... DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HCM BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC ***000*** PHÂN LẬP VÀ ĐỊNH DANH TÁC NHÂN GÂY BỆNH ĐỐM LÁ CÂY CẢI NGỌT TẠI TP HCM BẰNG KỸ THUẬT PCR VÀGIẢITRÌNHTỰ VÙNG 16S ... chọn thực đề tài: Phân lập định danh tác nhân gây bệnh đốm cải Tp HCM phƣơng pháp PCR giảitrìnhtự vùng 16S – 23S rDNA Đề tài phần chƣơng trình nghiên cứu bệnh vi khuẩn họ thập tự Bộ môn Bảo Vệ ... Vùng ITS (rDNA intergenic spacer) gen hrpF (hypersensitive reaction and pathogenicity) 13 2.3.1 Gen hrpF (hypersensitive reaction and pathogenicity) 13 iii 2.3.2 Ribosome DNA (rDNA) ...
... đại vùng 16S – 23S rDNA 1: CC1, 2: CC2, 3: CC3, 4: Ladder 1,5kb, 5: HM1, 6: HM2, 7: Q12-1, 8: DC Sản phẩm PCR đƣợc tinh đọc trìnhtựTrìnhtự DNA có đƣợc so sánh với liệu ngân hàng gen để định ... pháp PCR khuếch đại vùng 16S – 23S rDNA có kích thƣớc 1,1 kb sử dụng cặp primer Xan1330 Xan322 làm vật liệu giảitrìnhtự Thực phản ứng với thành phần nêu Bảng 3.1 theo chu trình nhiệt Bảng 3.2 Phƣơng ... phân tích lớn rau họ thập tự Cụ thể mở rộng địa bàn (Đồng Bằng Sông Cửu Long, Lâm Đồng, Long An tỉnh có canh tác rau), nghiên cứu phổ kí chủ rộng (cây họ thập tự) Hoàn thành đề tài mức giải trình...
... Khuếch đại vùng 16S – 23S rDNA ITS vi khuẩn Phản ứng tiến hành với cặp mồi không chuyên biệt đƣợc thiết kế nhằm khuếch đại trìnhtự vùng ITS (intergenic spacer sequence) nằm vùng rDNA16S 23S (Goncalves ... cơng trình nghiên cứu tác nhân nhƣ đặc tính sinh học, sinh lý, sinh hóa, dịch tễ học bệnh đốm cải nói riêng bệnh đốm họ thập tự nói chung Việt Nam 2.3 Vùng 16S – 23S rDNA ITS (rDNA intergenic ... hợp gen bao gồm 21 gengen điều tiết hrpX, hrpG nằm bên ngồi Các gen hrp mã hóa protein hrp Các protein thành phần hệ thống phóng tiết loại III (type III secretion system) cho phép tiết loại...
... DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HCM BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC ***000*** PHÂN LẬP VÀ ĐỊNH DANH TÁC NHÂN GÂY BỆNH ĐỐM LÁ CÂY CẢI NGỌT TẠI TP HCM BẰNG KỸ THUẬT PCR VÀGIẢITRÌNHTỰ VÙNG 16S ... chọn thực đề tài: Phân lập định danh tác nhân gây bệnh đốm cải Tp HCM phƣơng pháp PCR giảitrìnhtự vùng 16S – 23S rDNA Đề tài phần chƣơng trình nghiên cứu bệnh vi khuẩn họ thập tự Bộ môn Bảo Vệ ... Vùng ITS (rDNA intergenic spacer) gen hrpF (hypersensitive reaction and pathogenicity) 13 2.3.1 Gen hrpF (hypersensitive reaction and pathogenicity) 13 iii 2.3.2 Ribosome DNA (rDNA) ...
... Biotech, 2008 Giảitrìnhtự gene hay gen cho nghiên cứu có liên quan Phát đột biến gene (liên quan đến ung thư, kháng thuốc), SNP (trong cá nhân hóa liệu pháp điều trị), kiểu gene (genotype virus ... nghiên cứu, khám phá, chuẩn đốn điều tra Vấn đề Phương pháp giảitrìnhtự DNA hữu hiệu mạch DNA (1-2 Kbp) Giải pháp o Giảitrìnhtự lắp ráp đoạn nhỏ máy tính 1977 Sanger Sequencing 2005 2006 ... ddNTP blocker Cắt periodate oligo Giảitrìnhtự sinh tổng hợp Polony PCR Solid sequencing Tiến trình: Chuẩn bị thư viện DNA Emulsion/Wildfire PCR Giảitrìnhtự ligation Wildfire PCR Sequencing:...
