Nghiên cứu nhân giống in vitro cây sachi (plukenetia volubilis l )

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM TRỊNH THỊ THUYỀN NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY SACHI (PLUKENETIA VOLUBILIS L.) LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC THỰC NGHIỆM Đà Nẵng, 5/2021 Tai ngay!!! Ban co the xoa dong chu nay!!! 16990037659791000000 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM TRỊNH THỊ THUYỀN NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY SACHI (PLUKENETIA VOLUBILIS L.) Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60.42.01.14 LUẬN VĂN THẠC SĨ Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS Võ Châu Tuấn Đà Nẵng, 5/2021 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu nghiên cứu trung thực chƣa đƣợc công bố cơng trình khác Các số liệu liên quan đƣợc trích dẫn có ghi nguồn gốc Tơi xin chịu hoàn toàn trách nhiệm kết sản phẩm kế thừa công bố ngƣời khác Ngƣời cam đoan Trịnh Thị Thuyền LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới thầy TS Võ Châu Tuấn ngƣời hƣớng dẫn, trực tiếp truyền đạt kinh nghiệm quý báu động viên tơi suốt q trình thực luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn thầy cô Khoa Sinh - Môi trƣờng - Đại học Sƣ Phạm - Đại học Đà Nẵng tận tình giảng dạy, tạo điều kiện cho học tập, rèn luyện kỹ nhƣ kinh nghiệm thực tiễn Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè, bạn đồng nghiệp giúp đỡ, động viên suốt thời gian làm luận văn Xin chân thành cảm ơn! Ngƣời thực Trịnh Thị Thuyền ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI LUẬN VĂN THẠC SĨ KHÓA 36 NGÀNH: SINH HỌC THỰC NGHIỆM MÃ SỐ: 60420114 Thông tin chung - Tên đề tài: “Nghiên cứu nhân giống in vitro Sachi (Plukenetia volubilis L.) ” - Họ tên học viên: Trịnh Thị Thuyền - Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS Võ Châu Tuấn - Cơ sở đào tạo: Đại học Sƣ Phạm, Đại hoc Đà Nẵng Mục tiêu 2.1 Mục tiêu chung Xây dựng đƣợc quy trình nhân giống in vitro Sacchi, chất lƣợng giống tốt 2.2 Mục tiêu cụ thể - Xác định đƣợc điều kiện khử trùng mẫu hạt thích hợp để tạo mẫu in vitro khởi động - Xác định đƣợc mơi trƣờng ni cấy thích hợp cho nhân chồi in vitro - Xác định đƣợc môi trƣờng ni cấy thích hợp để tạo rễ in vitro hình thành hồn chỉnh Tính sáng tạo Nghiên cứu vấn đề mới, vận dụng nhiều phƣơng pháp nghiên cứu khác ngồi nƣớc Tóm tắt kết nghiên cứu Qua nghiên cứu, rút kết luận là: Khử trùng mẫu hạt Sachi cho hiệu tốt với cồn 70o (trong 30 phút) nƣớc Javel 5% (trong 20 phút) Tỉ lệ hạt Sachi vô trùng sống có khả nảy mầm đạt 100%; khả nhân chồi in vitro từ đoạn thân có mắt Sachi cao nuôi cấy môi trƣờng MS có 30g/l saccharose, 0,8 g/l Agar, pH=5,8, bổ sung 0,5 mg/l BAP, hệ số nhân chồi đạt 4,57 chồi/mẫu, chiều dài chồi đạt 3,17 cm có 4,73 lá/chồi sau tuần nuôi cấy; khả tạo rễ in vitro chồi Sachi cao nuôi cấy mơi trƣờng ½ MS có 30g/l saccharose, 0,8 g/l agar, pH=5,8, không bổ sung chất ĐHST, tỷ lệ mẫu chồi rễ đạt 100% 9,67 rễ/chồi, chiều dài rễ 15,33 cm sau 20 ngày nuôi cấy Từ khóa: Thực vật, ni cấy, nhân giống, Sachi ( tên la tinh), mô Tam Kỳ, ngày 30 tháng năm 2021 Xác nhận giáo viên hƣớng dẫn TS Võ Châu Tuấn Ngƣời thực đề tài Trịnh Thị Thuyền DA NANG UNIVERSITY THE UNIVERSITY OF PEDAGOGY INFORMATION ON RESEARCH RESULTS COURSE: 36 MAJOR: Experimental Biology CODE: 60420114 General information - Project title: "In vitro propagation of