Xác Định Vi Khuẩn Pasteurella Multocida Gây Bệnh Tụ Huyết Trùng Ở Trâu, Bò Tại Một Số Huyện Có Dịch Trên Địa Bàn Tỉnh Cao Bằng Và Bước Đầu Thử Nghiệm Auto-Vaccine

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN THỊ KIM DUNG XÁC ĐỊNH VI KHUẨN PASTEURELLA MULTOCIDA GÂY BỆNH TỤ HUYẾT TRÙNG Ở TRÂU, BÒ TẠI MỘT SỐ HUYỆN CÓ DỊCH TRÊN ĐỊA BÀN TỈNH CAO BẰNG VÀ BƯỚC ĐẦU THỬ NGHIỆM AUTO-VACCINE LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP Thái Nguyên, năm 2010 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN THỊ KIM DUNG XÁC ĐỊNH VI KHUẨN PASTEURELLA MULTOCIDA GÂY BỆNH TỤ HUYẾT TRÙNG Ở TRÂU, BÒ TẠI MỘT SỐ HUYỆN CÓ DỊCH TRÊN ĐỊA BÀN TỈNH CAO BẰNG VÀ BƯỚC ĐẦU THỬ NGHIỆM AUTO-VACCINE Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60.62.50 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS Đặng Xuân Bình Thái Nguyên, năm 2010 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu trực tiếp thực với giúp đỡ TS Đặng Xuân Bình Các số liệu, hình ảnh kết luận văn trung thực chưa công bố công trình khác Tôi xin đảm bảo thông tin, trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Tác giả luận văn Nguyễn Thị Kim Dung LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, nỗ lực thân, nhận giúp đỡ quý báu, bảo tận tình thầy cô giáo suốt trình thực đề tài Nhân dịp này, cho phép bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc thầy: T.S Đặng Xuân Bình người trực tiếp hướng dẫn trình nghiên cứu hoàn thành luận văn Tôi xin trân trọng cảm ơn Khoa Sau đại học - Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, tập thể cán nghiên cứu Bộ môn Công nghệ Vi sinh - Viện Khoa học Sự sống, tập thể lãnh đạo cán Chi cục Thú y tỉnh Cao Bằng gia đình, bạn bè đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi nhất, giúp đỡ trình hoàn thành luận văn Thái Nguyên, ngày tháng năm 2010 Nguyễn Thị Kim Dung MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa Lời cam đoan Lời cảm ơn Mục lục Danh mục ký hiệu, chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục hình MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình nghiên cứu bệnh tụ huyết trùng nước 1.1.1 Trên giới 1.1.2 Ở Việt Nam 1.2 Đặc điểm dịch tễ học bệnh tụ huyết trùng 1.3 Mầm bệnh 10 1.3.1 Đặc điểm hình thái tính chất bắt màu 11 1.3.2 Đặc tính nuôi cấy 12 1.3.3 Đặc tính sinh hoá vi khuẩn Pasteurella multocida 15 1.3.4 Cấu trúc kháng nguyên vi khuẩn Pasteurella multocida 16 1.3.5 Serotype vi khuẩn P multocida 18 1.3.6 Độc lực vi khuẩn P multocida 21 1.3.7 Sức đề kháng 22 1.4 Bệnh tụ huyết trùng vi khuẩn P multocida gây nên 23 1.4.1 Cơ chế sinh bệnh 23 1.4.2 Biểu đặc trưng trâu bò mắc bệnh tụ huyết trùng 23 1.5 Những hiểu biết vắc xin phòng bệnh 25 1.5.1 Một vài nét lịch sử phát triển vắc xin 25 1.5.2 Thành phần vắc xin 26 1.5.3 Công nghệ lên men vi khuẩn chế tạo vắc xin 30 1.5.4 Phân loại vắc xin 30 1.5.5 Vắc xin chỗ (autovaccine) 33 Chương 2: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 34 2.1 Đối tượng, thời gian địa điểm nghiên cứu 34 2.1.1 Đối tượng 34 2.1.2 Thời gian địa điểm 34 2.2 Nội dung nghiên cứu 34 2.2.1 Điều tra số đặc điểm dịch tễ bệnh tụ huyết trùng tỉnh Cao Bằng 34 2.2.2 Phân lập vi khuẩn P multocida từ dịch ngoáy mũi gia súc khoẻ 34 2.2.3 Chế tạo vắc xin chỗ phòng bệnh tụ huyết trùng 35 2.3 Vật liệu dùng cho nghiên cứu 35 2.3.1 Mẫu dùng phân lập vi khuẩn 35 2.3.2 Động vật thí nghiệm 35 2.3.3 Hóa chất dụng cụ nghiên cứu 35 2.3.3.1 Hoá chất dùng để nhuộm Gram 35 2.3.3.2 Hoá chất dùng để thử phản ứng sinh hoá 35 2.3.4 Môi trường nuôi cấy, phân lập vi khuẩn 36 2.3.5 Dụng cụ thí nghiệm 36 2.4 Phương pháp