Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 5961:1995 trình bày về chất lượng đất - ảnh hưởng của các chất ô nhiễm lên giun đất (Eisenia fetida) - xác định độ độc cấp tính bằng cách sử dụng nền đất nhân tạo. Mời các bạn tham khảo.
Tiêu chuẩn việt nam TCVN 5961 : 1995 Chất l|ợng đất - ảnh h|ởng chất ô nhiễm lên giun đất (Eisenia fetida) - Xác định độ độc cấp tính cách sử dụng đất nhân tạo Soil quality - Effects of Pollutants on earthworms (Eisenia fetida) Determination of acute toxicity using artificial substrate Ph¹m vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định ph|ơng pháp xác định độ độc tối đa chất giun đất - (Eisenia fetida) qua da qua chất dinh d|ỡng cách sử dụng chất nhân tạo Ph|ơng pháp không áp dụng cho chất dễ bay tức chất mà giá trị H (hằng số Henry) hệ số riêng phần không khí/n|ớc lớn l cho chất có áp suất lớn 0,0133 Pa 250C Ph|ơng pháp không tính đến khả phân huỷ chất thử Tiêu chuẩn trích dẫn Những tiêu chuẩn sau sử dụng với tiêu chuẩn Vì tiêu chuẩn đ|ợc soát xét lại cách th|ờng xuyên, nên khuyến khích sử dụng tiêu chuẩn ISO l1274: - Chất l|ợng đất - Xác định đặc tính giữ n|ớc - Ph|ơng pháp phòng thí nghiệm ISO l1461: - Chất l|ợng đất - Xác định hàm l|ợng n|ớc đất sở thể tích Ph|ơng pháp khối l|ợng Định nghĩa Tiêu chuẩn sử dụng định nghĩa sau đây: 3.1 LC 50: nồng độ gây chết trung bình: nồng độ ban đầu chất thư giÕt chÕt 50% sè sóc vËt ®em thư trình thử 3.2 NOEC (nồng độ không quan sát thÊy hiƯu øng): nång ®é cao nhÊt cđa chÊt thư mà không quan sát thấy hiệu ứng làm chết hiệu ứng khác (nh| làm giảm trọng l|ợng) Chú thích: Cả hai đại l|ợng LC 50 NOEC đ|ợc biểu diễn miligam chất thử kilogam (khối l|ợng khô) chất đem thử (5.2) Nguyên tắc Xác định số phần trăm tử vong giun đất tr|ởng thành (loài Eisenia fetida) mẫu đất xác định chứa chất thử nồng độ khác sau ngày 14 ngày Chất thử đ|ợc đ|a vào lần trình thử đ|ợc hoàn thành không cần phải bổ sung chất thử nồng độ chất thử đ|ợc tính miligam chất thử kilogam chất khô đem thử Những kết thu đ|ợc từ phép thử đ|ợc so sánh với mẫu chuẩn đ|ợc dùng để đánh giá nồng độ gây nên số tử vong 50%r giun đất (LC 50, 14 ngµy) Chó thÝch: Cloaxetamit lµ mét chất so sánh thích hợp Quá trình thử trải qua hai b|íc: Tiªu chn viƯt nam TCVN 5961 : 1995 Phép thử sơ bộ: Phép thử cho giá trị gần nồng độ t|ơng ứng với tiêu diệt hoàn toàn không gây tử vong Những kết đ|ợc dùng để xác định khoảng nồng ®é cho phÐp thư cđa - PhÐp thư cđa x¸c định nồng độ gây tử vong 10% 90%; số liệu cho kết cuối Không thử chất nồng độ cao 1000mg cho l kg chất khô Nếu phép thử sơ chì rõ tử vong không cần thùc hiƯn phÐp thư cđa cïng Thc thư 5.1 Nguyên liệu sinh vật Nguyên liệu sinh vật giun ®Êt tr|ëng thµnh thuéc loµi Eisenia fetida Ýt nhÊt hai tháng tuổi với khối l|ợng |ớt 300mg 600mg Chú thích: Loài Eisenia fetida có phân loài mà số nhà phân loại xem nh| loài riêng biệt: Eisenia fetida Eisenia, andrei Chúng giống hình thái học nh|ng loài Eisenia fetida (E fetida) có sọc ngang dải đặc tr|ng phần đốt lại E fetida andrei (E.andrei) lại đặc điểm nh|ng lại có đốm màu đỏ nhạt Có thể sử dụng đ|ợc hai phân loài(loại) Các giun đất đ|ợc chọn cho thử nghiệm phải đạt đến chừng mực đồng kích th|ớc trọng l|ợng Tr|ớc thử cần phải rửa chóng b»ng n|íc ng Chó thÝch: KÜ tht mÉu vỊ nuôi d|ỡng Eeseia fetida đ|ợc chi phụ lục A 5.2 Chất thử Mỗi chậu thuỷ tinh (6.l) dùng l|ợng chất 500g (khối l|ợng khô) Chất đ|ợc gọi đất nhân tạo có thành phần sau: Phần trăm tính theo khối l|ợng khô: - Than bùn xay mịn không thấy vết tích thực vật: 10% - Đất sét Caolinit chứa không 30% caolinit: 20% - Cát thạch anh công nghiệp (cát mịn chủ yếu với trên: 70% 50% hạt có kích th|ớc 0,05 mm đến 0,2 mm); - Thêm l|ợng đủ canxi cacbonat đ|ợc nghiền nhỏ có độ tinh khiết phân tích để đ|a pH chất đ|ợc làm ẩm đến 6,0 + 0,5 (th|ờng khoảng 0,5% khối l|ợng thành phần khô) Chất đ|ợc làm ẩm n|ớc đ|ợc loại ion n|ớc cất để đạt đ|ợc 40% - 60% khả giữ n|ớc toàn phần đất, xác định theo ISO 11274 Xác định hàm l|ỵng n|íc chøa chÊt nỊn theo ISO 11461 Chó thích: Cho phép dùng loại n|ớc để đ|a chất thử vào đất Thiết bị Thiết bị thông th|ờng phòng thí nghiệm 6.1 Chậu thuỷ tinh, chậu cho thí nghiệm, dung tích khoảng lít đến lít, đậy không kín để đảm bảo trao đổi tr|ờng thử không khí 6.2 Thiết bị để xác định khối l|ợng khô chÊt nỊn theo ISO 11641 M«i tr|êng thư 7.1 Khu đất có hàng rào vây quanh kiểm soát nhiệt độ 20 + 20C Tiêu chuẩn việt nam TCVN 5961 : 1995 7.2 Nguồn sáng (đèn ống phát huỳnh quang trắng) có khả cung cấp c|ờng độ sáng định từ 400 Lux đến 800Lx chậu kiểm tra chu kì sáng/tối 12 giê: 12 giê vµ 16 giê, giê Quy trình 8.1 Chuẩn bị cho phép thử Nồng độ chất thử đ|ợc biểu diễn khối l|ợng chất thử khối l|ợng khô chất (mg/kg) (xem 5.2) 8.1.1 Giíi thiƯu c¸c chÊt thư 8.1.1.1 C¸c chÊt tan n|ớc Ngay tr|ớc bắt đầu phép thử, hoà tan l|ợng chất thử cần thiết để tạo nồng độ n|ớc (hoặc l|ợng cần thiết để làm ẩm đất để đạt đ|ợc yêu cầu 5.2) trộn kỹ với chất (5.2) nói tr|ớc đ|a chậu thuỷ tinh (6.l) Tiếp tục nh| mô tả 8.l.2.l 8.1.1.2 Các chất không tan n|ớc nh|ng tan dung môi hữu Hoà l|ợng chất thử cần thiết để thu đ|ợc nồng độ mong muốn dung môi bay (nh| axeton hexan) Cho chất thử vào chậu thuỷ tinh (6.1) víi chÊt nỊn (5.2) Trén cÈn thËn vµ làm bay dung môibằng cách đặt chậu thuỷ tinh vào tủ hết Sau thêm n|ớc theo (5.2) Trộn cẩn thận tiếp tục nh| mô tả 8.l.2 Chú ý: Cần