... băng thu phân tích giám định loài ADN tinh vào ống để đưa Một số sản phẩm PCR giảitrìnhtựgiảitrìnhtự Sau giảitrình tự, chuỗi cho chuỗi nucleotid lồng nhau, không nucleotid xử lý phân tích ... http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi) Danh phân biệt để thu clon riêng giải sách mẫu, kết PCR, chuỗi gengiảitrìnhtựtrình tự, kết truy cập Ngân hàng Gen Kết truy cập Ngân hàng Gen chủ yếu liệt kê xác định ... băng để giảitrìnhtự Sản phẩm PCR sau tinh giảitrìnhtự trực tiếp, sử dụng mồi ITS1 Xử lý trìnhtự chuỗi nucleotid phần mềm chuyên biệt, bao gồm SeqEd1.03, AsemblyLIGNv1.9c hệ chương trình MacVector8.2...
... chương trình tin – sinh h c ng d ng nghiên c u x lý, phân tích so sánh chu i gen thu nh n - Chương trình so sánh phân tích chu i gen GeneDoc m t chương trình Nicholas Nicholas (1997) [48] l p trình ... c m t s nucleotide, th m chí m t gen hay nhi u gen - ð t bi n thêm vào (insertion) thêm m t ho c m t s nucleotide vào phân t DNA, th m chí m t gen hay nhi u gen - ð t bi n ñ o ño n (inversion) ... (2000), phân tích chu i gen (sequence analysis) xác ñ nh c u trúc so sánh thành ph n c a chu i gen bao g m trình t nucleotide, amino acid, c u trúc gen/ h gen, khung ñ c m (ORF) nhi u ñ c tính phân...
... ngẫu nhiên vào thay cho dNTP 29 Hình 1.10 Hình ảnh minh họa kỹ thuật giảitrìnhtự theo phương pháp Sanger [13] Giảitrìnhtự DNA chia làm bước lớn: PCR giảitrìnhtự đọc trìnhtự máy tự động Bước ... nhân đoạn gen đặc hiệu với OI - Chạy điện di kiểm tra sản phẩm Bước 4: Giảitrìnhtự sản phẩm PCR gồm bước: - Thực phản ứng PCR giảitrìnhtự - Tinh sản phẩm PCR giảitrìnhtự - Giảitrìnhtự trực ... (thymine) Các nucleotid liên kết với theo thứ tự xác định Giảitrìnhtựgen tức phát thứ tự xếp nucleotid phântử DNA Vào thập kỷ 70, có hai quy trìnhgiảitrìnhtự sau đưa gần lúc: - Phương pháp Maxam...
... thủy giải DNA mạch đôi cách lặp lại vò trí (trình tự) xác đònh Mỗi RE nhận biết trìnhtự nucleotide đặc trưng Các trìnhtự thường bao gồm 4-8 nucleotide Các RE khác có trìnhtự nhận biết số RE, trình ... ngân hàng gen Tuy vậy, chưa có công bố trìnhtự 5’UTR CSFV phân lập Việt Nam Vì vậy, mục tiêu đề xác đònh trìnhtự 5’UTR chủng CSFV phân lập Việt Nam nhằm phục vụ cho nghiên cứu phânloại hỗ trợ ... ngân hàng gen Tuy vậy, chưa có công bố trìnhtự 5’UTR CSFV phân lập Việt Nam Vì vậy, mục tiêu đề xác đònh trìnhtự 5’UTR chủng CSFV phân lập Việt Nam nhằm phục vụ cho nghiên cứu phânloại hỗ trợ...