nghiên cứu 36 2.4.1 Phương pháp điều tra dịch tễ 36 2.4.2 Phương pháp nuôi cấy, phân lập xác định vi khuẩn P multocida 37 2.4.2.1 Nuôi cấy, phân lập 37 2.4.2.2 Phương pháp xác định đặc tính sinh vật, hóa học 38 2.4.3 Phương pháp thử độc lực chuột nhắt trắng 41 2.4.4 Phương pháp thử kháng sinh đồ 42 2.4.5 Chế tạo vắc xin chỗ theo tiêu chuẩn ngành 42 2.4.5.1 Phương pháp tính LD50 P multocida chuột 42 2.4.5.2 Phương pháp xác định số lượng vi khuẩn 43 2.4.5.3 Phương pháp chế tạo vắc xin 43 2.4.6 Phương pháp xử lý số liệu 45 Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 46 3.1 Kết khảo sát tình hình bệnh tụ huyết trùng gia súc Cao Bằng từ năm 2006 – 2009 46 3.1.1 Tình hình bệnh tụ huyết trùng tỉnh Cao Bằng từ năm 2006 – 2009 47 3.1.2 Tần suất xuất dịch bệnh tụ huyết trùng tỉnh Cao Bằng từ năm 2006 – 2009 48 3.1.3 Tỷ lệ trâu, bò ốm chết bệnh tụ huyết trùng mùa vụ 50 3.1.4 Triệu chứng đặc trưng trâu, bò mắc bệnh tụ huyết trùng 53 3.1.5 Kết phân lập Pasteurella multocida từ dịch ngoáy mũi gia súc khoẻ tỉnh Cao Bằng 54 3.1.6 Tỷ lệ mang trùng Pasteurella multocida trâu, bò khỏe ổ dịch theo lứa tuổi 56 3.1.7 Kết giám định số đặc tính sinh vật – hoá học chủng vi khuẩn Pasteurella multocida phân lập số huyện có dịch địa bàn tỉnh Cao Bằng 58 3.1.8 Xác định type giáp mô vi khuẩn P multocida phương pháp PCR (Polymerase chain reaction) 59 3.1.9 Kết xác định độc lực chủng P multocida phân lập 59 3.1.10 Kết kiểm tra tính mẫn cảm vi khuẩn Pasteurella multocida phân lập với số loại kháng sinh 61 3.2 Nghiên cứu chế tạo vắc xin tụ huyết trùng trâu, bò 62 3.2.1 Chọn chủng vi khuẩn P multocida sản xuất vắc xin 62 3.2.2 Xác định liều gây chết 50% chuột thí nghiệm (LD50) 64 3.2.3 Kết chế tạo kiểm nghiệm autovaccine 65 3.2.4 Kiểm tra an toàn hiệu lực autovaccine động vật thí nghiệm 66 3.2.5 Thử nghiệm lâm sàng autovaccine 68 3.2.5.1 Thử nghiệm lâm sàng autovaccine trâu, bò năm tuổi 68 3.2.5.2 Thử nghiệm lâm sàng autovaccine trâu, bò năm tuổi 68 3.2.6 Theo dõi biến động tiêu thân nhiệt tần số hô hấp trâu, bò sau tiêm autovaccine 71 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 74 Kết luận 74 Đề nghị 75 CÔNG TRÌNH CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN 76 TÀI LIỆU THAM KHẢO 77 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT BHI: Brain Heart Infusion Cs: Cộng DNA: Deoxyribonucleic Acid ĐC: Đối chứng FAO: Food and Agriculture Oganization LD50: Lethal Dose 50 - Liều gây chết 50% MR: Methyl Red PCR: Polymerase Chain Reaction P multocida: Pasteurella multocida TN: Thí nghiệm VP: Voges Proskauer YPC: Yeast extract Pepton - L - Cystin 370C/24h : Bồi dưỡng tủ ấm 370C 24 + Chú thích CB6: Mẫu nghiên cứu số Cao Bằng DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Tóm tắt danh pháp P multocida 11 Bảng 1.2 Hệ thống phân loại P multocida 20 Bảng 3.1 Kết khảo sát tình hình bệnh tụ huyết trùng gia súc Cao Bằng từ năm 2006 – 2009 47 Bảng 3.2 Tần suất xuất dịch bệnh tụ huyết trùng trâu, bò tỉnh Cao Bằng từ năm 2006 - 2009 49 Bảng 3.3 Tỷ lệ trâu, bò ốm chết bệnh tụ huyết trùng mùa vụ 51 Bảng 3.4 Kết theo dõi triệu chứng lâm sàng trâu, bò mắc bệnh tụ huyết trùng 53 Bảng 3.5 Kết phân lập Pasteurella multocida từ dịch ngoáy mũi gia súc khoẻ 55 Bảng 3.6 Tỷ lệ mang trùng Pasteurella multocida trâu, bò khỏe ổ dịch theo lứa tuổi 57 Bảng 3.7 Kết giám định số đặc tính sinh vật – hoá học vi khuẩn P multocida phân lập 58 Bảng 3.8 Kết thử độc lực chủng P multocida phân lập 60 Bảng 3.9 Kết thử tính mẫn cảm với kháng sinh chủng P multocida phân lập 62 Bảng 3.10 Kết chọn chủng vi khuẩn P multocida để chế tạo autovaccine 