CHƢƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU
2.2. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2.3. Phƣơng pháp kết tủa thu hồi sản phẩm
Phƣơng pháp này đƣợc tiến hành dựa trên cơ sở: độ hòa tan của polysaccharide phụ thuộc vào sự tƣơng tác của các nhóm tích điện trong phân tử polysaccharide với các phân tử nƣớc. Sự tƣơng tác đó (cịn gọi là sự hydrate hóa) sẽ bị giảm xuống khi thêm vào dung dịch polysaccharide các dung mơi hữu cơ hoặc các muối trung tính.
Dung mơi hữu cơ thƣờng dùng là etanol, isopropanol, acetone hoặc hỗn hợp các loại rƣợu.
Khi sử dụng các dung môi hữu cơ, cần chú ý tiến hành ở nhiệt độ thấp (từ 5oC trở xuống). Dùng dung mơi hữu cơ có thể tiến hành tách phân đoạn dƣới 0o
C và có thể đến -20oC, nhƣ vậy có tác dụng tốt đến độ ổn định của polysaccharide.
Mục đích: Xác định dung mơi thích hợp cần sử dụng cho quá trình kết
tủa thu hồi sản phẩm đạt hiệu quả cao nhất.
Nguyên tắc: Với cùng một lƣợng chất ban đầu, khi ta sử dụng các dung
môi khác nhau để kết tủa thì hiệu quả thu hồi sẽ khác nhau.
Cách tiến hành
Chuẩn bị 3 chiếc cốc. Dùng pipet hút vào mỗi cốc 20 ml dung dịch mẫu.
- Cốc 1: Cho từ từ ethanol vào và quan sát quá trình tủa. Nếu thấy quá trình tủa diễn ra rất chậm thì tiến hành làm lạnh cốc thứ 2 và tủa lại bằng ethanol.
- Cốc 2: Tiến hành làm lạnh sâu xuống nhiệt độ dƣới 4oC và tiến hành tủa bằng ethanol. Cho từ từ ethanol vào và quan sát tốc độ của q trình tủa.Cho ethanol cho tới khi khơng thấy có xuất hiện kết tủa thêm nữa thì dừng
và ghi thể tích của ethanol tiêu tốn. Đem li tâm ở tốc độ 5000 rpm trong 15 phút để thu lấy phần kết tủa rắn màu trắng sáng.
- Cốc 3: cho từ từ lƣợng isopropan vào dung dịch và quan sát tốc độ của quá trình tủa. Cho isopropan cho tới khi nào thấy dung dịch khơng cịn xuất hiện thêm tủa nữa thì dừng lại và tiến hành ghi thể tích của isopropan đã dùng để tủa. Đem li tâm với tốc độ 5000 rpm trong thời gian 15 phút để thu lấy kết tủa màu trắng sáng.
Tiến hành so sánh hiệu quả quá trình tủa khi sử dụng 2 loại dung môi trên và rút ra kết luận lựa chọn dung mơi nào là thích hợp nhất cho quá trình tủa thu hồi sản phẩm. Đem sản phẩm rắn thu hồi đƣợc tủa lại 2 lần bằng isopropanol. Rửa tủa bằng dung mơi khơng hồ tan, sấy nhẹ ở 600C.