Cac ki thuat MD

Một số kỹ thuật miễn dịch (kết hợp kn - kt) PGS.TS Phạm Đăng Khoa Bộ môn Miễn dịch - Sinh lý bệnh Trờng Đại học Y Hà Nội đại cơng Các kỹ thuật MD dựa kết hợp KN với KT ý nghĩa kỹ thuật MD: đà biết trớc KN (hoặc KT) phát đợc KT (hoặc KN) đặc hiệu với Nguyên lý chung: - Trên đơn phân KT có paratop - Trên KN có nhiều epitop - Khi cã tû lƯ thÝch hỵp KN / KT mạng lới kết KN-KT có kích thớc lớn (có thể nhìn thấy mắt thờng) Mỗi đơn phân KT có paratop Cấu trúc kháng thể (paratop epitop) Phức hợp KN-KT (phức hợp miễn dịch) Phức hợp KN-KT (phức hợp miễn dịch) Phức hợp KN-KT (phức hợp miễn dịch) Phân tử KN có nhiều epitop Mạng lới KN (2) KT (1) Các nhóm kỹ thuật miễn dÞch Nhãm kü tht tđa Nhãm kü tht ngng kết Nhóm kỹ thuật đánh dấu nhóm kỹ thuật đánh dấu Là nhóm kỹ thuật KN hay KT đợc gắn chất "đánh dấu' cho dễ phát làm tăng độ nhạy phản ứng kết hợp KN - KT Tiêu chuẩn chất đánh dấu: - Không làm biến tính KN hay KT; - Gắn chặt với KN hay KT Các chất đánh dấu thờng dùng: - ChÊt ph¸t huúnh quang -> kü thuËt MD huúnh quang (IFA: Immuno Fluorescence Assay) - Enzym -> kü tht MD hÊp phơ g¾n enzym (ELISA: Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) - Chất đồng vị phóng xạ -> kü thuËt MD phãng x¹ (RIA: Radio Immuno Assay) kü tht miƠn dÞch hnh quang Kü tht MD hnh quang trực tiếp Mục đích: Phát định vị KN nằm vị trí khác tế bào lát cắt mô Đặc điểm: Chất màu huỳnh quang đợc gắn trực tiếp vào KT (đặc hiệu với KN cần phát hiện) Nhợc điểm: - Phải gắn chất phát huỳnh quang cho tất loại KT cần dùng để phát KN khác - Độ nhạy không cao Kỹ thuật MD huỳnh quang trùc tiÕp kü tht miƠn dÞch hnh quang Kü thuật MD huỳnh quang gián tiếp Mục đích: - Phát định vị KN nằm vị trí khác tế bào lát cắt mô - Phát KT huyết Đặc điểm: Chất màu huỳnh quang đợc gắn vào KT thứ hai, thờng KT (của động vật) chống IgG ngời Ưu điểm: - Dùng loại KT có gắn chất màu huỳnh quang (KT thứ hai) để phát nhiều KN khác - Độ nhạy cao Kỹ thuật MD huỳnh quang gi¸n tiÕp Kü thuËt MD huúnh quang gi¸n tiÕp Kü thuËt MD huúnh quang gi¸n tiÕp Kü thuËt MD huỳnh quang trực tiếp (trái) gián tiếp (phải) kỹ thuËt elisa Nguyªn lý gièng kü thuËt MD huúnh quang, thay chất đánh dấu: chất màu huỳnh quang -> enzym Chia nhãm: - Kü thuËt ELISA trùc tiÕp - Kü thuËt ELISA gi¸n tiÕp Kü thuËt ELISA ph¸t hiƯn KN Kü tht ELISA ph¸t hiƯn KN Kü tht ELISA ph¸t hiƯn KN Kü tht ELISA ph¸t hiƯn KT Kỹ thuật ELISA kỹ thuật miễn dịch phóng xạ Nguyên lý giống hai nhóm kỹ thuật trên, chất đánh dấu chất đồng vị phóng xạ ... để phát nhiều KN khác - Độ nhạy cao Kỹ thuật MD huúnh quang gi¸n tiÕp Kü thuËt MD huúnh quang gi¸n tiÕp Kü thuËt MD huúnh quang gi¸n tiÕp Kü thuËt MD huỳnh quang trực tiếp (trái) gián tiếp (phải)... -> kü thuËt MD huúnh quang (IFA: Immuno Fluorescence Assay) - Enzym -> kü tht MD hÊp phơ g¾n enzym (ELISA: Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) - Chất đồng vị phóng x¹ -> kü thuËt MD phãng x¹... tất loại KT cần dùng để phát KN khác - Độ nhạy không cao Kỹ thuật MD hnh quang trùc tiÕp kü tht miƠn dÞch hnh quang Kỹ thuật MD huỳnh quang gián tiếp Mục đích: - Phát định vị KN nằm vị trí khác