Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 8170-4:2009

Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 8170-4:2009 đưa ra hướng dẫn về một số kỹ thuật được khuyến cáo để xác định dư lượng thuốc bảo vệ thực vật và các hợp chất polyclobiphenyl (PCB) trong thực phẩm chứa chất béo, các phép thử khẳng định và đưa ra qui trình làm sạch để loại lipit khi phân tích các lượng lớn chất béo.

TIÊU CHUẨN VIỆT NAM TCVN 8170-4 : 2009 THỰC PHẨM CHỨA CHẤT BÉO – XÁC ĐỊNH THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT VÀ POLYCLOBIPHENYL (PCB) – PHẦN 4: PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH, PHÉP THỬ KHẲNG ĐỊNH VÀ CÁC QUI TRÌNH KHÁC Fatty food – Determination of pesticides and polychlorinated biphenyls (PCBs) – Part : Determination, confirmatory tests, miscellaneous Lời nói đầu TCVN 8170-4:2009 hoàn toàn tương đương với EN 1528-4:1996; TCVN 8170-4:2009 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC/F13 Phương pháp phân tích lấy mẫu biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đề nghị, Bộ Khoa học Công nghệ công bố Bộ Tiêu chuẩn TCVN 8170 (EN 1528), Thực phẩm chứa chất béo – Xác định thuốc bảo vệ thực vật polyclobiphenyl (PCB) gồm phần sau đây: - TCVN 8170-1:2009 (EN 1528-1:1996), Phần 1: Yêu cầu chung; - TCVN 8170-2:2009 (EN 1528-2:1996), Phần 2: Chiết chất béo, thuốc bảo vệ thực vật, PCB xác định hàm lượng chất béo; - TCVN 8170-3:2009 (EN 1528-3:1996), Phần 3: Phương pháp làm sạch; - TCVN 8170-4:2009 (EN 1528-4:1996), Phần 4: Phương pháp xác định, phép thử khẳng định qui trình khác Lời giới thiệu Tiêu chuẩn bao gồm phương pháp thử đa dư lượng nhau: khơng có phương pháp riêng lẻ nhận biết phương pháp tốt lĩnh vực phương pháp tiếp tục hoàn thiện Các phương pháp chọn tiêu chuẩn kiểm tra xác nhận sử dụng rộng rãi Châu Âu Bất kỳ thay đổi phương pháp sử dụng cần cho kết tương đương THỰC PHẨM CHỨA CHẤT BÉO – XÁC ĐỊNH THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT VÀ POLYCLOBIPHENYL (PCB) – PHẦN 4: PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH, PHÉP THỬ KHẲNG ĐỊNH VÀ CÁC QUI TRÌNH KHÁC Fatty food – Determination of pesticides and polychlorinated biphenyls (PCBs) – Part : Determination, confirmatory tests, miscellaneous Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn đưa hướng dẫn số kỹ thuật khuyến cáo để xác định dư lượng thuốc bảo vệ thực vật hợp chất polyclobiphenyl (PCB) thực phẩm chứa chất béo, phép thử khẳng định đưa qui trình làm để loại lipit phân tích lượng lớn chất béo Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm cơng bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn khơng ghi năm cơng bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) TCVN 8170-1:2009 (EN 1528-1:1996), Thực phẩm chứa chất béo – Xác định thuốc bảo vệ thực vật polyclobiphenyl (PCB) – Phần 1: Yêu cầu chung TCVN 8170-2: 2009 (EN 1528-2:1996), Thực phẩm chứa chất béo – Xác định thuốc bảo vệ thực vật polyclobiphenyl (PCB) – Phần 2: Chiết chất béo, thuốc bảo vệ thực vật, PCB xác định hàm lượng chất béo TCVN 8170-3:2009 (EN 1528-3:1996) Thực phẩm chứa chất béo – Xác định thuốc bảo vệ thực vật polyclobiphenyl (PCB) – Phần 3: Phương pháp làm Yêu cầu chung Các