấy khô mẫu và nghiền mịn cho việc thực hiện các phân tích DM, CP, CF, ADF, NDF, Ash, GE, ME, DOM, Se, Zn.
* Đối với thức ăn thô khô
Cỏ thu mẫu phải được lấy ở các vị trí khác nhau trong đống, phía trên cách bề mặt không dưới 20 cm, lớp đáy cách mặt đáy > 20 cm. Mỗi lớp lấy ở nhiều vị trí trên 2 đường chéo hình chữ nhật của mặt cắt ngang mỗi lớp.
* Đối với thức ăn tinh
Lấy mẫu của 5% tổng số bao nhưng không ít hơn 3 bao. Bao được chọn ở các vị trí khác nhau trong kho, nhưng phải chọn theo hàng. Trong mỗi bao cần chọn ít nhất 3 vị trí ở 3 lớp: trên, giữa và đáy bao.
- Các nguyên liệu thức ăn tinh hỗn hợp, thức ăn thô cho ăn được lấy mẫu hàng tháng phân tích (vật chất khô, protein thô) và xác định giá trị ME.
- Thức ăn thừa được lấy mẫu hàng tuần được cân và sấy xác định hàm lượng chất khô, sau đó bảo quản trong tủ lạnh. Đến cuối đợt thí nghiệm các mẫu của từng loại thức ăn được trộn đều và 1 mẫu đại diện được lấy, gửi đi phân tích xác định vật chất khô, protein thô và năng lượng trao đổi.
- Thành phần hoá học của các thức ăn và thức ăn thừa thí nghiệm được phân tích tại phòng Phân tích thức ăn và sản phẩm chăn nuôi, Viện Chăn nuôi.
+ Độ ẩm (%) được phân tích theo TCVN: 4326:2001. + Protein thô được phân tích theo TCVN: 4328:2007.
- Phân tích Protein tổng số (CP): Theo TCVN 4328-2007. - Phân tích Xơ thô (CF): Theo TCVN 4329-2007.
- Phân tích ADF: Theo AOAC 973.18.01. - Phân tích NDF: Theo AOAC 973.18.01.
- Phân tích khoáng tổng số (Ash): Theo TCVN 4327-2007.
+ Giá trị năng lượng trao đổi (ME) được xác định dựa vào lượng khí sinh ra tại thời điểm 24h sau khi ủ, kết hợp với thành phần hóa học của khẩu phần (mẫu ủ) để ước tính giá trị năng lượng trao đổi của chúng thông qua phương trình sau:
ME (kcal/ kgDM) = 1885 + 21*GP24 + 2,49*DM – 21,6*CP (Vũ Chí Cương và cs., 2006).
Trong đó: GP24(ml) là thể tích khí trong xilanh chứa mẫu tại thời điểm 24 giờ sau ủ, DM(%) là tỷ lệ vật chất khô, CP(%) là tỷ lệ protein thô.
*Khối lượng cơ thể và thể trạng bò thí nghiệm
- Sự thay đổi khối lượng (cân bằng cân điện tử) được đánh giá 1 tháng một lần Tại mỗi lần đánh giá, bò đực giống ở các lô được cân vào buổi sáng trước khi cho ăn và lấy giá trị trung bình.
- Thể trạng (mức độ béo gầy) được đánh giá theo thang điểm từ 1 đến 9 của Đại học tổng hợp Mississippi Hoa Kỳ (Mississippi State University Extension Service, 1999).
* Phương pháp khai thác tinh dịch
- Thời gian khai thác tinh: từ 6 giờ đến 8 giờ (buổi sáng) - Tần suất khai thác tinh dịch: 2 lần/tuần
- Chuẩn bị âm đạo giả: Các bộ phận của âm đạo giả, đã được khử trùng rồi lắp ráp và bảo quản trong tủ ấm 420C trước khi lấy tinh.
- Chuẩn bị bò đực: Những bò đực đến ngày khai thác tinh được tắm sạch sẽ và thụt rửa bao dương vật trước khi khai thác tinh 30 phút bằng nước muối sinh lý 0,9%.
- Chuẩn bị bò giá: Chọn bò giá thích hợp, vệ sinh cơ thể bò sạch sẽ và cho vào giá.
- Lấy tinh: Kích thích cho bò đực giống hưng phấn sinh dục, rồi cho nhảy bò giá và lấy tinh bằng âm đạo giả.
- Mẫu tinh dịch khai thác được đưa ngay vào phòng thí nghiệm và đặt trong bể nước ấm 350C để kiểm tra các chỉ tiêu số lượng, chất lượng tinh dịch sau đó đưa những mẫu tinh dịch đạt tiêu chuẩn vào sản xuất tinh đông lạnh dạng cọng rạ. * Phương pháp xác định một số chỉ tiêu số lượng, chất lượng tinh dịch bò
- Màu sắc tinh dịch: Màu sắc tinh dịch được đánh số theo quy ước như sau:1 là tinh dịch có màu trắng trong; 2 tinh dịch có màu trắng sữa; 3 tinh dịch có màu trắng ngà; 4 tinh dịch có màu trắng đục (Sarder, 2007).
- Thể tích tinh dịch: Xác định bằng cách quan sát trên ống đong có vạch chia ml.
- Hoạt lực tinh trùng: Dùng micropipét hút 0,01 ml tinh dịch + 0,09 ml dung dịch A (môi trường pha loãng tinh dịch không có glycerol) rồi nhỏ lên phiến kính chuyên dụng và được giữ ấm ở nhiệt độ 38oC, đậy la men rồi đưa lên kính hiển vi phản pha có có gắn camera phóng đại 100 lần kết nối với màn hình. Hoạt lực tinh trùng được kiểm tra ngay sau khi khai thác tinh dịch.
- Nồng độ tinh trùng: Dùng micropipét hút 0,02ml tinh dịch pha loãng trong 4ml nước muối sinh lý 0,9%, lắc nhẹ cho đều và đưa vào máy Photometer SDM5 (Minitub, Đức). Chỉ số hiện trên máy là nồng độ tinh trùng (tỉ/ml).
- Tổng số tinh trùng sống tiến thẳng: Xác định bằng tích của lượng xuất tinh, hoạt lực tinh trùng và nồng độ tinh trùng (VAC = VxAxC).
- pH tinh dịch: Xác định bằng máy đo pH (Minitub, Đức).
- Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình: Sử dụng Fucsin 5% nhuộm tinh trùng từ 5 đến 7 phút, phết lam kính và soi trên kính hiển vi có độ phóng đại 400 lần. Đếm số