Bacillus subtilis
Mục đích: Nghiên cứu hiệu ứng sinh học của chitosan và oligochitosan trên vi khuẩn Bacillus subtilis nhằm định hướng ứng dụng.
Cách tiến hành:
Mẫu cần đánh giá hiệu ứng sinh học được hòa tan thành dung dịch 1% trong acid, điều chỉnh về pH = 7 bằng dung dịch NaOH, từ dung dịch gốc này ta tiến hành pha loãng đến các nồng độ 200, 400, 600 ppm rồi tiến hành hấp vô trùng.
Dùng que cấy đầu tròn vô trùng lấy một lượng vi sinh vật nhất định từ ống giống cho vào ống nghiệm chứa môi trường vô trùng, lắc đều ống nghiệm. Lần lượt cho 1mL huyền dịch vi khuẩn vào các ống nghiệm có chứa mẫu ở các nồng độ và mẫu đối chứng, Ủ 24 giờ.
Môi trường được chuẩn bị gồm glucose, NaCl, pepton, cao thịt với tỷ lệ nhất định, đun sôi cách thủy, hấp vô trùng sau đó đỗ thạch trên đĩa petri đã vô trùng.
Định lượng lượng vi khuẩn còn sống trong các dung dịch ở các nồng độ khác nhau và ống đối chứng sau 24 giờ bằng phương pháp đếm khuẩn lạc: Pha loãng bậc 10 mẫu cần kiểm tra bằng nước muối sinh lý đến nồng độ thích hợp. Cấy 0,1 mL mỗi nồng độ pha loãng trên bề mặt đĩa thạch môi trường thạch thường, dùng que gạt vô trùng dàn dịch cấy ra khắp bề mặt môi trường. Mỗi độ pha loãng cấy 2 đĩa. Lật ngược đĩa, đem ủ ở 30 – 37oC trong 24 h. Đếm khuẩn lạc. Chọn độ pha loãng có số khuẩn lạc từ 30 đến 300 khuẩn lạc trên một đĩa để đếm và tính kết quả.
Hình 2.8. Sơ đồ bố trí thí nghiệm đánh giá hiệu ứng sinh học của chitosan và oligochitosan đối với sự sinh trưởng và phát triển của vi khuẩn Bacillus subtilis