... 18) Hình 18 So sánh trìnhtự DNA với trìnhtự protein nhóm Nhóm gồm trìnhtự chủng LPH209 với trìnhtự protein dài gồm 413 axit amin Trìnhtự protein chủng sai khác với trìnhtự protein Thite_72629 ... So sánh trìnhtự DNA với trìnhtự protein nhóm Nhóm có trìnhtự khác biệt lớn với trìnhtự ThCEL 72629 (khoảng 5%) đặc biệt 21 axit amin cuối từ axit amin 370 đến 391 Nguyên nhân trìnhtự Thite_72629 ... Kết phân tích trìnhtựgen Cel1 chủng LPH 195 phần mềm NetAspGene 1.0 3.6.2 Xác định trìnhtự peptide tín hiệu Enzyme endo-1,4-β-glucanase mà nghiên cứu enzyme ngoại bào nên gen bao gồm trình tự...
... 3.6 So sánh trìnhtự amino acid protrein BCET vói trìnhtự BAA041341 ngân hàng gen quốc tế 44 Hình 3.7 So sánh trìnhtự amino acid protrein NHE vói trìnhtự DQ153257.1 ngân hàng gen quốc tế ... dụngtrìnhtự16S rARN khơng thích hợp để phân biệt B cereus với lồi khác nhóm B cereus [58] 29 Dựa gen gyrB Yamamoto Harayama gợi ý sử dụnggen gyrB thay cho 16S rARN làm marker phânloạiphân ... ADN-AND phép phân tích trìnhtựgen rARN Trìnhtự16S rARN B myco¿des, B thuringiensis khác biệt với B arthracis, B cereus từ 0-9 nucleotit Ngoài ra, Ash Collins thơng báo trìnhtự 23S rARN B...
... Kết giảitrìnhtự vùng ITS -rDNA vùng Tef 43 4.6.1 So sánh trìnhtự nucleotid vùng ITS – rDNA vùng Tef 43 4.6.2 Kết giảitrìnhtự vùng ITS1 – 5,8S – ITS2 48 4.6.3 Kết giảitrìnhtự ... đƣợc đƣa vào để nghiên cứu tính đa dạng di truyền sinh vật dựa vào vùng rDNA thay đọc trìnhtự vùng rDNA Thực vật đƣợc quan tâm ngiên cứu vùng rDNA Palmer cộng (1990) so sánh trìnhtự SSU -rDNA ... Trichoderma tự nhiên, nhận diện dòng nấm thu đƣợc dòng Trichoderma, tiến tới đọc trìnhtự vùng rDNA- ITS, trìnhtự đọc đƣợc đối chiếu với trìnhtự có sở liệu lƣu trữ trƣớc ngân hàng gene lồi nấm...
... Kết giảitrìnhtự vùng ITS -rDNA vùng Tef 43 4.6.1 So sánh trìnhtự nucleotid vùng ITS – rDNA vùng Tef 43 4.6.2 Kết giảitrìnhtự vùng ITS1 – 5,8S – ITS2 48 4.6.3 Kết giảitrìnhtự ... đƣợc đƣa vào để nghiên cứu tính đa dạng di truyền sinh vật dựa vào vùng rDNA thay đọc trìnhtự vùng rDNA Thực vật đƣợc quan tâm ngiên cứu vùng rDNA Palmer cộng (1990) so sánh trìnhtự SSU -rDNA ... Trichoderma tự nhiên, nhận diện dòng nấm thu đƣợc dòng Trichoderma, tiến tới đọc trìnhtự vùng rDNA- ITS, trìnhtự đọc đƣợc đối chiếu với trìnhtự có sở liệu lƣu trữ trƣớc ngân hàng gene lồi nấm...
... Kết giảitrìnhtự Sản phẩm PCR, sau làm giảitrìnhtự trực tiếp khơng qua giai đoạn tạo dòng phântử Kết trình bầy hình A B Gen HP1125 Việt Nam đệ trình vào quĩ gen có số mã AY513613 Hình Trình ... Hultman (6a) Phân tích trìnhtự đoạn ADN: Chương trình Blast trang Web sử dụng để phân tích trìnhtự protein cuar gen KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Khuếch đại gen HP1125 phương pháp PCR Toàn gen HP1125 khuyếch ... phângiải gel agarose 0.8% làm khỏi mồi thừa sau phản ứng Gene clean Kit ADN với nồng độ 10 ng/µl sử dụng để giảitrìnhtự ADN Core, trường đại học tổng hợp Michigan (Mỹ) theo phương pháp giải trình...
