nguyễn phúc huy 21126073 cndt2 thứ 4

Trang 1 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO Trang 2 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA KHOA HỌC SINH HỌC BÁO CÁO THỰC HÀNH PHÁT TRIỂN SẢN PHẨM SINH HỌC Giảng

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

KHOA KHOA HỌC SINH HỌC

BÁO CÁO THỰC HÀNH

CÔNG NGHỆ DI TRUYỀN 2

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

KHOA KHOA HỌC SINH HỌC

BÁO CÁO THỰC HÀNH

PHÁT TRIỂN SẢN PHẨM SINH HỌC

TP Thủ Đức, 01/06/2024

MỤC LỤC

Trang

MỤC LỤC i

DANH SÁCH CÁC HÌNH ii

DANH SÁCH CÁC BẢNG iii

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN 1

1.1 Đậu nành chuyển gene 1

1.2 Kĩ thuật 1

CHƯƠNG 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 2

2.1 Thời gian và địa điểm 2

2.2 Vật liệu và phương pháp 2

2.2.1 Vật liệu nghiên cứu buổi 1 2

2.2.2 Nội dung thực hiện buổi 1 2

2.2.3 Vật liệu nghiên cứu buổi 2 4

2.2.4 Nội dung thực hiện buổi 2 4

2.2.5 Điện di và đọc kết quả 5

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 6

3.1 Kết quả 6

3.2 Kết luận 6

DANH SÁCH CÁC HÌNH

Trang

Hình 2.1 Mẫu đã nghiền và thêm buffer 7

Hình 2.2 Mẫu sau khi thêm PCI rồi lắc 8

Hình 2.3 Mẫu sau khi ly tâm 5 phút 8

Hình 2.4 Hút dịch nổi sang tupe mới 8

Hình 2.5 Ly tâm lần 2 9

Hình 3.1 Kết quả điện di buổi 1 11

Hình 3.2 Kết quả điện di buổi 2 11

Hình 3.3 Đo OD kiểm tra lượng DNA ly trích 12

DANH SÁCH CÁC BẢNG

Trang Bảng 2.1 Thành phần của phản ứng PCR 4 Bảng 2.2 Chương trình nhiệt để thiết lập cho máy PCR 5

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN

1.1 Đậu nành chuyển gene

Đậu nành GMO giống đậu nành được cấy thêm những tính trạng của giống sinh vật khác, làm cho giống đậu nành này được dễ trồng trọt, dễ sản xuất ngay cả trong những môi trường khắc nghiệt Ngoài ra, GMO còn tạo ra giống đậu nành có tuổi đời lâu hơn, màu sắc bắt mắt, đều hạt hơn và giá thành rẻ hơn Đây là giống đậu nành đang được sử dụng rộng rãi trên thế giới, đặc biệt ở Mỹ và một số quốc gia Mỹ La tinh.Đậu nành GMO lần đầu tiên được giới thiệu vào năm 1996, trong đó việc biến đổi gen chủ yếu làm cho cây đậu nành kháng thuốc diệt cỏ Mặc dù bị phản đối nhưng đến nay đậu nành GMO vẫn được trồng ở nhiều nơi trên thế giới Điều này có nghĩa là đậu nành có thể bị phun thuốc diệt cỏ nhiều lần trong 1 mùa sinh trưởng hoặc hiểu đơn giản là với đậu nành GMO, người nông dân có thể thoải mái phun thuốc diệt cỏ vì thuốc sẽ giết chết tất cả các loại cây khác (thường là cỏ dại) trong khi đậu nành vẫn sống và sinh trưởng khỏe mạnh

Do sự ưu việt về năng suất và sức sống nên việc sản xuất và nhập khẩu đậu nành chuyển gene mang lại sự cạnh tranh lớn với các giống đậu nành thông thường Mặc khác, sự an toàn về thực phẩm chuyển gene từ lâu đã là một chủ đề bàn luận sôi nổi Ở các nước châu Âu thực phẩm chuyển gene phải được dán nhãn GMO để phân biệt cho người tiêu dùng Và việc kiểm tra thực phẩm có chứa GMO hay ko là 1 quy trình quan trọng trong việc xuất nhập khẩu thực phẩm, đặt biệt là đậu nành một mặc hàng quá phổ biến là sản phẩm của GMO

1.2 Kĩ thuật

Các phương pháp chính được sử dụng để phát hiện cây trồng GMO là kĩ thuật PCR(Polymerase Chain Reaction) Từ DNA tổng số được li trí trực tiếp từ mẫu thực phẩm nhờ vào các đoạn primer riêng biệt được khuếch đại qua PCR và quan sát bằng cách điện di

