Nghiên cứu các đặc tính sinh học và tiềm năng ứng dụng của chủng vi khuẩn bacillus amyloliquefaciens subsp plantarum SP 1901 phân lập tại rừng quốc gia hoàng liên

65 501 0
Nghiên cứu các đặc tính sinh học và tiềm năng ứng dụng của chủng vi khuẩn bacillus amyloliquefaciens subsp  plantarum SP 1901 phân lập tại rừng quốc gia hoàng liên

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Phan Lạc Dũng NGHIÊN CỨU CÁC ĐẶC TÍNH SINH HỌC VÀ TIỀM NĂNG ỨNG DỤNG CỦA CHỦNG VI KHUẨN BACILLUS AMYLOLIQUEFACIENS SUBSP PLANTARUM SP 1901 PHÂN LẬP TẠI RỪNG QUỐC GIA HOÀNG LIÊN LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội - Năm 2013 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Phan Lạc Dũng NGHIÊN CỨU CÁC ĐẶC TÍNH SINH HỌC VÀ TIỀM NĂNG ỨNG DỤNG CỦA CHỦNG VI KHUẨN BACILLUS AMYLOLIQUEFACIENS SUBSP PLANTARUM SP 1901 PHÂN LẬP TẠI RỪNG QUỐC GIA HOÀNG LIÊN Chuyên ngành: Vi sinh vật học Mã số: 60 42 40 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC TS TRỊNH THÀNH TRUNG Hà Nội - Năm 2013 LỜI CẢM ƠN Trước tiên, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Trịnh Thành Trung, người dẫn dắt, bảo tạo điều kiện giúp đỡ hoàn thành luận văn cao học Tôi xin chân thành cảm ơn cán bộ, anh chị làm việc Viện Vi sinh vật Công nghệ Sinh học - Đại học Quốc gia Hà Nội giúp đỡ trình hoàn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo Bộ môn Vi sinh vật học nói riêng Khoa Sinh học nói chung dạy dỗ trình học tập Cuối cùng, xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè động viên, giúp đỡ, hỗ trợ để hoàn thành luận văn Hà Nội, tháng năm 2013 Học viên Phan Lạc Dũng MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Khả sinh trưởng chủng SP 1901 nhiệt độ khác 33 Bảng 3.2 Khả đồng hoá loại đường………………………………… 34 Bảng 3.3 Khả lên men loại đường………………………………… 35 Bảng 3.4 Khả sinh enzyme ngoại bào theo phương pháp sử dụng kit API ZYM………………………………….…………………………………… 37 Bảng 3.5 Tỷ lệ hoạt độ xylanase (U/ml) nồng độ protein (mg/ml) chủng SP 1901………………………………….……………………………… 40 Bảng 3.6 Hoạt độ xylanase sau bước tinh sạch……………………… 46 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cấu trúc hóa học xylan vị trí công hệ thống enzyme xylanolytic………………………………….………………………… Hình 1.2 Cấu trúc hóa học amylose amylopectin…………………… 11 Hình 1.3 Phản ứng thủy phân liên kết peptide chuỗi polypeptide……… 13 Hình 2.1 Đồ thị đường chuẩn theo thang BSA……………………………… 21 Hình 2.2 Đồ thị đường chuẩn theo thang xylose…………………………… 22 Hình 2.3 Đồ thị đường chuẩn theo thang glucose…………………………… 23 Hình 2.4 Đồ thị đường chuẩn theo thang L-tyrosine………………………… 24 Hình 3.1 Cây phát sinh chủng loại 37 chủng vi khuẩn Bacillus phân lập rừng Quốc gia Hoàng Liên loài thuộc nhóm vi khuẩn B subtilis dựa phân tích trình tự 16S rDNA………………………………….………… 28 Hình 3.2 Cây phát sinh chủng loại loài vi khuẩn thuộc nhóm B subtilis………………………………….…………………………………… 30 Hình 3.3 Hình thái khuẩn lạc chủng SP 1901 (a), hình thái tế bào nhuộm gram (b) soi (c) ………………………………….…………………… 31 Hình 3.4 pH sinh trưởng tối ưu (a) Khả chịu muối NaCl (b) Khả chịu dịch dày (c) Khả chịu muối mật (d) …………………………… 31 Hình 3.5 Khả sinh chất kích thích sinh trưởng IAA chủng SP 1901 sau 24, 48 72 giờ………………………………….