... giảitrìnhtự Sản phẩm PCR, sau làm giảitrìnhtự trực tiếp khơng qua giai đoạn tạo dòng phântử Kết trình bầy hình A B Gen HP1125 Việt Nam đệ trình vào quĩ gen có số mã AY513613 Hình Trìnhtự ... Hultman (6a) Phân tích trìnhtự đoạn ADN: Chương trình Blast trang Web sử dụng để phân tích trìnhtự protein cuar gen KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Khuếch đại gen HP1125 phương pháp PCR Toàn gen HP1125 khuyếch ... Triều Tiên [5] Muộn hơn, đầu 5’ gen 20 chủng tạo dòng phân tích Viện Cơng nghệ Sinh học, Việt Nam [in press] Các phân tích số trìnhtựgen HP1125 công bố cho thấy, gen HP1125 protein HP1125 bảo...
... Các phương pháp giảitrìnhtựgen Có phương pháp chính: Phương pháp hoá học Maxam Gilbert: phương pháp sử dụng để xác định trìnhtựgen không đựơc sử dụng phổ biến Phương ... dấu phântử phát huỳnh quang màu khác Ưu điểm phương pháp cải tiến Tạo điều kiện thuận lợi cho việc tự động hoá Giảm giá thành phản ứng Tăng tốc độ phản ứng => Nhiều trung tâm giảitrìnhtựgen ... P32 Đoạn DNA ngắn có đánh dấu phóng xạ chạy nhanh tác dụng điện trường Căn vào vị trí vạch quan sát gel mà xác định trìnhtự nucleotide MAXAM-GILBERT CHEMICAL Labeled strand (P32) SEQUENCING ddNTP...
... PCR Bước 3: Nạp sản phẩm PCR vào máy giảitrìnhtựgen chạy máy giảitrìnhtựgen Bước 4: Phân tích kết từ liệu máy tính cung cấp 2.3 Phương pháp giảitrìnhtựgentự động Đầu đọc laser máy kích ... Thịnh NỘI DUNG Khái niệm giảitrìnhtựgen ý nghĩa GTTG Phương pháp giảitrìnhtự gen: 2.1 Phương pháp Maxam – Gilbert 2.2 Phương pháp Sanger 2.3 Phương pháp giảitrìnhtựgentự động So sánh phương ... phát màu, màu ứng với nucleotide hiển thị đỉnh 2.3 Phương pháp giảitrìnhtựgentự động Đọc kết 2.3 Phương pháp giảitrìnhtựgentự động ABI Automated Sequencers (contd.) ABI 310 Capillary ABI...
... Kết giảitrìnhtự vùng ITS -rDNA vùng Tef 43 4.6.1 So sánh trìnhtự nucleotid vùng ITS – rDNA vùng Tef 43 4.6.2 Kết giảitrìnhtự vùng ITS1 – 5,8S – ITS2 48 4.6.3 Kết giảitrìnhtự ... đƣợc đƣa vào để nghiên cứu tính đa dạng di truyền sinh vật dựa vào vùng rDNA thay đọc trìnhtự vùng rDNA Thực vật đƣợc quan tâm ngiên cứu vùng rDNA Palmer cộng (1990) so sánh trìnhtự SSU -rDNA ... Trichoderma tự nhiên, nhận diện dòng nấm thu đƣợc dòng Trichoderma, tiến tới đọc trìnhtự vùng rDNA- ITS, trìnhtự đọc đƣợc đối chiếu với trìnhtự có sở liệu lƣu trữ trƣớc ngân hàng gene lồi nấm...
... trình Boostrap với 1.000 lần lập lại (1000 replicates) III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kết giảitrìnhtựgen16S rRNA chủng C.perfringens: Để khẳng định đặc điểm phânloại xác định vị trí phânloại ... ribosom vi khuẩn có loạiphântử rRNA với số lắng tương ứng 16S, 23S 5S Đối với hầu hết loại vi khuẩn, phân tích trìnhtựgen16s rRNA kết luận giống lồi, vị trí vi khuẩn bảng phânloại quan hệ họ ... C.perfringens phân lập từ dê, cừu mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy, giảitrìnhtựgen16S rRNA chủng phân lập Các đặc tính chủng thể bảng Bảng Đặc tính chủng C.perfringens lựa chọn giải mã 16S rRNA...