CHƯƠNG 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP

2.1 Thời gian và địa điểm

Thời gian: 8h-15h ngày 22/05/2024

Địa điểm nghiên cứu: Phòng 101 Viện công nghệ sinh học và môi trường, tòa nhà A2, trường Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh

2.2 Vật liệu và phương pháp

2.2.1 Vật liệu nghiên cứu buổi 1

Mẫu đậu nành đã nghiền mịn(mẫu 3), ống Eppendorf, PCI Buffer, dung dịch CI, Isopropanol, Ethanol 70%, TE Buffer, mồi xuôi, mồi ngược, H2O, Master mix, Gel agarose 1%, dung dịch TBE 0,5X, Gel Red, ladder, bồn điện di, máy ly tâm, máy PCR, micropipet, dụng cụ nghiền

2.2.2 Nội dung thực hiện buổi 1

Bước 1: Lấy 0,05g mẫu bắp (5) đã được nghiền mịn cho vào eppendorf 1,5 mL Bước 2: Thêm 600 µL dịch li trích SDS và tiếp tục nghiền

Hình 2.1 Mẫu đã nghiền và thêm buffer

Bước 3: Thêm 600 µL PCI Buffer, lắc đều

Hình 2.2 Mẫu sau khi thêm PCI rồi lắc

Bước 4: Ly tâm ở 10000 vòng/phút trong 5 phút

Hình 2.3 Mẫu sau khi ly tâm 5 phút

Bước 5: Hút 500 µL dịch nổi cho vào tube mới

Hình 2.4 Hút dịch nổi sang tupe mới

Bước 6: Thêm 500 µL CI trộn đều li tâm 10000 vòng/phút trong 5 phút

Hình 2.5 Ly tâm lần 2

Bước 7: Hút 400 µL dịch nổi cho vào tube mới

Bước 8: Thêm 0,6V dịch nổi 0,6x400 µL=240 µL Isopropanol vào tube và đảo nhẹ, đem ủ ở -20oC trong 30 phút

Bước 9: Ly tâm 10000 vòng/phút trong 10 phút, sau đó đổ bỏ dịch nổi

Bước 10: Cho 500 µL Ethanol 70o li tâm 10000 vòng/phút trong 3 phút và loại bỏ dịch nổi (lặp lại thêm 1 lần)

Bước 11: Hòa tan tủa DNA với 30 μl TE Buffer và bảo quản ở - 20°C

Bước 12: Chạy điện di kiểm tra DNA ly trích được

2.2.3 Vật liệu nghiên cứu buổi 2

Tube PCR, máy PCR, bồn điện di, gel agarose, pipet, đầu típ, ladder, master mix, Primer F (P35S), primer R, Gel Red, nước khử ion

2.2.4 Nội dung thực hiện buổi 2

Bước 1: Chuẩn bị hóa chất ( mẫu, primer,…) và công cụ PCR

Bước 2: Thực hiện mix các thành phần phản ứng PCR theo mẫu

Bảng 2.1 Thành phần của phản ứng PCR

Bước 3: Cho mẫu sau khi mix vào máy PCR

Bước 4: Thiết lập chu kì nhiệt như sau:

Bảng 2.2 Chương trình nhiệt để thiết lập cho máy PCR

40

Bước 5: Thu nhận sản phẩm PCR

2.2.5 Điện di và đọc kết quả

Bước 1: Chuẩn bị gel agarose 1% đưa gel vào bồn điện di

Bước 4: Trộn lẫn 5 μL sản phẩm PCR với 10 μL Gel red Cho vào các giếng toàn bộ hỗn hợp trên (cho vào bồn điện di một lượng TBE Buffer 0,5X đủ ngập miếng gel) Bước 5: Cho vào giếng 5 μL ladder đã được nhuộm với 10 μL Gel red và 10µL Bước 6: Tiến hành điện di ở hiệu điện thế 100 V trong 20-30 phút

Bước 7: Đọc kết quả dưới tia UV

Bước 8: Chụp gel để lưu lại kết quả

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN

3.1 Kết quả

Hình 3.1 Kết quả điện di buổi 1

Hình 3.2 Kết quả điện di buổi 2

3.2 Kết luận

Ở buổi 1 thấy có hiện band khá rõ và đậm kết quả kiểm tra khi đo OD xác định nồng

độ khá cao

Mẫu 3

Mẫu 3 Ladde

r

DC (+)

Hình 3.3 Đo OD kiểm tra lượng DNA ly trích

Ở buổi 2 thấy có band xuất hiện ở mức 100-200 bp suy ra mẫu 3 đậu nành là mẫu

có gene GMO