phương pháp mô tả tiêu chuẩn cho phép tạm thời nhận biết định lượng phương pháp sắc ký khí sử dụng detector chọn lọc Tất kết dương tính cần khẳng định việc nhận biết định lượng Các thủ tục liệt kê để khẳng định cột sắc ký khí thay thế, detector sắc ký khí thay thế, sắc ký lớp mỏng (TLC), sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC), cột phân đoạn, dẫn xuất, đo phổ … phải chuẩn Các kết thu dùng khối phổ kết luận cuối để nhận biết/khẳng định Xác định 4.1 Sắc ký khí 4.1.1 Yêu cầu chung Sử dụng hệ thống GC thích hợp, tốt trang bị gia nhiệt riêng rẽ cho bơm mẫu, detector lò cột Cho dù việc chọn phận khác hệ thống GC theo kinh nghiệm người phân tích, cần theo khuyến cáo sau Các detector cần điều chỉnh theo hướng dẫn nhà sản xuất Các dao động độ nhạy detector cần kiểm tra định kỳ cách kiểm tra độ tuyến tính đường chuẩn sử dụng dung dịch chuẩn thuốc bảo vệ thực vật Bộ phận định lượng hệ thống sắc ký khí cần bao gồm hệ thống tích phân cho phép tính tốn khơng chiều cao pic mà diện tích pic Trong thực tế thu kết tương đương cho dù có áp dụng điều kiện GC khác hãng khác sản xuất Mặt khác, thông số GC chuẩn qui định lúc đảm bảo cho kết giống Xem Phụ lục B điều kiện sắc ký khí điển hình 4.1.2 Cột Có thể sử dụng cột nhồi cột mao quản Khi sử dụng cột nhồi khuyến cáo sử dụng cột thủy tinh dài từ 1,5 m đến m đường kính từ mm đến mm, nhiên, cột khơng thích hợp cho việc tách chất tương tự PCB Các vật liệu nhồi phải trơ bền Các vật liệu cho thấy thích hợp Gaschrom Q, Chromosorb W/HP, Anachrom Q có cỡ hạt từ 125 μm đến 150 μm (100 mesh đến 120 mesh), 150 μm đến 190 μm (80 mesh đến 100 mesh) từ 190 μm đến 250 μm (60 mesh đến 80 mesh)1 Đối với phép phân tích dư lượng khác cho thấy thành công sử dụng loại pha tĩnh hỗn hợp pha tĩnh Ví dụ: loại thường sử dụng nhiều nhất: - Hydrocacbon: Apiezon L; - Methylsilicone: DC-11, DC-200, OV-1, OV-101, SP-2100, SE-30; - Methylphenylsilicone: OV-17, OV-25, OV-61, SP-2250, SE-52, SE-54;  Gaschrom Q, Chromosorb W/HP, Anachrom Q ví dụ sản phẩm tổng hợp bán sẵn Thông tin đưa tạo thuận tiện cho người sử dụng cịn CEN khơng ấn định sử dụng sản phẩm - Trifluoropropylmethylsilicone: QF-1, OV-210, SF-2401; - Phenylcyanopropylmethylsilicone: DB-1301, DB-1701, OV-225, XE-60; - Polyethylene glycol: Carbowax 20 M2 Các pha tĩnh cần phủ cẩn thận lên cột, tỷ lệ phụ thuộc vào cột/hỗn hợp pha chọn Các cột nhồi cần ổn định 24 h nhiệt độ gần với nhiệt độ tối đa khuyến cáo cho loại pha tĩnh sử dụng cần kiểm tra hiệu độ nhạy nhiệt độ qui định sử dụng hỗn hợp chuẩn thuốc bảo vệ thực vật Phải tháo cột khỏi detector trình ổn định Cần sử dụng khí nitơ khơ, tinh khiết [khơng chứa oxy, đặc biệt sử dụng detector cộng kết điện tử (ECD)], hỗn hợp khí metan/argon làm khí mang cột nhồi (trong trường hợp sử dụng ECD xung) Tốc độ phụ thuộc vào kích thước kiểu loại cột sử dụng Nhìn chung, tốc độ dịng khí cần kiểm sốt xác Định kỳ cần làm lọc rây phân tử lắp đặt cho tất nguồn khí Cuối cùng, điều kiện GC (chiều dài cột, kiểu pha tĩnh, bơm, detector nhiệt độ cột, tốc độ dòng khí….) phải đảm bảo cho tách hết dư lượng thuốc bảo vệ thực vật hợp chất tương tự PCB có mặt mẫu Sắc ký mao quản tách tốt cột nhồi Khuyến cáo sử dụng kỹ thuật