63 Bảng 3.11 Kết xác định LD50 64 Bảng 3.12 Kết chế tạo kiểm nghiệm autovaccine phòng thí nghiệm 65 Bảng 3.13 Kết kiểm tra an toàn hiệu lực lô autovaccine 67 Bảng 3.14 Kết thử nghiệm lâm sàng autovaccine trâu, bò năm tuổi 69 Bảng 3.15 Kết thử nghiệm lâm sàng autovaccine trâu, bò năm tuổi 70 Bảng 3.16 Kết theo dõi biến động tiêu thân nhiệt tần số hô hấp 72 73 Từ bảng 3.16, kết thu cho thấy: Sau tiêm autovaccine, có biến động thân nhiệt trâu, bò thí nghiệm; mức độ biến động nằm khoảng từ 0,1 đến 0,7oC tức nằm khoảng dao động thân nhiệt sinh lý bình thường; biến động tần số hô hấp trâu, bò thí nghiệm tương tự Sau 24 giờ, tiêu thân nhiệt tần số hô hấp trâu, bò thí nghiệm trở lại ổn định trước tiêm autovaccine Ngoài ra, trâu, bò thí nghiệm không xuất biểu lâm sàng khác so với đối chứng 74 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận Từ kết nghiên cứu phân tích trên, cho phép rút nhận xét: - Ở Cao Bằng, hàng năm có 0,33% trâu, bò bị mắc bệnh tụ huyết trùng 33,63% số trâu, bò chết so với số ốm - Trong năm điều tra tình hình dịch tễ bệnh tụ huyết trùng trâu, bò tỉnh Cao Bằng cho thấy dịch bệnh tụ huyết trùng xảy hầu hết năm, huyện, thị tỉnh Cao Bằng song mức độ bùng phát dịch bệnh theo năm khác nhau, trung bình năm có 10/13 huyện, thị có dịch tụ huyết trùng - Vụ Hè – Thu trâu, bò mắc bệnh chiếm tỷ lệ 0,28%, tỷ lệ chết 32,36%; Vụ Đông – Xuân tỷ lệ mắc bệnh 0,09%, tỷ lệ chết 28,73% - Trâu, bò khoẻ mạnh có mang vi khuẩn P multocida đường hô hấp, tỷ lệ phân lập vi khuẩn P multocida gia súc khoẻ mạnh từ 8,86% (năm 2008) đến 13,75% (năm 2009) - Tỷ lệ mang trùng P multocida trâu bò cao giai đoạn 4 năm tuổi (8,33% 0%) - Các chủng phân lập có đặc tính sinh vật hoá học đặc trưng, điển hình cho loài P multocida - Vi khuẩn P multocida gây bệnh tụ huyết trùng phân lập Cao Bằng thuộc type B, chiếm 81,82% - Vi khuẩn P multocida phân lập có độc lực mạnh, gây chết từ 83,33% đến 96,67% (tính chung 94,44%) chuột thí nghiệm vòng 48 sau công cường độc 75 - Vi khuẩn P multocida mẫn cảm mạnh với kháng sinh Ceftazidime (77,78%), Ampicillin (61,11%) Gentamicin (55,56%); kháng lại Neomycin, Trimethoprim (27,78%), Colistin Spectinomycin (22,22%) - Liều LD50 chủng đại diện CB6 sử dụng để sản xuất autovaccine 104,3/ml - Autovaccine chế tạo kiểm nghiệm theo tiêu chuẩn ngành, kết đạt yêu cầu tiêu vô trùng, an toàn có hiệu bảo hộ chuột thí nghiệm - Autovaccine không gây phản ứng cho trâu, bò thí nghiệm cục bộ, kết kiểm tra biến động tiêu thân nhiệt tần tố hô hấp cho thấy autovaccine đảm bảo an toàn theo quy định Đề nghị Để hạn chế tiến tới khống chế bệnh tụ huyết trùng cho đàn trâu, bò có đề nghị sau: - Áp dụng kết nghiên cứu đề tài tỉnh Cao Bằng để phòng điều trị bệnh tụ huyết trùng đạt hiệu cao, tăng thu nhập cho người chăn nuôi - Cần tiếp tục nghiên cứu bệnh tụ huyết trùng tỉnh miền núi phía Bắc tượng mang trùng gia súc khoẻ để có đủ sở xây dựng chương trình phòng chống bệnh thích hợp - Thường xuyên mở lớp tập huấn nâng cao trình độ chuyên môn cho đội ngũ cán chăn nuôi thú y thôn 76 CÔNG TRÌNH CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN Đặng Xuân Bình, Nguyễn Thị Kim Dung, Nguyễn Thị Hà, Lê Bá Hiệp (2010), “Khảo sát lưu hành vi khuẩn Pasteurella multocida gia súc số tỉnh miền núi phía Bắc Việt Nam”, Khoa học Kỹ thuật Thú y, 17(2), tr 53-57 Đặng Xuân Bình, Nguyễn Thị Kim Dung, Nguyễn Thị Hà, Phạm Thị Phương Lan (2010), “Nghiên cứu xác định vi khuẩn Pasteurella multocida gây bệnh tụ huyết trùng trâu, bò Hà Giang, Cao Bằng bước đầu kiểm nghiệm autovaccine”, Tạp chí Khoa học Công nghệ, Đại học Thái Nguyên, 70(8), tr 