Sachi (Plukenetia volubilis L.)" - Major: Experimental Biology - Name of student: Trinh Thi Thuyen - Supervisor: Assoc PhD Vo Chau Tuan - Training institution: Da Nang University of Education Objective(s) 2.1 General objective The process of in vitro propagation of Sacchi trees has been established with good seedling quality 2.2 Detail goal - Determine the suitable sterilization conditions for seed samples to create starter in vitro samples - Determine the suitable culture medium for in vitro shoot multiplication - Determine the appropriate culture medium for in vitro rooting and complete seedling formation Novelty and creativity Research a new problem, apply many different research methods at home and abroad Research results Through the research, we draw the following conclusions: Sterilization of Sachi seed samples has the best effect with 70o alcohol (for 30 minutes) and 5% Javel water (for 20 minutes) The percentage of sterile Sachi seeds alive and capable of germination reached 100%; The ability to multiply shoots in vitro from Sachi leaves was highest when cultured on MS medium with 30g/l sucrose, 0.8 g/l Agar, pH=5.8, supplemented with 0.5 mg /l BAP, shoot multiplication factor of 4.57 shoots/sample, shoot length of 3.17 cm and 4.73 leaves/bud after weeks of culture; The in vitro rooting ability of Sachi shoots was highest when cultured on ½ MS medium with 30g/l sucrose, 0.8 g/l agar, pH=5.8, without adding biostimulant, and the percentage of shoots roots reached 100% and 9.67 roots/bud, the root length was 15.33 cm after 20 days of culture Key words: Plant, culture, propagation, Sachi, tisue Tam Kỳ, August 2021 Supervior’s confirmation Ph.D Vo Chau Tuan Student Trinh Thi Thuyen MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu đề tài 3 Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 GIỚI THIỆU VỀ NHÂN GIỐNG IN VITRO Ở THỰC VẬT 1.1.1 Khái niệm nhân giống in vitro 1.1.2 Cơ sở khoa học nhân giống in vitro 1.1.3 Các giai đoạn nhân giống in vitro 1.1.4 Các yếu tố ảnh hƣởng đến đến trình nhân giống in vitro 10 1.2 GIỚI THIỆU VỀ CÂY SACHI 18 1.2.1 Đặc điểm phân bố, sinh học sinh thái 18 1.2.2 Giá trị sử dụng Sachi 19 1.2.3 Thành phần hóa học Sachi 22 1.2.4 Giá trị kinh tế Sachi 23 1.3 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU CHUNG CỦA CÂY SACHI 25 1.3.1 Tình hình trồng sản xuất Sachi Việt Nam 25 1.3.2 Tình hình nghiên cứu Sahchi 26 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 2.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 29 2.2 PHẠM VI NGHIÊN CỨU 29 2.3 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 29 2.4 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.4.1 Phƣơng pháp vô trùng mẫu vật 30 2.4.2 Phƣơng pháp nhân chồi in vitro Sachi 31 2.4.3 Phƣơng pháp tạo rễ in vitro 31 2.4.4 Phƣơng pháp xử lý số liệu 31 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 32 3.1 HIỆU QUẢ KHỬ TRÙNG MẪU HẠT VÀ KHẢ NĂNG NẢY MẦM IN VITRO TỪ HẠT 32 3.2 ẢNH HƢỞNG CỦA CHẤT ĐHST ĐẾN KHẢ NĂNG NHÂN CHỒI IN VITRO SACHI 36 3.2.1 Ảnh hƣởng BAP đến khả tái sinh chồi in vitro 37 3.2.2 Ảnh hƣởng KIN đến khả nhân chồi in vitro 40 3.2.3 Ảnh hƣởng TDZ đến khả tái sinh chồi in vitro 41 3.2.4 Ảnh huởng BAP phối hợp với NAA đến khả nhân chồi in vitro Sachi 43 3.2.5 Ảnh huởng BAP phối hợp với IBA đến khả nhân chồi in vitro Sachi 45 3.3 ẢNH HƢỞNG CỦA CÁC YẾU TỐ MÔI TRƢỜNG NUÔI CẤY ĐẾN