đặc biệt dịch chiết phức hợp Cột silica nung chảy có đường kính từ 0,20 mm đến 0,35 mm dài từ 20 m đến 60 m chứng minh phù hợp hiệu tách, hạn sử dụng đặc tính học chúng Trong số trường hợp sử dụng cột lỗ to có đường kính 0,5 mm đến 0,8 mm Các pha tĩnh sau thường sử dụng để phủ cột: - SE-30 (tương đương với OV-1, DB-1, CP Sil 5, BP-1, SPB-1…); - SE-54 (tương đương với DB-5, CP Sil 8, BP-5, SPB-5….); - OV-17 (tương đương với OV-11, OV-22, SP-2250, DC-710, DB 608…); - DB 1301 (tương đương với DB-624); - DB-1701 (tương đương với OV-1701, CP Sil 19-CB, BP-10, SPB-7…); - OV-225 (tương đương với DB-225, SIL 43-CB, SPB-2330,…); - WAX (tương đương với DB-WAX, CP-WAX-52-CB, Carbowax 20 M ….) Phép thử kiểm tra hiệu tách cột mao quản nêu 7.2 TCVN 81701:2009 (EN 1528-1:1996) 4.1.3 Kỹ thuật bơm Các kỹ thuật bơm khác sau: a) Bơm khơng chia dịng Grob b) Bơm lên cột c) Bơm hóa theo chương trình nhiệt độ (PTV) Khả áp dụng kỹ thuật phụ thuộc vào thiết bị sử dụng yêu cầu đặc biệt 4.2 Phép thử ban đầu  Gaschrom Q, Chromosorb W/HP, Anachrom Q, Apiezon L, DC-11 …… Carbowax 20 M ví dụ sản phẩm có bán sẵn Thơng tin đưa tạo thuận tiện cho người sử dụng; cịn CEN khơng ấn định sử dụng sản phẩm  SE-30… Carbowax 20 M ví dụ sản phẩm tổng hợp bán sẵn Thông tin đưa tạo thuận tiện cho người sử dụng; cịn CEN khơng ấn định sử dụng sản phẩm Xác định dải tuyến tính động học độ nhạy detector điều kiện GC thực tế sử dụng cách bơm dung dịch chuẩn pha loãng Bơm lên sắc ký khí lượng thích hợp (từ 1,0 μl đến 10 μl phụ thuộc vào hệ thống) dịch chiết tinh thu theo phương pháp phân tích sử dụng Sắc đồ thu định tính định lượng nồng độ hợp chất có mặt dịch chiết 4.3 Xác định Đảm bảo tất phép đo thực dải tuyến tính động học hệ thống Chuẩn bị hai dung dịch chuẩn thuốc bảo vệ thực vật chất tương tự PCB nhận biết dung môi mà dùng dịch chiết cuối (thường dầu nhẹ n-hexan) Các nồng độ cuối chúng cần bao trùm nồng độ dự kiến dịch chiết cuối Sau bơm thể tích dịch chiết cuối thu hai nhiều dung dịch chuẩn vào sắc ký khí Thực bơm phần tinh mẫu chiết sau bơm dung dịch chuẩn Đo diện tích chiều cao pic Các kết thu từ hai lần bơm dung dịch chuẩn không khác % Việc sử dụng chất chuẩn nội tốt cho mục đích [xem Điều TCVN 8170-3:2009 (EN 1528-3:1996) Cần đảm bảo chất chuẩn mẫu hòa tan loại dung mơi, khơng có bay khác dẫn đến khác thời gian lưu diện tích chiều cao pic Ví dụ: tăng chiều cao pic 35 % chất tương tự PCB thay iso-octan toluen Các hàm lượng chất tương tự PCB riêng lẻ không cộng gộp thành hàm lượng PCB tổng số giá trị khơng có ý nghĩa Đồng thời khơng dùng phương pháp ngoại suy khác để suy đoán hàm lượng PCB tổng số (ví dụ: tính theo Clophen® A 60) chúng thường dựa vào giả định khơng xác kiểu phân bố PCB mẫu hồn tồn xác sản phẩm PCB công nghệp thương mại Phép xác định khả thi độ thu hồi trung bình nhiều phép xác định nằm khoảng 70 % đến 100 % so với độ thu hồi phép xác định Để làm điều này, nên kiểm tra định kỳ phép đo lặp lại độ thu hồi mẫu thêm chuẩn biết trước Phép thử khẳng định [1] 5.1 Yêu cầu chung Khi phép phân tích thực cho mục đích qui định điều quan trọng phép thử khẳng định thực trước báo cáo điều bất lợi mẫu chứa dư lượng thuốc bảo vệ thực vật thường khơng liên