……………………… 32 Hình 3.6 Khả sinh IAA làm cho dung dịch chuyển từ màu vàng sang đỏ (a) Ảnh hưởng chủng SP 1901 lên khả sinh trưởng ngô sau 10 ngày trồng (b) ………………………………….………………………… 32 Hình 3.7 Vòng phân giải chất enzyme ngoại bào Amylase (a) Cellulase (b) Phytase (c) Protease (d) Xylanase (e) ……………………… 36 Hình 3.8 Phản ứng thử nghiệm khả sinh enzyme thử API ZYM………………………………….……………………………………… 37 Hình 3.9 Khả sinh kháng sinh chủng SP 1901 theo phương pháp khuếch tán thạch Đĩa thạch cấy sẵn vi khuẩn E coli (a) Vi khuẩn Shigella sp (b) Vi khuẩn S aureus (c) ……………………………………… 38 Hình 3.10 Khả sinh trưởng môi trường khác (a, b) hoạt độ xylanase ngoại bào (c, d) chủng SP 1901 nuôi cấy 10 loại môi trường khác nhau………………………………….……………… 39 Hình 3.11 Hoạt độ xylanase (U/ml) nồng độ protein (mg/ml) nuôi cấy môi trường có bổ sung CMC glucose môi trường NA dịch thể khác nhau………………………………….………………………… 39 Hình 3.12 Hoạt tính amylase protease chủng SP 1901 môi trường có bổ sung CMC glucose môi trường NA dịch thể…………………… 40 Hình 3.13 Hoạt độ xylanase nồng độ protein phân đoạn sắc ký 41 trao đổi ion gel CM Sepharose………………………………….…………… Hình 3.14 Hoạt độ amylase nồng độ protein phân đoạn sắc ký trao đổi ion gel DEAE Sepharose………………………………….………… 42 Hình 3.15 Hoạt độ protease nồng độ protein phân đoạn sắc ký trao đổi ion gel CM Sepharose………………………………….…………… 42 Hình 3.16 Hoạt độ xylanase phân đoạn sắc ký lọc gel………… 43 Hình 3.17 Hoạt độ amylase phân đoạn sắc ký lọc gel………… 44 Hình 3.18 Hoạt độ protease phân đoạn sắc ký lọc gel………… 44 Hình 3.19 Điện di SDS-PAGE mẫu xyl 29 xyl 36…………………… 45 Hình 3.20 Nhiệt độ hoạt động tối ưu xyl 29, xyl 36, amylase protease từ chủng SP 1901…………………………………………………………… 46 Hình 3.21 Khả bền nhiệt xyl 29, xyl 36, amylase protease từ chủng SP 1901……………………………………………………………… 47 Hình 3.22 pH hoạt động tối ưu xyl 29, xyl 36, amylase protease từ chủng SP 1901……………………………………………………………… 48 Hình 3.23 Khả bền axít xyl 29, xyl 36, amylase protease từ chủng SP 1901……………………………………………………………… 49 Hình 3.24 Khả bền ion kim loại hóa chất xyl 29, xyl 36, amylase protease từ chủng SP 1901………………………………………………… 50 Hình 3.25 Bản chạy sắc ký lớp mỏng để phân tích sản phẩm thủy phân từ chất xylan xylanase chủng SP 1901…………………………………… 52 CÁC KÝ HIỆU VIẾT TẮT BSA Bovine serum albumin CMC Carboxymethyl cellulose DNA Deoxyribonucleic axít DNS Dinitrosalicylic IAA Indole-3-acetic axít PAGE Polyacrylamide gel electrophoresis PCR Polymerase chain reaction RNA Ribonucleic axít SDS Sodium dodecyl sulfate ĐẶT VẤN ĐỀ Ngày nay, việc ứng dụng vi sinh vật vào đời sống sản xuất trở nên phổ biến Con người khai thác triệt để nguồn tài nguyên vi sinh vật nhiều lĩnh vực khác Trong y học, nhờ có vi sinh vật mà người tổng hợp thành công nhiều loại chế phẩm vacxin, kháng sinh, hormone, vitamin giúp phòng ngừa điều trị nhiều loại bệnh cho người Trong nông nghiệp, nhiều chế phẩm sinh học có nguồn gốc từ vi sinh vật sản xuất để diệt trừ sâu bệnh hại làm phân bón vi sinh Trong công nghiệp thực phẩm, người ứng dụng vi sinh vật để sản xuất loại protein, enzyme, chế phẩm probiotic loại thực phẩm lên men truyền thống Ngoài ra, vi sinh vật ứng dụng vào xử lý rác thải hữu nước thải sản xuất công nghiệp Với khả chuyển hóa mạnh mẽ sinh sản nhanh chóng, vi sinh vật đóng vai trò to