BetamethasoN Betamethsonium C22H29FO5 P.t.l: 392.5 Betamethason 9-fluoro-11β,17,21-trihydroxy-16β-methylpregna-1,4-dien-3,20-dion, phải chứa từ 97,0 đến 103,0% C22H29FO5, tính theo chế phẩm khan Tính chất Bột kết tinh trắng hay gần trắng Thực tế không tan nước, tan ethanol 96%, tan methylen clorid Định tính Có thể chọn nhóm định tính sau: Nhóm I: B, C Nhóm II: A, C, D, E A Hoà tan 10,0 mg chế phẩm ethanol (TT) pha loãng thành 100,0 ml với dung môi Lấy 2,0 ml dung dịch cho vào ống thuỷ tinh tròn có nút mài, thêm 10,0 ml dung dịch phenylhydrazin acid sulfuric (TT), trộn đun cách thuỷ 60 oC 20 phút Làm nguội Độ hấp thụ (Phụ lục 4.1) dung dịch thu đo bước sóng 419 nm không lớn 0,10 B Phổ hồng ngoại (Phụ lục 4.2) chế phẩm phải phù hợp với phổ hồng ngoại betamethason chuẩn (ĐC) Nếu phổ hồng ngoại mẫu thử mẫu chuẩn trạng thái rắn khác nhau, hoà tan riêng biệt chế phẩm betamethason chuẩn (ĐC) lượng tối thiểu methylen clorid (TT), bốc đến khô nồi cách thuỷ Ghi phổ cắn thu C Phương pháp sắc ký lớp mỏng (Phụ lục 5.4) Bản mỏng: Silica gel GF254 (TT) Dung môi khai triển: Butanol bão hoà với nước - toluen - ether (5 : 10 : 85) Dung dịch thử: Hoà tan 10 mg chế phẩm hỗn hợp methanol - methylen clorid (1 : 9) pha loãng thành 10 ml với hỗn hợp dung môi Dung dịch đối chiếu (1): Hoà tan 20 mg betamethason chuẩn (ĐC) hỗn hợp methanol - methylen clorid (1 : 9) pha loãng thành 20 ml với hỗn hợp dung môi Dung dịch đối chiếu (2): Hoà tan 10 mg dexamethason chuẩn (ĐC) dung dịch đối chiếu (1) pha loãng thành 10 ml với dung môi Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên mỏng µl dung dịch Triển khai sắc ký đến dung môi 15 cm Để mỏng khô không khí quan sát ánh sáng tử ngoại bước sóng 254 nm Vết sắc ký đồ dung dịch thử phải tương tự vị trí, kích thước với vết sắc ký đồ dung dịch đối chiếu (1) Phun lên mỏng dung dịch acid sulfuric ethanol (TT) Sấy mỏng 120 oC 10 phút tới vết xuất Để nguội Quan sát ánh sáng ban ngày ánh sáng tử ngoại bước sóng 365 nm Vết thu sắc ký đồ dung dịch thử phải giống vị trí, màu sắc ánh sáng ban ngày, huỳnh quang đèn tử ngoại bước sóng 365 nm kích thước với vết sắc ký đồ dung dịch đối chiếu (1) Phép thử có giá trị sắc ký đồ dung dịch đối chiếu (2) cho vết, nhiên chưa tách hoàn toàn D Trộn khoảng mg chế phẩm với 45 mg magnesi oxyd nặng (TT) nung chén nung đến cắn trắng hoàn toàn (thường phút) Để nguội, thêm ml nước, 0,05 ml dung dịch phenolphtalein (TT1 ) khoảng ml acid hydrocloric loãng (TT) để làm cho dung dịch màu Lọc Thêm 1,0 ml dịch lọc vào hỗn hợp pha gồm 0,1 ml dung dịch alizarin S (TT) 0,1 ml dung dịch zirconyl nitrat (TT) Trộn đều, để yên phút so sánh màu dung dịch thu với màu mẫu trắng chuẩn bị điều kiện Dung dịch thử có màu vàng dung dịch mẫ u trắng có màu đỏ E Thêm khoảng mg chế phẩm vào ml acid sulfuric (TT) lắc cho tan Trong vòng phút, màu nâu đỏ xuất Thêm vào dung dịch 10 ml nước trộn Màu biến dung dịch Góc