phải cẩn thận tiếp xúc với dung môi để tránh nguy hiểm bị hít phải nổ tránh thiệt hại cho thiết bị chiết, bơm 8.1.1.3 Các chất không tan n|ớc dung môi hữu Đối với chất không tan dung môi hữu điều chế hỗn hợp gồm l0g cát thạch anh (xem 5.2) đ|ợc nghiền nhỏ l|ợng cần thiết chất thử để thu đ|ợc nồng độ mong muốn Chuyển hỗn hợp, phần lại chất (5.2) n|ớc (xem 5.2) vµo chËu thủ tinh (6.l) Trén kÜ vµ tiÕp tục nh| trình bày 8.l.2 8.1.2 Giới thiệu vật liệu sinh vật Xác định hàm l|ợng n|ớc pH đất nhân tạo đầu phép thử (khi chất thử axit bazơ không cần ®iỊu chØnh pH) LÊy l0 giun ®Êt ®· ®|ỵc chuẩn bị nh| 5.l, thắm khô chúng giấy hết n|ớc, cân cho chúng vào chậu chứa mẫu ,thư Che chËu chøa mÉu thư nh| ®· nãi ë 6.l đặt vào mảnh đất thử có rào xung quanh (7.l) 8.1.3 Chậu đối chứng Chuẩn bị chậu ®èi chøng gièng nh| ®èi víi chËu thư NÕu qu¸ trình thử đòi hỏi dùng dung môi(xem 8.l.l.2) cần chuẩn bị chậu đối chứng có dung môi nh|ng chất thử đậy chậu nh| nói 6.l 8.2 Thư s¬ bé Thùc hiƯn phÐp thư s¬ với nồng độ chất thử khác [ví dụ: 0,l mg/kg: l mg/kg: l0 mg/kg: l00 mg/kg vµ l.000 mg/kg, nồng độ đ|ợc biểu diễn miligam chất thử kilôgam chất khô (5.2)] phép kiểm tra dùng l0 giun đất cho nồng độ chậu thử Tiêu chuẩn việt nam 8.3 8.4 TCVN 5961 : 1995 Chn bÞ chËu thư nh| nói 8.l.l 8.l.2 Đật chậu thử vào môi tr|ờng nh| mô tả điều Sau ngày đêm giun sống lấy giun chết nhìn thấy Sau 14 ngày đếm giun sống giun chết chậu (một giun đ|ợc coi chết phản ứng bị gim châm từ phía tr|ớc) Tính phần trăm tử vong chậu chứa nồng độ Ghi chép triệu chứng quan sát thấy giun Phép thử cuối Dựa kết phép thử sơ bé, thùc hiƯn phÐp thư ci cïng ë nång độ chất thử theo cấp số nhân nồng độ cao không gây tử vong nồng độ thấp gây tử vong hoàn toàn Đồng thời lặp lại mẫu theo nồng độ phép kiểm tra chất thử (xem 8.l.3) cần thiết phép kiểm tra khác có dung môi đặt chậu chứa mẫu vào môi tr|ờng thử (điều 7) Trong thêi gian thư vµ sau 14 ngµy thùc hiƯn nh| chØ dÉn 8.2 Khi kÕt thóc phÐp thư xác định tổng số khối l|ợng giun sống chậu, hàm l|ợng n|ớc chậu kiểm tra, giá trị pH chậu nồng độ thử ChÊt chn Thùc hiƯn phÐp thư víi cloaxetamit tinh khiÕt phân tích theo quy trình đ|ợc mô tả 8.1.1.1 Chú thích: Đại l|ợng LC 50 (3.1) cần phải khoảng 20 mglkg 80 mg/kg Tính toán thể kết 9.1 Tính toán Xác định phần trăm tử vong thu đ|ợc từ phép thử nồng độ Chú thích: Khi số liệu đầy đủ giá trị LC 50 - 14d (14 ngày) độ tin cậy (T = 0,95) đ|ợc xác định cách sử dụng ph|ơng pháp tiêu chuẩn (Litch field and Wilcoxon ph|ơng pháp t|ơng đ|ơng) 9.2 Khi hai nồng độ liên tiếp tỉ lệ bé l,8 (ví dụ l0: 18) chØ cho nhÊt 0% vµ 100% tư vong hai giá đủ để khoảng LC 50 Thể kết Kết đ|ợc tính miligam kilogum chất khô, đại