KHẢ NĂNG TẠO RỄ IN VITRO SACHI 46 3.3.1 Ảnh hƣởng môi trƣờng khoáng đến khả tạo rễ in vitro 46 3.3.2 Ảnh hƣởng IBA đến khả tạo rễ in vitro Sachi 48 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 50 DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC D~I HQC DA NANG CONG HoA XA HOI CHiT NGHiA VI~T NAM TRUONG D~I HQC SU PH~M DQc I~p - T., - Hanh phuc S6: CJYJrQD-DHSP DaN{mg, o~ thong y nam 2019 QUYETDINH V~ vi~c giao d~ tai va trach nhiem hinrng din lu~n van thac si HI~U TRUONG TRUONG D~I HQC SU PH~M Can cir Nghi dinh s6 32/CP 04 thang nam 1994 cua Chinh phu v~ viec lap Dai hoc Da N~ng; Can cir Thong tir s6 08/2014/TT-BGDDT 20/3/2014 cua BQ GD&DT v~ viec ban hanh Quy ch~ t6 chirc va hoat dQng cua dai hoc vung va cac co sa giao due dai hoc vien; Can cir Quyet dinh s6 6950IQD-DHDN 01112/2014 cua Giam d6c Dai hoc Da N~ng ban hanh Quy dinh nhiem vu, quyen han cua Dai hoc Da N~ng, cac co sa giao due dai hoc vien va cac dan vi tnrc thuoc; Can cir Thong nr s6 15/2014/TT-BGDDT 15/5/2014 cua BQ GD&DT v~ vi~c ban hanh Quy ch~ Dao t~o trinh dQth~c sl; Can Cll Quy~t dinh s6 4569/QD-DHDN 29/12/2017 cua Giam d6c D~i hQc Da N~ng v~ vi~c cong nh~n hQcvien cao hQc trung tuy~n khoa 36; Can Cll Quy~t dinh 1060IQD-DHSP 0111112016 cua Hi~u trm'mg Truang D~i hQc Su ph~m - DHDN v~ vi~e ban hanh Quy dinh dao t~o trinh dQth~c sl; Xet d~ nghi cua Ban chu nhi~m Khoa Sinh- Moi truangv~ vi~c Quy~t dinh giao d~ tai va trach nhi~m huang dftn lu~n van th~c sl; Xet d~ nghi cua ong Truang Phong Dao t~o, QUYETDINH: Di~u 1: Giao cho hQc vien Trinh Thi Thuy~n, nganh Sinh hQc th.,c nghi~m, khoa 36, th\fc hi~n d~ tai lu~n van Nghien CtfU nhan giBng in vitro cay Sachi (Plukenetia volubilis L.), duai s\}'huang dftn cua TS Vo Chau Tu~n, TrIrimg D~i hQc SIr ph~m - D~i hQc Da N~ng Di~u 2: HQc vien cao hQc va nguai huang dftn co ten a Di~u dUQ'chuang cac quy~n IQ'iva th\fChi~n nhi~m V\l dung thea Quy ch~ dao t~o trinh dQth~c SI BQ Giao d\lc va Dao t~o ban hanh va Quy dinh v~ dao t~o trinh dQ th~c SI cua Truang D~i hQc Su ph~m - D~i hQc Da N~ng Di~u 3: Cac Dng (ba) Tru6ng Phong T6 ChllC- Hanh chinh, Dao t~o, K~ ho~ch Tai chinh, Khoa Sinh - MDi truang, nguai huang dftn lu~n van va hQC vien co ten tren can ell Quy~t dinh thi hanh.6\/ Nui nh~n: - Nhu Di€u 3; - Luu: VT, Dao t~o PGS.TS VO VAN MINH .' , DAr HQC CONG HOA xA HOI cHiJ NGHiA VIET NAM DA NANG TRUONG DAI HOC SU PHAM DQc I,p - TIJ - H~nh p h uc Eia N8ng, ng ay 15thang S6: ~g/QD-DHSP nam 2021 QUYET DJNH vi vi~c I,p HQidAng ch§m lu,n van thac si HIEU TRUONG TRUONG DAI HOC SU PHAM - DAI HOC DA NANG Can ctr Nghi dinh s6 321CP 041411994'cua Chinh phu v~ viec ldp Dai h9C Da Nang; Can ctr Quyit dinh s6 2762IQD-HDDN 141812020 cua cn« tich H(3i dong D(li h9C o« Nang v~ viec Ban hanh Quy chi t6 chuc va hoat dong D(li h9C Da N8ng; Can cu Thong tu s6 15120141TT-BGDDT 151512014 cua B(3 Giao d~IC va Dao tao v~viec ban hanh Quy chi Dao tao trinh d(3thac sf; Can cu Quyet dinh s6 1060IQD-DHSP 0111112016 cua Hieu truong Truong Dai h9C Su pham - Dai h9C Da N8ng v~ viec ban hanli Quy dinh dao tao trinlt d(3thac sf; x« dJ nghi cua Trueing phong Phong Dao tao QUYETDJNH: Diiu Thanh l~p Hoi d6ng cham luan van th(;1cSI cua hQc vien Trinh Thj Thuy~n, lap K36.SHTN, nganh Sinh hQc thIJc nghi~m v~ d~ tai Nghien crru nhan giBng in vitro cay Sachi (Plukenetia volubilis L.), g6m cae vien co ten danh saeh kem theo Diiu H