quan đến hàng hóa giới hạn dư lượng tối đa (MRL) cho thấy bị vượt Sự nhiễm bẩn mẫu với hóa chất khơng phải thuốc bảo vệ thực vật luôn xuất số phương pháp sắc ký hợp chất có đặc tính tương tự với thuốc bảo vệ thực vật gây nhầm lẫn Các ví dụ sắc ký khí gồm đáp ứng ECD với este phtalat detector đặc thù phospho với hợp chất có chứa lưu huỳnh thiếc), ion hóa lửa kiềm (phospho, nitơ) đo culong/đo độ dẫn điện (nitơ, lưu huỳnh halogen) cho thông tin bổ sung dư lượng Tỷ lệ đáp ứng lưu huỳnh/phospho thu sử dụng detector quang phổ lửa cung cấp thơng tin hữu ích trường hợp phosphoothioat 5.4 Sắc ký lớp mỏng (TLC) Trong số trường hợp, việc khẳng định sắc ký khí phù hợp sắc ký lớp mỏng Việc nhận dạng dựa vào giá trị Rr phản ứng quan sát Tài liệu khoa học có chứa nhiều tài liệu tham khảo kỹ thuật Báo cáo IUPAC thuốc bảo vệ thực vật [2] đánh giá kỹ thuật cung cấp giới thiệu thích hợp Tuy nhiên, khía cạnh định lượng phép sắc Clophen® A 60 ví dụ sản phẩm tổng hợp bán sẵn Thông tin đưa tạo thuận tiện cho người sử dụng; cịn CEN khơng ấn định sử dụng sản phẩm ký lớp mỏng bị hạn chế Việc mở rộng thêm phương pháp kéo theo việc tách vùng sắc ký tương ứng với Rf hợp chất cần tìm cách rửa giải khỏi vật liệu lớp mỏng phân tích khẳng định vật lý hóa học Dung dịch thuốc bảo vệ thực vật chuẩn chấm sắc ký dọc theo dịch chiết mẫu để tránh vấn đề không lặp lại Rr Chấm chùm dịch chiết với thuốc bảo vệ thực vật cung cấp thơng tin bổ ích Ưu điểm sắc ký lớp mỏng nhanh, giá thành rẻ áp dụng cho vật liệu nhạy với nhiệt, nhược điểm có độ nhạy thấp sắc ký khí cần phải làm đủ Một số vấn đề gặp phải độ ẩm cao nhiệt độ cao làm giảm độ lặp lại 5.5 Sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) HPLC sử dụng thuận lợi để khẳng định dư lượng ban đầu tìm thấy sắc ký khí kỹ thuật khác số trường hợp định ưu tiên kỹ thuật định lượng Dẫn xuất trước cột sau cột, và/hoặc sử dụng detector khác người phân tích tự chọn, đặc biệt phân tích hợp chất nhạy với nhiệt bay mà khó phân tích sắc ký khí 5.6 Cột phân đoạn Việc rửa giải khỏi cột sắc ký để làm dịch chiết mẫu giúp cho việc kiểm tra nhận dạng hợp chất Theo đó, sở khẳng định thiết lập qui trình tách chiết làm 5.7 Tạo dẫn xuất 5.7.1 Phản ứng hóa học Các phản ứng hóa học phạm vi nhỏ thường sử dụng, kết phân hủy, bổ sung đông đặc thuốc bảo vệ thực vật, sau sản phẩm kiểm tra lại kỹ thuật sắc ký Các phản ứng sinh sản phẩm chất có thời gian lưu và/hoặc độ nhạy phát khác với hợp chất gốc Mẫu thuốc bảo vệ thực vật chuẩn cần xử lý với dư lượng bị nghi ngờ cho kết so sánh trực tiếp Dịch chiết tăng cường cần kèm theo để chứng minh phản ứng xảy sau có mặt vật liệu mẫu chiết Về phản ứng hóa học dùng để khẳng định cơng bố [3] Các phản ứng hóa học có ưu điểm nhanh dễ tiến hành cần có thuốc thử đặc biệt cần phải đặt hàng và/hoặc làm 5.7.2 Phản ứng vật lý Một kỹ thuật hữu dụng làm thay đổi quang hóa dư lượng thuốc bảo vệ thực vật để tạo nhiều sản phẩm xác định sắc ký [4] Mẫu chuẩn thuốc bảo vệ thực vật dịch chiết tăng cường phải xử lý theo cách Các mẫu chứa nhiều dư lượng thuốc bảo vệ thực vật gặp khó khăn diễn giải kết Khi đó, cần tiến hành tách chiết sơ dư lượng cụ thể sắc ký lớp mỏng, HPLC cột phân đoạn trước phản ứng 5.7.3 