l|ợng LC 50 -14d (hoặc lâu phép thử đ|ợc kéo dài quy trình này, xem điều 9) nồng độ thử cao gây tử vong 0% nồng độ thử thấp gây tử vong 100% 10 Giá trị pháp lí phép thử Tất kết đ|ợc xem có hiệu lực nếu: Phần trăm tử vong quan sát đ|ợc phép kiểm tra < l0% Sù hao hơt trung b×nh sinh khèi cđa giun phép kiểm tra không v|ợt 20% 11 Báo c¸o thư nghiƯm B¸o c¸o thư nghiƯm bao gåm c¸c thông tin sau: a) Trích dẫn tiêu chuẩn b) Các kết đ|ợc trình bày nh| 9.2; Tiêu chuẩn việt nam TCVN 5961 : 1995 c) Mô tả đầy đủ nguyên liệu sinh vật đ|ợc dùng (loài, tuổi khoảng khối l|ợng điều kiện nuôi, ng|ời cung cấp) d) Ph|ơng pháp điều chế chất thử bao gồm dung m«i cho chÊt kh«ng tan n|íc; e) ChØ râ chất chuẩn kết thu đ|ợc sử dụng nó; f) Các điều kiện môi tr|ờng thử; g) Ph|ơng pháp đ|ợc dùng để chuẩn hoá giá trị LC 50; h) Bảng thống kê phần trăm tử vong chậu, nồng độ phép kiểm tra; i) Khối l|ợng giun sống vào phép thử j) Nêu số liệu có sẵn, nồng độ cao không quan sát thấy hiệu ứng (NOEC) k) Mô tả triệu chứng bệnh lí thay đổi rõ rệt đ|ợc nhận thấy sinh vật thử l) Hàm l|ợng n|ớc pH "đất nhân tạo" điểm xuất phát điểm phép thử m) Tất chi tiết tiến hành không ghi tiêu chuẩn trình t|ơng tự xảy có ảnh h|ởng đến kết ; n) Đồ thị biểu diễn phụ thuộc nồng độ tác dụng Phụ lục A Ví dơ vỊ kÜ tht nu«i d|ìng Eisenia fetida Phơ lơc cho dẫn nuôi d|ỡng sinh vật thí nghiệm đ|ợc dùng để xác định độc tính tối đa Có thể nuôi Eisenia fetida đủ loại chất thải động vật Môi tr|ờng nuôi d|ỡng thích hợp hỗn hợp 50: 50 phân ngựa phân trâu bò than bùn Môi tr|ờng cần có pH khoảng tõ ®Õn (®iỊu chØnh b»ng canxi cacbonat), ®é dẫn điện thấp (nhỏ 6mS) nồng độ muối nhỏ 0,5% không bị nhiễm bẩn amoniac n|ớc giải gia súc Chất phải ẩm nh|ng không |ớt Có thể dùng hộp nuôi d|ỡng gỗ chậu thấp có đ|ợc giun đạt tiêu chuẩn tuổi khối l|ợng tốt nuôi từ trứng Đặt giun tr|ởng thành vào hộp nuôi d|ỡng chứa chất để sản xuất trứng lấy chúng sau 14 đến 21 ngày Có thể dùng giun cho đợt sinh sản tiếp Các giun đất nở từ trứng đ|ợc dùng cho phép thử tr|ởng thành Thực nuôi d|ỡng phòng điều hoà nhiệt độ 20 + 20C thích hợp nhiệt độ giun tr|ởng thành sau ®Õn th¸ng ... nghiệm Báo cáo thử nghiệm bao gồm thông tin sau: a) Trích dẫn tiêu chuẩn b) Các kết đ|ợc trình bày nh| 9.2; Tiêu chuẩn việt nam TCVN 5961 : 1995 c) Mô tả đầy đủ nguyên liệu sinh vật đ|ợc dùng... kilôgam chất khô (5.2)] phép kiểm tra dùng l0 giun đất cho nồng độ chậu thử Tiêu chuẩn việt nam 8.3 8.4 TCVN 5961 : 1995 Chuẩn bị chậu thử nh| nói 8.l.l 8.l.2 Đật chậu thử vào môi tr|ờng nh| mô...Tiªu chn viƯt nam TCVN 5961 : 1995 PhÐp thư sơ bộ: Phép thử cho giá trị gần nồng độ t|ơng ứng với tiêu diệt hoàn toàn không gây tử vong Những kết đ|ợc dùng