lớn hệ sinh thái tự nhiên hoạt động cải thiện chất lượng sống người Bacillus vi sinh vật phát mô tả giai đoạn đầu tiến trình phát triển ngành vi sinh vật học cuối kỷ 19 Đây chi lớn với gần 200 loài vi khuẩn hiếu khí, hình que có khả sinh nội bào tử Chúng phân bố rộng rãi hệ sinh thái tự nhiên, từ cạn đến nước, từ nước đến nước mặn từ ven bờ đến đáy Đại Dương Ngoài loài vi khuẩn gây bệnh cho người B anthracis B cereus, nhiều loài vi khuẩn thuộc chi Bacillus đặc biệt nhóm B subtilis có tính ứng dụng cao nhiều lĩnh vực y dược học, nông nghiệp, công nghiệp thực phẩm xử lý môi trường Do đó, loài thuộc chi Bacillus ngày trở thành vi sinh vật quan trọng hàng đầu mặt ứng dụng Nhằm góp phần tìm hiểu thêm kiến thức chi Bacillus nói chung ứng dụng loài thuộc nhóm B subtilis nói riêng, tiến hành đề tài: “Nghiên cứu đặc tính sinh học tiềm ứng dụng chủng vi khuẩn Bacillus amyloliquefaciens subsp plantarum SP 1901 phân lập rừng Quốc gia Hoàng Liên” với mục tiêu sau: (i) (ii) (iii) Tuyển chọn chủng vi khuẩn thuộc nhóm B subtilis phân lập rừng Quốc gia Hoàng Liên Sử dụng kỹ thuật phân tích trình tự đa gen để phân loại xác chủng vi khuẩn nghiên cứu đến cấp độ loài loài Tìm hiểu đặc tính sinh học quý chủng vi khuẩn lựa chọn (iv) Tách chiết, tinh đánh giá sơ đặc tính enzyme ngoại chủng vi khuẩn nghiên cứu CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 VI KHUẨN BACILLUS AMYLOLIQUEFACIENS 1.1.1 Tổng quan Bacillus amyloliquefaciens Bacillus amyloliquefaciens loài vi khuẩn thuộc nhóm Bacillus subtilis [45] B subtilis Christion Erenberg phát lần vào năm 1835, tên loài vi khuẩn lúc “Vibrio subtilis” Năm 1872, nhà sinh học người Đức Ferdinand Cohn đặt tên cho loài vi khuẩn Bacillus subtilis Trong chiến thứ hai, tổ chức y học Nazi (Đức) dùng B subtilis để phòng bệnh lị cho binh lính chiến đấu Bắc Phi Từ đến nay, B subtilis nghiên cứu sử dụng rộng rãi Thế giới Thuật ngữ “Subtilis therapy” (điều trị subtilis) đời từ B subtilis ngày sử dụng rộng rãi để phòng ngừa điều trị loại bệnh rối loạn đường tiêu hóa, chứng viêm ruột, viêm đại tràng tiêu chảy Hiện nay, B subtilis chứng minh có tiềm to lớn nhiều lĩnh chăn nuôi, công nghiệp, xử lý môi trường [8] Vi khuẩn B subtilis có mặt hầu hết loại môi trường tự nhiên Phần lớn cư trú đất, rơm rạ cỏ khô nên gọi “trực khuẩn cỏ khô” Ngoài ra, chúng có mặt nguyên liệu sản xuất bột mì (trong bột mì B subtilis chiếm 75-79% vi khuẩn tạo bào tử), bột gạo thực phẩm mắm, tương chao [12] B subtilis có vai trò to lớn việc giữ ổn định hệ vi sinh vật đường ruột chế cạnh tranh sinh tồn khả gây ức chế vi khuẩn gây bệnh khác tác dụng sản phẩm ngoại bào Công trình nghiên cứu Work cộng năm 1959 cho thấy B subtilis có hệ thống enzyme tương đối hoàn chỉnh, có khả thủy phân carbohydrate protein Ngoài ra, B subtilis có khả tổng hợp số chất kháng sinh bacitracin, bacilysin, bacillomicin, bacillopectin, mycobacillin, subtilin prolimicin Những chất có tác dụng ức chế sinh trưởng tiêu diệt số vi sinh vật khác Chúng tác dụng lên vi khuẩn gram âm, gram dương nấm gây bệnh [9] Nhóm B subtilis gồm loài vi khuẩn B amyloliquefaciens, B atrophaeus, B axarquiensis, B malacitensis, B mojavensis, B sonorensis, B tequilensis, B vallismortis B velezensis Kết phân tích trình tự đoạn gen 16S rRNA cho thấy mức độ tương đồng chúng cao (> 99%) Bên cạnh đó, phương pháp phân loại truyền thống dựa hình dạng khuẩn lạc, hình thái tế bào bào tử đặc điểm sinh hóa khả phân tách loài 10 3.4.4 Khả bền axít Cả loại xylanase bền axít Sau 60 phút bị xử lý hoạt độ xyl 29 giảm 64-66%, xyl 36 giảm 65-72% Sau 120 phút hoạt độ loại xyl bị giảm đáng kể 36-48% Amylase chủng SP 1901 bền với axít, bị xử lý với đệm citratephosphate pH sau 60 phút, hoạt độ chúng 52%, sau 120 phút hoạt độ 37% Protease nhạy cảm với axít, bị xử lý với loại dung dịch citrate phosphate HCl/NaOH 1M pH 20 phút hoạt độ chúng 56% Sau 120 phút chúng bị hoạt tính hoàn toàn Xyl 36 Xyl 29 Hình 3.23 Khả bền axít xyl 29, xyl 36, amylase protease từProtease chủng SP Amylase 1901 3.4.5 Khả bền ion kim loại hóa chất Xyl 29 Xyl 36 Amylase Protease Hình 3.24 Khả bền ion kim loại hóa chất xyl 29, xyl 36, amylase protease từ chủng SP 1901 Trong số ion kim loại nghiên cứu, ion Na +, K+, Ca2+, Fe2+, Zn2+ ßmercapto tăng cường hoạt độ loại enzyme xyl 29 xyl 36, Ca2+ tăng cường mạnh (hoạt độ xyl 29 xyl 36 tăng 151,91% 154,5% nồng độ ion Ca 2+ hỗn hợp phản ứng 10 mM) Ion Cu 2+ ức chế mạnh hoạt động xylanase (hoạt độ xyl 29 xyl 36 giảm lần lượng 35,66% 29,55% nồng độ Cu2+ hỗn hợp phản ứng đạt 10 mM) 51 Ion Ca2+ tăng cường hoạt động amylase mạnh nồng độ mM giảm dần nồng độ cao Ngoài ion Na +, K+ Mg2+ không làm ảnh hưởng nhiều đến hoạt động enzyme Các ion Zn 2+ Cu2+ làm giảm mạnh hoạt động enzyme, nồng độ ion hỗn hợp phản ứng đạt 10 mM hoạt tính enzyme amylase không Các ion Na+, K+, Mg2+, Ca2+, Fe2+ ß-mercapto tăng cường hoạt động enzyme protease, ß-mercapto tăng cường mạnh (hoạt độ protease tăng lên 210% nồng độ ß-mercapto hỗn hợp phản ứng đạt 10 mM) Ion Fe 3+ ức chế mạnh hoạt động protease (hoạt độ protease giảm 9% nồng độ Fe3+ hỗn hợp phản ứng 10 mM) 3.4.6 Sắc ký lớp mỏng Dựa vào kết hình 3.25., sau sản phẩm thủy phân chủ yếu xylotetraose, sau 24 sản phẩm thủy phân chủ yếu xylobiose xylotetraose, sau 48 sản phẩm thủy phân chủ yếu xylobiose xylotetraose, có hàm lượng nhỏ xylose Điều chứng tỏ enzyme xylanase chủng SP 1901 thủy phân chất thành sản phẩm chủ yếu xylooligosaccharides Bên cạnh đó, xuất xylose sản phẩm thủy phân chứng tỏ hệ enzyme xylanolytic chủng SP 1901 tồn dạng exoglycosidase endoglycosidase [...]... NRS-213 B amyloliquefaciens subsp plantarum NRRL B-23189 B amyloliquefaciens subsp plantarum NRRL B-23190 B amyloliquefaciens subsp plantarum NRRL BD-621 B amyloliquefaciens subsp plantarum FZB42 B amyloliquefaciens subsp plantarum Mito-5-13 B amyloliquefaciens subsp plantarum Mito-7-4 B amyloliquefaciens subsp plantarum Tikusei-14-1 SP 1901 B amyloliquefaciens subsp plantarum Hitachioomiya-8-2 B amyloliquefaciens. .. amyloliquefaciens subsp plantarum NRRL BD-557 B amyloliquefaciens subsp plantarum NRRL BD-545 B amyloliquefaciens subsp plantarum NRRL B-41580 B amyloliquefaciens subsp plantarum strain NRRL B-4257 B amyloliquefaciens subsp plantarum NRRL BD-569 B amyloliquefaciens subsp plantarum NRRL BD-568 B amyloliquefaciens subsp amyloliquefaciens NRRL BD-601 B amyloliquefaciens subsp amyloliquefaciens DSM 7 B amyloliquefaciens. .. cho thấy, duy nhất chủng SP 1901 có quan hệ gần gũi với các loài trong