Các phương pháp khác Có nhiều loại thuốc bảo vệ thực vật phân hủy/chuyển hóa enzym Khác với phản ứng hóa học thơng thường, q trình đặc trưng nói chung gồm phản ứng oxy hóa, thủy phân loại nhóm alkyl Các sản phẩm có đặc tính sắc ký khác với thuốc bảo vệ thực vật gốc sử dụng để khẳng định so sánh với sản phẩm phản ứng dùng thuốc bảo vệ thực vật chuẩn 5.8 Đo khối phổ (MS) Các kết thu khối phổ cung cấp chứng cuối cho mục đích khẳng định/nhận dạng [5], [6] Khi có sẵn thiết bị này, nên chọn kỹ thuật khẳng định Có hai phương pháp để đưa mẫu vào thiết bị Phương pháp ưu tiên sử dụng chiết tách sắc ký khí trước áp dụng đo khối phổ Điều cho phép phân tích đầy đủ khối phổ pic quan sát phân tích sơ Cách khác, mẫu bơm trực tiếp Phương pháp sử dụng với TLP HPLC kỹ thuật sử dụng phương pháp khẳng định ban đầu Dư lượng tách kỹ thuật phân lập xác định đo khối phổ Để tăng độ nhạy, đặc biệt với thiết bị quét nhanh, kỹ thuật biết phát đơn ion đa ion sử dụng Cần chọn đủ lượng mảnh ion để đảm bảo việc nhận dạng rõ ràng Độ nhạy tăng liên quan đến ion phân tử thu cách sử dụng ion hóa hóa học thay cho bắn phá electron Vì thiết bị khối phổ thường nhạy với mức nanogram số dịch chiết từ phép phân tích sắc ký khí ban đầu cần phải đặc trước phân tích sắc ký khối phổ, đặc biệt sử dụng detecto cộng kết điện tử để định lượng Trong số trường hợp cần phải làm thêm, đặc biệt cần thu toàn sắc phổ Các vấn đề gặp phải với hợp chất nhạy với nhiệt trình đo sắc ký khối phổ cần ý đặc biệt kết hợp sắc ký khí sắc ký khối phổ Hầu hết sắc ký khối phổ khơng có phản ứng khác hợp chất, nên gặp phải vấn đề có mặt chất nhiễm bẩn rửa giải 5.9 Đo phổ Hiện sử dụng phổ cộng hưởng từ hạt nhân, Raman hồng ngoại phân tích dư lượng thuốc bảo vệ thực vật Các kỹ thuật sử dụng cuvet phản xạ, microcuvet, đầu dò micro, ánh sáng laze, cộng hưởng từ hạt nhân biến đổi Fourier, v.v… xây dựng Điều tăng chất lượng phổ, tăng độ nhạy việc áp dụng kỹ thuật mở rộng phương pháp phát sau cột để nhận dạng hợp chất phân lập kỹ thuật sắc ký Qui trình làm bổ sung lượng lớn chất béo sử dụng Calflo E ®5 [7] 6.1 Yêu cầu chung Các phương pháp thường sử dụng nhiều để xác định hợp chất nhóm clo hữu phospho hữu không phân cực chất béo sản phẩm chứa chất béo cho phép sử dụng lượng nhỏ mẫu có kết độ nhạy bị hạn chế Các thuốc bảo vệ thực vật chất béo phân cực nhiều thường khơng xác định phương pháp này, gặp chất gây nhiễu, chúng khơng thể tách hoàn toàn khỏi chất béo lipit khác Nguyên tắc phương pháp loại bỏ phần lớn lipit khỏi dung dịch béo chất hấp thụ thích hợp Các dịch chiết thu xử lý phương pháp B D [(xem Điều Điều TCVN 8170-3 : 2009 (EN 1528-3 : 1996)] Theo cách mẫu chất béo tăng đến 30 g độ nhạy cải thiện đáng kể Ngoài ra, nhiều hợp chất phân cực chất chuyển hóa xác định tốt trước xử lý phương pháp B 6.2 Nguyên tắc Dung dịch axeton chất béo cần phân tích trộn kỹ với huyền phù canxi silicat tổng hợp (tên thương mại Calflo E®) Hỗn hợp lọc hai lần, thể tích dịch lọc đo dung dịch cô quay đến khô 6.3 Thuốc thử vật liệu thử Tất thuốc thử vật liệu sử dụng phải thích hợp cho phép phân tích dư lượng PCB phải phù hợp với Điều TCVN 8170-1:2009 (EN 1528-1:1996) Tinh theo qui trình nêu Phụ lục A TCVN 