93-98 77 TÀI LIỆU THAM KHẢO I TÀI LIỆU THAM KHẢO TRONG NƯỚC Nguyễn Xuân Bình (1996), Nghiên cứu số đặc điểm dịch tễ bệnh tụ huyết trùng gia cầm biện pháp phòng trị thích hợp, Luận án Phó tiến sỹ nông nghiệp, Viện Khoa học Kỹ thuật Nông nghiệp Việt Nam Bùi Văn Dũng (2000), Nghiên cứu tình hình bệnh tụ huyết trùng vi khuẩn Pasteurella phân lập từ dịch ngoáy mũi trâu, bò khoẻ mạnh tỉnh Lai Châu, Luận văn thạc sỹ Nông nghiệp, Trường Đại học Nông nghiệp I, Hà Nội Phan Đình Đỗ Trịnh Văn Thịnh (1958), Bệnh truyền nhiễm gia súc, bệnh thường có Việt Nam, Nxb Nông thôn, Hà Nội Bùi Xuân Đồng (2000), “Công tác phòng chống bệnh tụ huyết trùng trâu, bò Hải Phòng”, Khoa học Kỹ thuật Thú y, 7(1), tr 91-94 Đỗ Văn Được (2003), Nghiên cứu số nguyên nhân, đặc điểm bệnh lý, triệu chứng bệnh viêm phổi trâu Lạng Sơn biện pháp phòng chống, Luận án Tiến sỹ Nông nghiệp, Trường Đại học Nông nghiệp I, Hà Nội Phùng Duy Hồng Hà (1990), “Nghiên cứu sản xuất vắc xin tụ huyết trùng gia cầm dạng nhũ dầu”, Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Nông nghiệp, 4, tr 168-172 Trần Xuân Hạnh Tô Thị Phấn (2007), “Một số đặc tính vi khuẩn Pasteurella multocida phân lập từ trâu, bò, lợn”, Khoa học Kỹ thuật Thú y, 14 (4), tr 30-41 Cao Văn Hồng (2002), Nghiên cứu đặc điểm dịch tễ bệnh tụ huyết trùng trâu, bò, lợn Đăk Lăk số biện pháp phòng trị, Luận án Tiến sỹ Nông nghiệp, Trường Đại học Nông nghiệp I, Hà Nội Võ Văn Hùng (1997), Đặc điểm dịch tễ bệnh tụ huyết trùng lợn Đăk Lăk biện pháp phìng trị, Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp, Đại học Nông nghiệp I, Hà Nội 78 10 Bùi Quý Huy (1998), “Một số đặc điểm bệnh tụ huyết trùng Việt Nam năm vừa qua”, Khoa học Kỹ thuật Thú y, 5(1), Hà Nội, tr 9-94 11 Hoàng Đăng Huyến (2004), Nghiên cứu đặc điểm dịch tễ, yếu tố ảnh hưởng đến bệnh tụ huyết trùng trâu, bò Bắc Giang đề xuất số biện pháp phòng chống, Luận án tiến sỹ Nông nghiệp, Viện Thú y, Hà Nội 12 Đặng Thế Huynh (1978), Truyền nhiễm học đại cương, Giáo trình bệnh truyền nhiễm gia súc, Nxb Nông nghiệp, tr 5-60 13 Đinh Duy Kháng, Lê Văn Phan, Phan Thanh Phượng, Trương Văn Dung, Hoàng Xuân Nghinh (2000), “Ứng dụng kỹ thuật PCR để định type vi khuẩn Pasteurella multocida miền Trung Việt Nam”, Khoa học Kỹ thuật Thú y, 7(2), tr 16-20 14 Phạm Sỹ Lăng Phan Địch Lân (2002), Bệnh thường gặp bò sữa Việt Nam kỹ thuật phòng trị (tập 1), Nxb Nông nghiệp Hà Nội, tr 18-27 15 Phạm Sỹ Lăng, Hoàng Văn Năm, Nguyễn Hữu Nam (2008), Một số bệnh quan trọng gây hại cho trâu bò, Nxb Nông nghiệp Hà Nội, tr 80-92 16 Phạm Sỹ Lăng, Lê Thị Tài (1994), Thuốc điều trị vắc xin sử dụng thú y, Nxb Hà Nội, tr 181-203 17 Dương Thế Long (1995), Nghiên cứu số đặc điểm dịch tễ vi khuẩn học bệnh tụ huyết trùng trâu, bò Sơn La để xác định biện pháp phòng trị thích hợp, Luận án Phó tiến sỹ Khoa học Nông nghiệp, Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam, Hà Nội 18 Chu Văn Mẫn (2001), Ứng dụng tin học sinh học (Sử dụng Microsoft Excel nghiên cứu sinh học), Nxb Đại học Quốc gia Hà Nội 19 Nguyễn Văn Minh (2005), Nghiên cứu số đặc điểm dịch tễ bệnh tụ huyết trùng xác định tỷ lệ mang trùng Pasteurella đàn trâu, bò tỉnh Hà Tây, Luận văn thạc sỹ Nông nghiệp, Trường Đại học Nông nghiệp I, Hà Nội 79 20 Nguyễn Ngã (1996), Đặc tính sinh học tương đồng kháng nguyên vi khuẩn Pasteurella multocida gây bệnh trâu, bò miền trung với chủng Iran chế tạo vắc xin, Luận án Phó tiến sỹ Khoa học Nông nghiệp, Hà Nội 21 Hoàng Xuân Nghinh, Trương Văn Dung, Hoàng Đăng Huyến, Tô Long Thành (2004), “Khả đáp ứng miễn dịch số vắc xin phòng bệnh tụ huyết trùng trâu, bò lưu hành nước ta”, Khoa