quay cực riêng Hoà tan 0,125 g chế phẩm methanol (TT) pha loãng thành 25,0 ml với dung môi Góc quay cực riêng phải từ +118 o đến +126o tính theo chế phẩm khan (Phụ lục 6.4) Tạp chất liên quan Phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3) Dung dịch thử: Hoà tan 25,0 mg chế phẩm hỗn hợp đồng thể tích acetonitril (TT) methanol (TT) pha loãng thành 10,0 ml với dung môi Dung dịch đối chiếu (1): Hoà tan mg betamethason chuẩn (ĐC) mg methylprednisolon chuẩn (ĐC) pha động A pha loãng thành 100,0 ml với pha động Dung dịch đối chiếu (2): Pha loãng 1,0 ml dung dịch thử thành 100,0 ml với pha động A Điều kiện sắc ký: Cột thép không gỉ (25 cm x 4,6 mm) nhồi pha tĩnh C (5 µm) Nhiệt độ cột 45 oC Pha động A: Trong bình định mức dung tích 1000 ml trộn 250 ml acetonitril (TT) với 700 ml nước để cân bằng, điều chỉnh thể tích đến 1000 ml nước lại trộn Pha động B: Acetonitril (TT) Với chương trình rửa giải gradien sau: Thời gian (phút) 15 40 Pha động A (% tt/tt) 100 100 Pha động B (% tt/tt) 0 100 41 46=0 100 100 0 Ghi Đẳng dòng Bắt đầu gradien Kết thúc chương trình sắc ký, quay 100% pha động A Bắt đầu cân cột với pha động A Kết thúc cân cột, bắt đầu chương trình sắc ký với mẫu Tốc độ dòng: 2,5 ml/phút Detector quang phổ tử ngoại bước sóng 254 nm Thể tích tiêm: 20 µl Cách tiến hành: Cân cột với pha động B thời gian 30 phút sau với pha động A phút Đối với lần sắc ký tiếp theo, dùng điều kiện mô tả từ 40 phút đến 46 phút Điều chỉnh độ nhạy hệ thống để chiều cao pic sắc ký đồ thu với dung dịch đối chiếu (2) 50% thang đo Tiêm dung dịch đối chiếu (1) Các sắc ký đồ ghi điều kiện mô tả trên, thời gian lưu methylprednisolon khoảng 11,5 phút betamethason khoảng 12,5 phút Phép thử có giá trị độ phân giải pic tương ứng với methylprednisolon betamethason không nhỏ 1,5; cần điều chỉnh nồng độ acetonitril pha động A Tiêm tách biệt mẫu trắng hỗn hợp đồng thể tích acetonitril (TT) methanol (TT), dung dịch thử dung dịch đối chiếu (2) Trong sắc ký đồ thu dung dịch thử: Diện tích pic phụ nào, pic không lớn diện tích pic sắc ký đồ thu dung dịch đối chiếu (2) (1,0%) phép có pic có diện tích lớn nửa diện tích pic sắc ký đồ dung dịch đối chiếu (2) (0,5%) Tổng diện tích pic tạp chất, pic không lớn hai lần diện tích pic sắc ký đồ thu từ dung dịch đối chiếu (2) (2,0%) Bỏ qua pic tương ứng với mẫu trắng pic có diện tích nhỏ 0,05 lần diện tích pic sắc ký đồ thu từ dung dịch đối chiếu (2) Mất khối lượng làm khô Không 0,5 % (Phụ lục 9.6) Dùng 0,500 g chế phẩm, sấy 100 oC đến 105 oC Định lượng Hoà tan 0,100 g chế phẩm ethanol 96% (TT) pha loãng thành 100,0 ml với dung môi Pha loãng 2,0 ml dung dịch thành 100,0 ml với ethanol 96% (TT) Đo độ hấp thụ (Phụ lục 4.1) dung dịch bước sóng cực đại 238,5 nm Tính hàm lượng C 22H29FO5 lấy giá trị A (1%, cm) bước sóng 238,5 nm 395 Bảo quản Trong lọ nút kín, tránh ánh sáng Loại thuốc Corticosteroid Chế phẩm Viên nén betamethason