2.2.3.1. Kiểm tra độ thuần khiết
- Làm tiêu bản: Dùng que cấy đã đốt khử trùng để nguội lấy một vòng canh khuẩn dàn đều và mỏng trên lam kính sạch và hơ thoáng qua trên ngọn lửa đèn cồn. Khi tiêu bản đã khô, nhỏ vài giọt cồn 90% lên tiêu bản và hơ qua đèn cồn để làm khô tiêu bản.
- Nhuộm tiêu bản: Đổ thuốc nhuộm tím gentian phủ kín lên tiêu bản và nhỏ thêm 2 – 3 giọt dung dịch lugol để vi khuẩn bắt màu tốt hơn, đợi 1 phút nghiêng lam kính đổ thuốc nhuộm đi. Sau đó dùng cồn - acetone để tẩy màu tới khi tiêu bản sạch, rửa lại qua nƣớc cất. Cho vài giọt thuốc nhuộm fuchsin phủ lên tiêu bản, đợi trong 1 phút rồi đổ đi, cuối cùng rửa lại qua nƣớc cất, làm khô tiêu bản bằng cách thấm vào giấy lọc.
- Quan sát: Nhỏ lên lam kính 1 giọt dầu quan sát bằng kính hiển vi quang học ở độ phóng đại 1000 lần và đọc kết qủa.
2.2.3.2. Thử phản ứng lên men đường
- Chọn khuẩn lạc điển hình của từng nhóm Shigella trên môi trƣờng thạch dinh dƣỡng cấy chuyền vào các ống môi trƣờng canh thang 7,2 và ủ 37oC trong 18 giờ.
- Từ canh khuẩn của từng nhóm Shigella, lấy 0,5ml canh khuẩn cho vào môi trƣờng canh thang 7,2 đã bổ sung các loại đƣờng, hai ống trên mỗi loại đƣờng và để hai ống đối chứng (không cho canh khuẩn vào). Ủ ở nhiệt độ 37o
C.
- Đọc kết quả: Nhỏ 3 giọt thuốc thử xanh Bromothymol vào các dãy môi trƣờng canh thang và quan sát sự chuyển đổi màu môi trƣờng sau 24 giờ và 48 giờ.
+ Dƣơng tính: Môi trƣờng từ xanh chuyển sang vàng + Âm tính: Môi trƣờng vẫn giữ màu xanh
2.2.3.3. Thử tính di động của Shigella trên môi trường Mannit.
- Chọn khuẩn lạc điển hình của từng nhóm Shigella trên môi trƣờng thạch dinh dƣỡng. Dùng que cấy thẳng chấm nhẹ vào giữa khuẩn lạc và cấy thẳng đứng vào ống thạch mềm mannit (1,5 – 2,5 cm chiều sâu), ủ 37oC trong 24 giờ.
- Đọc kết quả:
+ Âm tính: Vi khuẩn mọc thẳng theo đƣờng cấy
+ Dƣơng tính: Vi khuẩn mọc theo đƣờng xoắn ốc, không thẳng
2.2.3.4. Kiểm tra khả năng phân giải Urea
- Từ canh khuẩn của từng nhóm Shigella trên canh thang, lấy 0,5ml canh khuẩn cho vào ống môi trƣờng Urea, láng đều bề mặt thạch. Ủ 37oC trong 24 giờ.
- Đọc kết quả:
+ Âm tính: Môi trƣờng vẫn giữ nguyên màu vàng
+ Dƣơng tính: Môi trƣờng chuyển từ màu vàng sang màu hồng – đỏ.