học Kỹ thuật Thú y, 11(2), tr 81-84 22 Đỗ Trung Phấn (1979), Miễn dịch trung gian tế bào, Nxb y học Hà Nội 23 Hoàng Đạo Phấn (1996), “Nghiên cứu tác động thực khuẩn thể đặc hiệu Pasteurella multocida phân lập từ gia súc, gia cầm”, Khoa học Kỹ thuật Thú y, 3(1), tr 37-40 24 Nguyễn Vĩnh Phước (1978), Bệnh tụ huyết trùng trâu, bò, Giáo trình bệnh truyền nhiễm gia súc, Nxb Nông thôn, Hà Nội, tr 223-231 25 Nguyễn Vĩnh Phước, Lê Thanh Tòng, Lê Anh Phụng, Nguyễn Văn Vĩnh, Mai Hồng Phước (1986a), “Phân lập định type huyết học vi khuẩn tụ huyết trùng trâu, bò tỉnh phía Nam”, Kết hoạt động Khoa học Kỹ thuật thú y 1975 – 1985, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội, tr 105-125 26 Nguyễn Vĩnh Phước, Lê Thanh Tòng, Lê Anh Phụng, Nguyễn Văn Vĩnh, Mai Hồng Phước (1986b), “Phân lập định type huyết học vi khuẩn tụ huyết trùng lợn tỉnh phía Nam”, Kết hoạt động Khoa học Kỹ thuật Thú y 1975 – 1985, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội, tr 126-128 27 Phan Thanh Phượng (1986 – 1990), “Vắc xin nhũ hoá tụ huyết trùng trâu, bò sản xuất công nghệ”, Báo cáo tổng kết công trình 02B giai đoạn 1986 – 1990, tr 126-128 28 Phan Thanh Phượng (1994), Ba bệnh đỏ lợn, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội, tr 59-91 29 Quy trình kỹ thuật kiểm nghiệm vắc xin dùng thú y (1994), Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 80 30 Đoàn Thị Băng Tâm (1987), Bệnh động vật nuôi, Nxb Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, 1, tr 51-79 31 Nguyễn Như Thanh (2001), Dịch tễ học thú y, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 32 Nguyễn Thiên Thu (1996), Nghiên cứu số đặc tính vi sinh vật kháng nguyên vi khuẩn Pasteurella multocida phân lập từ trâu, bò mang trùng khu vực miền Trung Việt Nam, Luận án Phó tiến sỹ khoa học Nông nghiệp, Viện Thú y Quốc gia, Hà Nội 33 Nguyễn Đình Trọng (2002), Phân lập, xác định đặc tinh sinh học vi khuẩn Pasteurella sp trâu, bò nuôi tỉnh Bắc Kạn, lựa chọn vaccine phòng bệnh thích hợp, Luận án Tiến sỹ khoa học Nông Nghiệp, Hà nội 34 Đỗ Quốc Tuấn (2008), Nghiên cứu bệnh tụ huyết trùng lợn số tỉnh miền núi phía Bắc Việt Nam, Luận án Tiến sỹ Nông nghiệp, Viện Thú y, Hà Nội II TÀI LIỆU THAM KHẢO NƯỚC NGOÀI 35 Bain R V S., De Alwis M C L., Carter G R and Gupta B K (1982), “Haemorrhagic septicaemia”, Animal Production and Health, No 33, FAO, Rome 36 Bahnemann H G (1990), Vaccine, No 8, pp 299-303 37 Bauer A W., Kirby W M M., Sherris J C., Turck M (1966), “Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disk method”, Am J Clin Pathol, Vol45, pp 493–496 38 Bergey’s (1994), Manual of determinative Bacteriology, 9th Edition, by the Williams and Wilkings company 39 Carter G R (1952), “Type specific capsular antigens of Pasteurella multocida”, Canadian Journal of Medican Science, 30, pp 48-53 40 Carter G R (1955), “Studies on Pasteurella multocida I A Haemagglutination test for idetification of Serological types”, Americal Journal Veterinary Research, 16, pp 481-484 81 41 Carter G R (1959), “Studies on Pasteurella multocida VI, a serological types from species other cattle and swine”, American Journal of Veterinary, Reseach 21, pp 173-175 42 Carter G R (1961), “A new serological type of Pasteurella multocida from central Africa”, Veterinary Record, 73, pp 1052 43 Carter G R (1967), “Pasteurellosis: Pasteurella multocida and Pasteurella haemolytica”, In Advences in Veterinary Science, 11, pp 321-329 44 Carter G R (1984), Pasteurella, Yersinia and Francisella page: 111 – 121, in Diagnostic procedures in Veterinary Bacteriology and Mycology 4th ed (Carter G R ed) Charles C Thomas Publisher Springfield 45 De Alwis M C L (1982), “Pasteurella multocida serotype 6:B infection from an elephant”, Sri Lanka Veterinary Journal, 18, pp 28 46 De Alwis M C L (1984), “Haemorrhagic septicaemia in cattle and buffaloes”, Rev sci tech Off int Epiz., 3, pp 707-730 47 De Alwis M C L (1992), “A review, Pasteurellosis in production Animal”, ACIAR proceedings, No 43, pp 11-20 48 De Alwis M C L and Sumanadasa M A (1982), “Naturally acquired immunity to haemorrhagic septicaemia among cattle and buffaloes in Sri Lanka”, Tropical Animal Health and Production, 14, pp 27-28 49 Egerton J R (2005), Gene-based vaccine development for improving animal production in developing country, Application of gene-based technologies for improving animal production and health in developing countries, Edited by Harinder P S: makkar and Gerrit J Viljoen, pp 199-210 50 FAO (1991), Proceeding of the FAO/APHHCA workshop on haemorrhagic septicaemia, February, Kandy, Sry LanKa 51 Gupta B K (1980) Int sym On dis Of Liv., 13, pp 45-53 82 52 Heddleston K L (1966), “Immunologic and serologic comparison in the poultry with analysis of biochemical activity in Pasteurella multocida strains during three years”, Cornell Veterinary, No2, pp 235-241 53 Heddleston K L., Roberts P A and Ritchie A E (1966), “Immunizing and toxin properties of particulate antigens from two immunogenic types of Pasteurella multocida of A vian origin”, Journal of Immulogy, 96, pp 124-133 54 Heddleston K L., Gallagher J E and Roberts P A (1972), “Fowl cholera: Gel diffusion precision test for serotyping Pasteurella multocida avian species”, Avian disease, 16, pp 925-936 55 Horadagoda N U., Hodgson J C., Monon G M., Eckersall P D (2001), “Role of endotoxin in the pathogenesis of heamorrhagic septicaemia in the buffalo”, Micro Pathog 33(3), pp 171-179 56 Hunt M L., Adler B., Townsend K M (2000), “The molecular biology of Pasteurella multocida”, Vet Microbiology, 72(1), pp 3-25 57 Lane E P., Kock N D., Hill F W G and Mohan K (1992), “An outbreak of haemorrhagic septicaemia (septicaemic pasteurellosis) in cattle in Zimbabwe”, Tropical Animal Health and Production, Volume 24, Number /June, 1992, pp 97-102 58 Lignieres J M (1900), “Contribution Létude et la classification des septicaemia haemorrhagique les Pasteurella”, Ann Inst Pasteur (paris), 15:734 59 Mohammad R H H., Masood J., Masood R S A., Arya R and Hamid J (2006), Occurrence of Pasteurella multocia in the nasopharynx of healthy buffaloses and their immunity statutus, Bull Vet Inst Pulawy, vol 50, pp 435-438 60 Mustafa A A., Ghalile H W and Shighidi M T (1978), “Carrier rate of Pasteurella multocida in cattle associated with an outbreak of haemorrhagic septicaemia in Suda”, British Veterinary Journal, 134, pp 375-378 83 61 Nakai T and Kume K (1987), “Purification of three fragments of the dermonecrotic toxin from Pasteurella multocida”, Research in Veterinary, Science 42, pp 232-237 62 Namioka S (1978), “Pasteurella multocida: Biochemical characteristic and serotype”, In: Methods in microbiology, vol.10, Academic Press New York, 11, pp 274-292 63 Namioka S and Murata M (1961a), “Serological studies on Pasteurella multocida I A simplified method for capsule typing of the organism”, Cornell Veterinarian, Vol 51, pp 498-507 64 Namioka S and Murata M (1961b), “Serological studies on Pasteurella multocida II Charaeteristic of somatic “O” antigen of the organism”, Cornell Veterinarian, Vol 51, pp 507-512 65 Namioka S and Murata M (1961c), “Serological studies on Pasteurella multocida