8170-3:2009 (EN 1528-3:1996), cần 6.3.1 Axeton 6.3.2 Axetonitril 6.3.3 Iso-octan Calflo E® Celit® ví dụ sản phẩm tổng hợp bán sẵn Thông tin đưa tạo thuận tiện cho người sử dụng; cịn CEN khơng ấn định sử dụng sản phẩm 6.3.4 Calflo E®, sấy khơ qua đêm 130 oC 6.3.5 Celite® 545, sấy khơ qua đêm 130 oC 6.4 Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ phịng thử nghiệm thơng thường cụ thể sau: 6.4.1 Bộ trộn tốc độ cao, gắn với bình thủy tinh kín động chống nổ đồng hóa 6.4.2 Cốc có mỏ, dung tích 100 ml 6.4.3 Phễu sứ Buchner, đường kính 12 cm có bình lọc chân khơng 6.4.4 Ống đong chia độ, dung tích 200 ml, dạng cao 6.4.5 Bình cầu đáy trịn, dung tích 500 ml 250 ml, có khớp nối mài 6.4.6 Bộ quay, có bình cầu đáy trịn, dung tích 500 ml, có nồi cách thủy kiểm sốt nhiệt độ từ 20 oC đến 50 oC 6.4.7 Giấy lọc gấp nếp, đường kính 20 cm, chiết axeton 6.4.8 Giấy lọc trịn, đường kính 12 cm, tơc độ lọc nhanh chậm 6.5 Cách tiến hành Hòa tan g đến 30 g chất béo 25 ml axeton (6.3.1) đựng cốc có mỏ Khuấy trộn dung dịch chất béo bình trộn có chứa 200 ml axetonitril (6.3.2), 20 g Calflo E ® (6.3.4) 10 g Celite® 545 (6.3.5) Dùng lượng nhỏ axetonitril để tráng cốc có mỏ (tổng số 25 ml) Trộn mạnh dung dịch tao thành 250 ml (V2) min, lọc huyền phù cách hút cho giấy lọc phễu sứ Bucher Chỉ dùng phương pháp hút nhẹ để đảm bảo cho phần dịch lọc bị bay mức nhỏ Lọc dịch lọc qua giấy lọc gấp nếp khơ phủ g Calflo E ® cho vào ống đong chia độ Đo thể tích dịch lọc (V1) chuyển sang bình đáy trịn dùng axeton để tráng bình Thêm ml iso-octan (6.3.3) cho cất quay nhiệt độ 40 oC đến khoảng từ 0,5 ml đến ml Loại hết dung mơi dư dịng nitơ nhẹ nhiệt độ phịng CHÚ THÍCH Với phần mẫu thử từ 10 g đến 30 g loại dầu mỡ khác nhau, dư lượng lại sau bay khoảng 0,1 g đến 0,7 g Một lượng lipit lớn thu từ chất béo sữa dầu ôliu tự nhiên so với mỡ thực phẩm tinh luyện mà loại tốt sử dụng phần mẫu thử từ 10 g đến 15 g Sử dụng phần mẫu thử sáp từ g đến 10 g, phần lại sau bay từ g đến g CHÚ THÍCH Để tránh thất dịch lọc bay hơi, cần hạn chế lọc cách hút thời điểm trước lượng dịch lọc bị khô, chí cho dù thể tích dịch lọc thu nằm khoảng từ 100 ml đến 150 ml CHÚ THÍCH Thực nghiệm cho thấy thực phẩm có chứa chất béo dạng khơ (lịng đỏ trứng dạng khô, bột cacao) thức ăn hạt có dầu (hạt cải, hạt anh túc, hạt lạc) làm trực tiếp quy trình mơ tả Các mẫu đồng hóa bình trộn với 25 ml axeton, 225 ml axetonitril, 20 g Calflo E® 10 g Celite® 545 Huyền phù làm theo 6.5 Khối lượng mẫu điều chỉnh theo hàm lượng chất béo lượng lipit giữ lại dịch chiết 6.6 Đánh giá khối lượng mẫu chất béo Phần lại sau bay thu 6.5 tương ứng với phần chất béo (G corr), Gcorr chất béo tính theo cơng thức (1): Gcorr = đó: G V1 (1) V2 G khối lượng mẫu, tính gam (g); V1 thể tích dịch chiết sau làm sạch, tính mililit (ml); V2 thể tích ban đầu (250 ml), tính mililit (ml); 6.7 Xử lý Để xử lý phần lại sau bay thu 6.5, phương pháp B D [xem Điều Điều TCVN 8170-3:2009 (EN 1528-3:1996)] cho thấy phù hợp, xem Bảng Khi mẫu cần phân tích hợp chất nhóm clo hữu phospho hữu không phân cực, tốt sử dụng phương pháp D cơng việc đơn giản tốn thời gian Sử dụng phương pháp B nhiều hợp chất clo hữu phân cực số chất chuyển hóa cần xác định