Trang 1 Bài tập 1 Trong quá trình ký sinh tế bào rễ thực vật, tuyến trùng Meloidogyne tiết ra khoảng 500 protein, trong đó có nhiều protein chưa biết chức năng.. Để tìm hiểu đặc điểm của
Bài tập Trong trình ký sinh tế bào rễ thực vật, tuyến trùng Meloidogyne tiết khoảng 500 protein, có nhiều protein chưa biết chức Để tìm hiểu đặc điểm protein Mi-SP1, trình tự gene Minc17980 mã hóa cho protein sử dụng để tạo dịng Trình tự Minc17980 (303 bp) ATGTTTTTTCTAAAATATTTC .NNNNNNNNNN TTGTCTTCAAAGAAGAA TTAA Tổng hợp cDNA Minc17980 cách sử dụng primer ngược (reverse primer) Hãy cho biết trình tự primer sử dụng (15 nu đầu tiên)? Để tạo thuận lợi cho tạo dòng thứ cấp (subcloning) cho mục đích nghiên cứu biểu gene, Minc17980 khuếch đại PCR gắn thêm trình tự nhận biết enzyme A (G_A_C_) đầu 5’ enzyme B () đầu 3’(_G_A_C) Hãy cho biết trình tự primer sử dụng (15 nu đầu tiên) ? a Primer forward: ………………………………………………… Nhiệt độ nóng chảy (Tm): …… b Primer reverse: ………………………………………………… Nhiệt độ nóng chảy (Tm): …… Tiến hành phản ứng PCR, cho biết lượng sử dụng thành phần phản ứng Thành phần Nồng độ đầu Nồng độ cuối Thể tích (l) Buffer 10 X 1X dNTP 10 mM mM Primer (F) 10 M 0,4 M Primer (R) 10 M 0,4 M MgCl2 50 mM mM DNA template (10 ng/ul) 5-10 ng Pfu polymerase (2U/ul) 1U ddH2O Tổng thể tích 20 Bản đồ vector pGEM-T Easy Trình tự promotor trình tự tạo dịng vector pGEM-T Easy Sản phẩm PCR tinh tạo dòng với hệ thống vector pGEM-T Easy Hãy trình bày phương pháp nối sản phẩm PCR vector? Biến nạp vào tế bào E.coli JM109 phương pháp sốc nhiệt Hãy trình bày phương pháp sàng lọc dòng tế bào mang vector tái tổ hợp Kết giải trình tự cho thấy thu nhận đoạn mã hóa Minc17980 Để tìm hiểu gene Minc17980 biểu đâu thể tuyến trùng, tiến hành phương pháp lai chỗ Mẫu dò (probe) tổng hợp cách sử dụng dUTP-dioxygenin Hãy trình bày phương pháp tổng hợp mẫu dị phát Minc17980 (RNA) mẫu dò làm đối chứng?