III: '0' antigen analysis of cultures isolated from various animals”, Cornell Veterinarian, Vol 51, pp 522-528 66 Namioka S and Murata M (1964), “Serological studies on Pasteurella multocida V: Some epizootiological findings resulting from '0' antigen analysis”, Cornell Veterinarian, Vol 54, pp 520-534 67 Natalia L., Patten B and Syansudin A (1992), “Evaluation of bovine antibody responses to haemorrhagic septicaemia vaccine using ELISA and PMPT Pasteurellosis in production animal international workshop”, Sponsores by ACIAR proceeding, No 43, Indonesia, 10 – 13 August, pp 219-223 68 OIE Manual (2008), Principles of Veterinary Vaccine Production, Chapter 1.1.8 69 Price G H and Smith J E (1966), “Antigenic studies on Pasteurella multocida using immunodiffusion techniques I Identification and 84 nomenclature of the soluble antigens of a bovine Haemorrhagic septicaemia strain”, Journal of comparative Pathology, 76, pp 303-314 70 Quinn P J., Carter M E., Markey B K., Carter G R (1994), Pasteurella species In: Quinn P J.; Carter M E.; Markey B K.; Carter G R (Eds.), Clinical Veterinary Microbiology Mosby, Edinburgh, pp 254–259 71 Ramdani, Dawkins H J., Johnson R B., Spencer T L., Adler B (1990), “Pasteurella multocida infections in mice with refence to haemorrhagic septicaemia in cattle and buffalo”, Immunol Cell Biol 68(1), pp 57-61 72 Reed L J., Muench H (1938) "A simple method of estimating fifty percent endpoints", The American Journal of Hygiene 27: 493-497 73 Rimler R B and Rhoades I R (1987), “Serogroup F, a new capsule serogroup of Pasteurella multocida”, Journal of Clinical Microbiology, 25, pp 615-618 74 Roberts R S (1947), “An immunologycal study of Pasteurella septicaemia”, Journal of comparative pathology, 57, pp 261-278 75 Rosenbush C T and Merchant I A (1939), “A study of the Haemorrhagic septicaemia Pasteurella”, Journal of Bacteriology, 37, pp.69 76 Seleim R S (2005), “Review: Major pathogenic components of Pasteurella multocida and Mannhemia (Pasterella) haemolytica isolated from animal origin”, Bacteriology Department, Animal Health Research Institute, Nadi El-Seed St Dokki, 12311 Cairo, Egypt 77 Smith H (1990), “Pathogenicity and the microbe in vivo”, Journal of General Microbiology, Vol136, pp 371 - 383 78 Van Oirschot J T (1993), “Efficacy of porcine vaccines”, Keynot lectures, pp.15-19 79 Yeo B K and Mukhtar (1992), “Haemorhagic septicaemia of buffalo in sabah, Malaysia, Pasteurellosis in Production Animal”, ACIAR proceedings No43, pp.112-115 MỘT SỐ HÌNH ẢNH MINH HOẠ CHO ĐỀ TÀI Một số hình ảnh phương thức chăn nuôi Bò có triệu chứng bệnh tụ huyết trùng Hình thái tính chất bắt màu Gram vi khuẩn Pasteurella multocida Hình thái khuẩn lạc Pasteurella multocida thạch máu bò Indole dương tính Phản ứng Catalase dương tính Phản ứng thử oxydase Điện di Gel sản phẩm PCR 11 chủng vi khuẩn P multocida Chuột thí nghiệm trước thử độc lực Chuột thí nghiệm trước thử độc lực Chuột thí nghiệm mổ khám bệnh tích Chuột thí nghiệm sau công cường độc Thử kháng sinh đồ [...]... huyết trùng ở trâu, bò tại một số huyện có dịch trên địa bàn tỉnh Cao Bằng và bước đầu thử nghiệm auto-vaccine 2 Mục tiêu nghiên cứu - Xác định đặc điểm dịch tễ bệnh tụ huyết trùng trâu, bò trên địa bàn tỉnh Cao Bằng; - Khảo sát sự lưu hành vi khuẩn Pasteurella multocida ở trâu, bò; - Xác định type giáp mô của vi khuẩn Pasteurella multocida phân lập được; - Thử nghiệm hiệu quả bảo hộ và tính an toàn trên. .. bệnh tụ huyết trùng xảy ra mạnh ở các tỉnh phía Nam và xảy ra lẻ tẻ ở các tỉnh phía Bắc Trong những năm 70 có 80% số ổ dịch tụ huyết trùng và 84% số thiệt hại gia súc do bệnh tụ huyết trùng thuộc về các tỉnh ở phía Nam Đến những năm 90 phân bố địa lý của bệnh nghiêng về các tỉnh phía Bắc, số địa phương có dịch tụ huyết trùng cũng tăng lên nhiều, hàng năm có 20 – 25 tỉnh thông báo có bệnh lưu hành Ở. .. sinh bệnh Theo Phạm Sỹ Lăng và cs (2008) [15] bệnh tụ huyết trùng ở trâu, bò phát triển như sau: Bệnh tụ huyết trùng phát sinh ở các vùng nóng ẩm Vào mùa mưa, vi khuẩn có sẵn trong đất, được nước mưa đưa lên mặt đất, dính vào rơm, cỏ và trôi vào các hồ, ao, mương, máng Trâu, bò ăn phải rơm cỏ và uống nước có nhiễm khuẩn sẽ mắc bệnh Bình thường một số trâu, bò khỏe cũng mang vi khuẩn tụ huyết trùng. .. khẳng định: Nơi nào có bệnh tụ huyết trùng trâu, bò thì ở đó người 6 ta cũng phát hiện bệnh này ở động vật hoang dã Theo De Alwis (1984) [46] loài vật cảm nhiễm mạnh nhất đối với bệnh tụ huyết trùng là trâu và bò trong đó trâu mẫn cảm hơn bò, từ kết quả nghiên cứu các ổ dịch tụ huyết trùng trâu, bò ở Sri Lanka ông đã khẳng định điều đó Tỷ lệ mắc bệnh và tỷ lệ chết của các loài vật với bệnh tụ huyết trùng. .. suiseptica gây bệnh ở lợn Pasteurella boviseptica gây bệnh ở bò Pasteurella oviseptica gây bệnh ở dê, cừu Pasteurella aviseptica gây bệnh ở gà… Sau đó, tên của vi khuẩn còn một vài lần nữa được thay đổi và đến năm 1939, Rosenbush và Merchant (1939) [75] đề nghị đặt tên cho vi khuẩn này là Pasteurella multocida (P multocida) , tên này được sử dụng trong khoá phân loại của Bergey’s và được dùng phổ biến trên. .. được bệnh, đặc biệt là những nước nhiệt đới, bệnh tụ huyết trùng vẫn là mối đe doạ người chăn nuôi Hiện tượng mang vi khuẩn P multocida ở động vật đã được nhiều nhà khoa học nghiên cứu Mustafa và cs (1978) [60] đã tiến hành lấy dịch ngoáy mũi trâu, bò để phân lập P multocida và có nhận xét: Thường ở nơi không có dịch tụ huyết trùng trâu, bò thì tỷ lệ trâu, bò khoẻ mang trùng là 3%, còn ở nơi có dịch tụ. .. phát hiện vi khuẩn gây bệnh cho gà (Fowl Cholera), bệnh ở lợn do Loeffer phát hiện năm 1886 Cùng năm 1886 nhận thấy sự giống nhau về tính chất gây bệnh và có sự tương đồng về vi khuẩn gây bệnh phân lập từ các loài động vật nói trên, Hueppe gọi chung là vi khuẩn gây nhiễm trùng huyết, xuất huyết và đặt tên là Bacillus septicaemia Năm 1887, Oreste và Annani đã mô tả một bệnh ở trâu do một loại vi khuẩn tương... vật thí nghiệm của autovaccine phòng bệnh tụ huyết trùng 3 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài * Ý nghĩa khoa học: - Bổ sung tư liệu về đặc điểm dịch tễ bệnh tụ huyết trùng trâu bò, sự lưu hành của vi khuẩn Pasteurella multocida; - Bổ sung tư liệu về kết quả phân lập và giám định đặc tính sinh vật học của vi khuẩn Pasteurella multocida, kết quả xác định type vi khuẩn Pasteurella multocida bằng kỹ... chỉ bệnh do vi khuẩn Pasteurella gây ra Ngày nay, sau hơn một trăm năm kể từ khi phát hiện lần đầu, P multocida vẫn là nguyên nhân gây bệnh tụ huyết trùng cho nhiều loài gia súc gia cầm Tuy có tính thích nghi gây bệnh trên các loài vật khác nhau, nhưng P multocida đều có những đặc tính cơ bản giống nhau 1.1.2 Ở Vi t Nam Theo Phan Đình Đỗ và Trịnh Văn Thịnh (1958) [3], bệnh tụ huyết trùng trâu, bò được... hệ thống hô hấp và tiêu hóa Nhưng vi khuẩn không gây bệnh và súc vật có sức đề kháng cao, giữa vi khuẩn và súc vật có sự cân bằng sinh học Khi gặp các yếu tố ngoại cảnh bất lợi: Thiếu thức ăn, làm vi c nặng, thời tiết thay đổi đột ngột, trâu, bò bị giảm sức đề kháng, thế cân bằng sinh học bị phá vỡ và vi khuẩn trở nên cường độc, gây bệnh cho trâu, bò Sau khi vào đường tiêu hóa, vi khuẩn qua niêm mạc