nhóm B subtilis (hình 3.1.) Hình 3.1 Cây phát sinh chủng loại của 37 chủng vi khuẩn Bacillus phân lập tại rừng Quốc gia Hoàng Liên và 9 loài thuộc nhóm vi khuẩn B subtilis dựa trên phân tích trình tự 16S rDNA Vòng tròn chỉ vị trí phân loại của chủng SP 1901 3.1.3 Cây phân loại dựa trên trình tự đa gen Phân loại các loài trong nhóm... này đã được phân tách thành các loài phụ như B subtilis được phân thành B subtilis subsp subtilis, B subtilis subsp spizizenii và B subtilis subsp inaquosorum; B amyloliquefaciens được phân thành B amyloliquefaciens subsp amyloliquefaciens và B amyloliquefaciens subsp plantarum [42] Phân loại các loài trong nhóm B subtilis nói chung và B amyloliquefaciens nói riêng đòi hỏi phải có sự tổ hợp của nhiều... phát sinh được xây dựng theo Kimura (1980) sử dụng phương pháp của Saitou và Nei (1987) 2.3.3 Đặc điểm sinh học của chủng vi khuẩn nghiên cứu 2.3.3.1 Nhiệt độ sinh trưởng thích hợp Chủng vi khuẩn được cấy zíc zắc vào các ống nghiệm có chứa môi trường NA thạch nghiêng, sau đó đặt các ống nghiệm này vào các máy ổn nhiệt ở dải nhiệt độ từ 15-70oC Quan sát khả năng mọc sau 24 và 48 giờ 2.3.3.2 pH sinh. .. xylanolytic Tất cả các enzyme trong hệ thống này tác động tương hỗ với nhau để phân giải xylan thành các phân tử đường [34] 1.3.1.2 Nguồn sản sinh xylanase Xylanase được sinh tổng hợp bởi nấm, vi khuẩn, xạ khuẩn và động vật nguyên sinh Trong các loài vi sinh vật có khả năng sinh tổng hợp xylanase, nấm, vi khuẩn và xạ khuẩn là các nhóm quan trọng nhất [57] Các loại xylanase được sinh ra bởi vi khuẩn và nấm sợi... nhóm loài B amyloliquefaciens subsp plantarum và phân tách hoàn toàn với nhóm loài B amyloliquefaciens subsp amyloliquefaciens cũng như những loài trong nhóm B subtilis (hình 3.2.) Với kết quả thu được chúng tôi kết luận chủng SP 1901 là loài B amyloliquefaciens subsp plantarum B subtilis subsp subtilis NRRL NRS-744 B subtilis subsp inaquosorum NRRL B-23052 B subtilis subsp spizizenii NRRL B-23049 B tequilensis... enzyme từ vi sinh vật đang dần thay thế enzyme từ động vật và thực vật bởi: tốc độ sinh sản của vi sinh vật nhanh, enzyme được tách chiết từ vi sinh vật có hoạt tính cao và vi sinh vật là giới sinh vật phù hợp cho sản xuất theo quy mô công nghiệp Các đối tượng vi sinh vật thường được dùng để tách chiết protease là nấm mốc, vi khuẩn và xạ khuẩn 1.3.3.2 Phân loại protease Protease được xếp vào nhóm enzyme... amyloliquefaciens FZB42 Vì vậy, khi phân tích cây phát sinh chủng loại trên nhóm vi khuẩn B subtilis phân lập từ thực phẩm lên men tại Nhật Bản, Kobo và cộng sự (2011) đã ứng dụng phân tích trình tự 6 gen và đã phân tách rõ ràng các chủng dưới loài B amyloliquefaciens Tra cứu trình tự tương đồng đoạn 16S rDNA của chủng SP 1901 trên cơ sở dữ liệu ngân hàng gen NCBI không đưa ra kết quả phân loại chính xác đến loài... trong các mẫu đất tự nhiên Đây là loài vi khuẩn hiếu khí, hình que, Gram dương, sinh nội bào tử, có khả năng di động và kích thước tế bào 3,0-4,0 × 0,7-1,5 µm Đặc biệt, có một số chủng vi khuẩn B amyloliquefaciens có khả năng sống nội cộng sinh rễ cây thực vật [23] 1.2 ỨNG DỤNG CỦA BACILLUS AMYLOLIQUEFACIENS 1.2.1 Sản xuất enzyme công nghiệp Loài vi khuẩn này được biết đến từ rất sớm nhờ khả năng sản sinh

