CHƢƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU
2.2. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2.9. Phƣơng pháp đánh giá hình thái cây chuyển gen
Để đánh giá sự hoạt động ổn định và vai trò của gen EcHB1, cây Bạch
đàn lai UP đƣợc chuyển gen tăng chiều dài sợi gỗ EcHB1 đã đƣợc kiểm tra
thông qua phƣơng pháp phân tích hình thái giữa hình thái của cây bạch đàn không chuyển gen (đặc điểm thân, chồi, lá) các dòng UP72 và UP99 (gọi là cây đối chứng) với hình thái của các cây chuyển gen từ chính các dịng này (các dòng chuyển gen UP72CG và UP99CG – gọi là cây chuyển gen) ở cả 2 giai đoạn là in vitro và cây con vƣờn ƣơm.
2.2.9.1. Đánh giá các chỉ tiêu hình thái ở điều kiện in vitro
Các dòng Bạch đàn lai UP đã đƣợc chuyển gen và dòng đối chứng sau cấy nhân chồi đƣợc nuôi trong cùng một điều kiện môi trƣờng MS + 0,5 mg/l BAP + 0,25 mg/l NAA + 30 g/l sucrose + 15 mg/l Riboflavin + 6,5 g/l agar, sau 3 tuần nuôi cấy đƣợc sử dụng làm vật liệu so sánh về hình thái.
Các chỉ tiêu đo đếm nhƣ sau: Màu sắc thân, màu sắc lá, số lóng/chồi, chiều dài các lóng (đơn vị đo cm), tổng số mẫu đo đếm số liệu về chồi: 90 mẫu chồi/dịng, số mẫu đo kích thƣớc lá: 2 lá/chồi x 90 chồi = 180 lá/dòng, chiều dài và chiều rộng các lá thứ 3 - 4 tính từ phần đỉnh chồi (Mũi tên - Hình 2.4) (Đơn vị đo - mm).
Hình 2.4. Vị trí các lá đƣợc chọn để đánh giá hình thái
2.2.9.2. So sánh khả năng sinh trưởng và hình thái của cây chuyển gen giai đoạn vườn ươm
Tiến hành thu thập số liệu và đánh giá sự sai khác giữa cây chuyển gen và cây đối chứng cây thông qua các chỉ tiêu về chiều cao cây và hình thái lá (hình dạng, màu sắc và kích thƣớc lá) ở các thời điểm 1 tháng, 2 tháng và 3 tháng sau khi cấy vào bầu.
Lá đƣợc chọn để đo kích thƣớc vẫn là các lá ở vị trí thứ 3 - 4 tính từ ngọn của cây ở giai đoạn 3 tháng tuổi. Tổng số lá đo đếm là 180 mẫu lá/ dòng (2 lá/cây), đơn vị đo giai đoạn vƣờn ƣơm là cm.