thêm Ngoài ra, dịch chiết làm nhiều cho phương pháp B thích hợp để phân tích vật liệu mà Calflo E® loại phần lipit Các độ thu hồi hợp chất cần phân tích xác định có làm thêm dịch chiết Trong nghiên cứu liên phòng thử nghiệm chín phịng thử nghiệm tham gia, phép thử độ thu hồi thực mẫu kiểm chứng dầu hướng dương tinh luyện bổ sung thuốc bảo vệ thực vật chất chuyển hóa khác nồng độ từ 0,02 mg/kg đến 16 mg/kg Bảng liệt kê hợp chất có độ thu hồi tổng số từ 70 % đến 100 % (trong nhiều trường hợp dao động từ 80 % đến 95 %) thu quy trình liên quan đến phương pháp B phương pháp D Bảng – Các hợp chất clo hữu phospho hữu gồm vài chất chuyển hóa thu hồi mức 70 % (được đánh dấu +) không thu hồi (được đánh dấu -) phép thử độ thu hồi có làm dịch chiết phương pháp B phương pháp D Hợp chất B D Hợp chất B D aldrin (HHDN) + + azinphos-ethyl + - -chlordane + + carbophenothion + + chlorfenvinphos + - chlorfenson + o, p’-TDE (DDD) + + diazinon + o, p’-TDE (DDD) + + dioxathion + o, p’-DDE + + ethion + - o, p’-DDE + + fenclorphos + + o, p’-DDT + + malation + - o, p’-DDT + + parathion-etyl + - dieldrin (HEOD) + + Parathion-metyl + -endosulfan + + phosalone + -endosulfan + - endosulfan sulfate + - endrin + + fenson + -HCH + + -HCH + + -HCH (lindane) + + - -HCH + + heplachlor + + heplachlor epoxide + + hexachlorobenzene + + methoxychlor + PCB + quinlozene + tetrasul + camphechlor (toxaphene) + + PHỤ LỤC A (Tham khảo) CÁC ĐIỀU KIỆN VẬN HÀNH SẮC KÝ KHÍ ĐIỂN HÌNH A.1 Thuốc bảo vệ thực vật nhóm clo hữu A.1.1 Điều kiện vận hành Cột: mao quản silica nung chảy DB-5 (dài 30 m, đường kính 0,25 mm, độ dày màng 0,23 μm ); Nhiệt độ cột: đẳng nhiệt 110 oC min, cài chương trình nâng nhiệt 6oC /min từ 110 oC đến 245 oC, đẳng nhiệt 245 oC Detector: detector cộng kết điện tử, nhiệt độ 350 oC; Bơm: bay có cài đặt chương trình nhiệt độ (PTV) Chương trình PTV: thời gian (min) Tốc độ chia nhánh trừ 0,15 chia-mở trừ 0,10 nhiệt độ PTV 40 oC 0,20 chia-đóng 0,25 nhiệt độ PTV 250 oC 2,00 chia-mở 4,00 nhiệt độ PTV 40 oC 50ml/min A.1.2 Điều kiện vận hành Cột: mao quản silica nung chảy DB 1701 (dài 30 m, đường kính 0,53mm, độ dày màng 1,0 μm ); Nhiệt độ cột: đẳng nhiệt 80 oC min, cài chương trình nâng nhiệt 30oC /min từ 80 oC đến 150 oC oC/min từ 150 oC đến 280 oC Detector: detector cộng kết điện tử, nhiệt độ 280 oC; Bơm: bay có cài đặt chương trình nhiệt độ (PTV); Chương trình PTV: thời gian (min) trừ 0,15 nhiệt độ PTV 40 oC trừ 0,10 chia-mở 0,20 chia-đóng 0,25 nhiệt độ PTV 250 oC 2,00 chia-mở 4,00 nhiệt độ PTV 40 oC A.2 Các chất tương tự PCB A.2.1 Điều kiện vận hành Cột: mao quản silica nung chảy CP Sil (dài 50 m, đường kính 0,34mm, độ dày màng 0,24 μm ); Nhiệt độ cột: đẳng nhiệt 90 oC min, cài nâng nhiệt 35 oC /min từ 90oC đến 160oC đẳng nhiệt 160 oC min, chương trình nâng nhiệt oC/min từ 160 oC đến 244 oC, đẳng nhiệt 10 Bơm: bơm khơng chia dịng (1 min), nhiệt độ 250 oC; Detector: detector cộng kết điện tử, nhiệt độ 350 oC; Tốc độ dịng khí: khí mang heli, áp suất 1,5 x 105 Pa, khí làm nitơ 35 ml/min; A.2.2 Điều kiện vận hành Cột: mao quản silica nung chảy DB-1 (dài 25 m, đường kính 0,32mm, độ dày màng μm ); Nhiệt độ cột: đẳng nhiệt 90 oC min, cài nâng nhiệt 35 oC /min từ 90oC đến 160oC đẳng nhiệt 160oC min, chương trình nâng nhiệt 2oC/min từ 160oC đến 220oC 5oC /min từ 220oC đến 240oC đẳng nhiệt 240oC 10 Bơm: bơm khơng chia dịng (1 min), nhiệt độ 250oC; Detector: detector cộng kết điện tử, nhiệt độ 300 oC; Tốc độ dịng khí: khí mang heli, áp suất 0,8 x 105 Pa, khí làm nitơ 35 ml/min; A.3 Thuốc bảo vệ thực vật nhóm phospho hữu A.3.1 Điều kiện vận hành Cột: mao quản silica nung chảy DB-1 (dài 30 m, đường kính 0,25mm, độ dày màng 0,25 μm ); Nhiệt độ cột: chương trình nâng nhiệt 50 oC /min từ 50 oC đến 150 oC 10 oC /min từ 150 oC đến 250 oC; Detector: detector thermionic phương thức P N/P, nhiệt độ 275 oC; Bơm: nhiệt độ 250 oC; A.3.2 Điều kiện vận hành Cột: mao quản silica nung chảy DB-1301 (dài 30 m, đường kính 0,25mm, độ dày màng 0,25 μm ); Nhiệt độ cột: chương trình nâng nhiệt 50 oC/min từ 60 oC đến 150 oC, oC/min từ 150 oC đến 200 oC 12 oC/min từ 200 oC đến 275 oC đẳng nhiệt 275 oC min; Detector: detector nhiệt ion phương thức P N/P, nhiệt độ 280 oC; Bơm: cột, nhiệt độ môi trường; A.3.3 Điều kiện vận hành Cột: mao quản silica nung chảy DB-5 (dài 30 m, đường kính 0,53mm, độ dày màng 1,5 μm ); Nhiệt độ cột: chương trình nâng nhiệt oC/min từ 150 oC đến 250 oC; Detector: detector quang phổ lửa, lọc P, nhiệt độ 250 oC; Bơm: nhiệt độ 250 oC; THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Guidelines on Good Laboratory Practice in Pesticide Residue Residue Analysis; Codex Alimentarius Commission In: Codex Alimentarius Volume Two Pesticide residues in food – Rome; Food and Agriculture Organization of the United Nations (FAO); World Health Organization (WHO) 1993 Part 4.3, pp 417 – 455 [2] Bátora, V Vitorovic, S Lj., Thier, H-P, and Klisenko, MA: Pure Appl) Chem., 53, 1039-1049 (1981) [3] Cochrane, W.P.: Chemical derivatisation techniques in pesticide analysis, advances and applications; ACS Symposium Series 136, American Chemical Society, Washington, D.C., S.231 -249, 1980 [4] Pesticide Analytical Manual, Food and Drug Admiiustration, Washington D.C USA, Vol 1, Chapter 6, Section 652 [5] Hulzinger, O., and Safe E: Mass Spectrometry of Pesticides and Pollutants, CRC Press, 1973 [6] Sphon, JA, and Brumley, W.C.: Biochemical Application of Mass Spectrometry, Editors: Waller, CR, Dormer, O.C.; John Wiley & Sons, New York, 1980 [7] Specht, W: Clean-up of large quantities of fats for analysis of residues of organochlorine and organophosphorus compounds In: Deutsche Forschungsgemeinschaft, Manual of Pesticide Residue Analysis, VCH Verlagsgesellschaft Weinheim 1987, Vol 1, pp 71-74, Clean-up Method  ... dung dịch chuẩn vào sắc ký khí Thực bơm phần tinh mẫu chiết sau bơm dung dịch chuẩn Đo diện tích chiều cao pic Các kết thu từ hai lần bơm dung dịch chuẩn không khác % Việc sử dụng chất chuẩn nội... chất béo TCVN 8170-3:2009 (EN 1528-3:1996) Thực phẩm chứa chất béo – Xác định thuốc bảo vệ thực vật polyclobiphenyl (PCB) – Phần 3: Phương pháp làm Yêu cầu chung Các phương pháp mô tả tiêu chuẩn. .. chuẩn nội tốt cho mục đích [xem Điều TCVN 8170-3:2009 (EN 1528-3:1996) Cần đảm bảo chất chuẩn mẫu hòa tan loại dung mơi, khơng có bay khác dẫn đến khác thời gian lưu diện tích chiều cao pic Ví