Ngày đăng: 19/06/2016, 07:23

Từ khóa liên quan

Mục lục

  • ĐẶT VẤN ĐỀ

  • CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU

    • 1.1. VI KHUẨN BACILLUS AMYLOLIQUEFACIENS

      • 1.1.1. Tổng quan về Bacillus amyloliquefaciens

      • 1.1.2. Lịch sử phát hiện

      • 1.1.3. Phân loại

      • 1.1.4. Đặc điểm sinh học và phân bố trong tự nhiên

      • 1.2. ỨNG DỤNG CỦA BACILLUS AMYLOLIQUEFACIENS

        • 1.2.1. Sản xuất enzyme công nghiệp

        • 1.2.2. Sản xuất chất kháng sinh

        • 1.2.3. Sản xuất phân bón vi sinh

        • 1.2.4. Sản xuất chế phẩm probiotics

        • 1.3. MỘT SỐ ENZYME CÔNG NGHIỆP QUAN TRỌNG

          • 1.3.1. Xylanase

          • 1.3.2. α-amylase

          • 1.3.3. Protease

          • CHƯƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

            • 2.1. THIẾT BỊ VÀ MÁY MÓC ĐÃ SỬ DỤNG

            • 2.2. NGUYÊN LIỆU

              • 2.2.1. Chủng vi sinh vật

              • 2.2.2. Môi trường

              • 2.3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

                • 2.3.1. Nuôi cấy giống khởi động

                • 2.3.2. Phân tích trình tự đa gen

                • 2.3.3. Đặc điểm sinh học của chủng vi khuẩn nghiên cứu

                • 2.3.4. Lựa chọn môi trường và thời gian nuôi cấy thích hợp cho khả năng sinh enzyme ngoại bào cao

                • 2.3.5. Phương pháp xác định protein

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan