nghiên cứu hiện đại hóa bài thuốc bạch hoa xà thiệt thảo bán chi liên có tác dụng bảo vệ gan

ỦY BAN NHÂN DÂN SỞ Y TẾ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ BỆNH VIỆN Y HỌC CỔ TRUYỀN CHƯƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP THÀNH PHỐ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU HIỆN ĐẠI HÓA BÀI THUỐC BẠCH HOA XÀ THIỆT THẢO – BÁN CHI LIÊN CÓ TÁC DỤNG BẢO VỆ GAN Cơ quan chủ trì nhiệm vụ: Bệnh viện Y học cổ truyền Chủ nhiệm nhiệm vụ: TS.DS Dương Hồng Tố Quyên Thành phố Hồ Chí Minh - 2022 ỦY BAN NHÂN DÂN SỞ Y TẾ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ BỆNH VIỆN Y HỌC CỔ TRUYỀN CHƯƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP THÀNH PHỐ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU HIỆN ĐẠI HÓA BÀI THUỐC BẠCH HOA XÀ THIỆT THẢO – BÁN CHI LIÊN CÓ TÁC DỤNG BẢO VỆ GAN Chủ nhiệm nhiệm vụ TS.DS Dương Hồng Tố Quyên Cơ quan chủ trì nhiệm vụ BS.CKII Đỗ Tân Khoa Thành phố Hồ Chí Minh - 2022 MỤC LỤC MỤC LỤC ii DANH MỤC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH xiii ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ BẠCH HOA XÀ THIỆT THẢO 1.1.1 Đặc điểm thực vật học .2 1.1.2 Thành phần hóa học 1.1.3 Tác dụng dược lý .4 1.1.4 Phương pháp định lượng kiểm nghiệm BHX 1.2 TỔNG QUAN VỀ BÁN CHI LIÊN 10 1.2.1 Đặc điểm thực vật học 10 1.2.2 Thành phần hóa học 11 1.2.3 Tác dụng dược lý 12 1.2.4 Phương pháp định tính, định lượng kiểm nghiệm BCL 14 1.3 SƠ LƯỢC TÌNH HÌNH BỆNH VỀ GAN 15 1.3.1 Các bệnh gan 15 1.3.2 Các yếu tố nguy gây bệnh cho gan 17 1.3.3 Tình hình bệnh gan Việt Nam .18 1.4 DẠNG BÀO CHẾ VIÊN NANG .19 1.5 MỘT SỐ CHẾ PHẨM CÓ THÀNH PHẦN BHX – BCL 19 1.5.1 Cellutan 20 1.5.2 Bạch liên thảo (trà hòa tan) .20 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 21 2.1.1 Nguyên liệu .21 ii 2.1.2 Động vật thí nghiệm 21 2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 21 2.2.1 Nội dung (kiểm nghiệm nguyên liệu) 21 2.2.2 Nội dung (chiết xuất cao từ dược liệu xây dựng TCCS cao chiết) 27 2.2.3 Nội dung (khảo sát liều có tác dụng bảo vệ gan cao chiết) 44 2.2.4 Nội dung (nghiên cứu bào chế sản phẩm) 47 2.2.5 Nội dung (đánh giá tính an toàn tác dụng bảo vệ gan chế phẩm) 70 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 75 3.1 NỘI DUNG (KIỂM NGHIỆM NGUYÊN LIỆU) 75 3.1.1 Kiểm nghiệm nguyên liệu BCL 75 3.1.2 Xây dựng quy trình định lượng asperulosid dược liệu BHX 76 3.1.3 Thẩm định quy trình định lượng asperulosid dược liệu BHX .80 3.1.4 Xây dựng tiêu chuẩn sở dược liệu BHX 85 3.1.5 Kiểm nghiệm dược liệu BHX 89 3.2 NỘI DUNG (CHIẾT XUẤT CAO TỪ DƯỢC LIỆU VÀ XÂY DỰNG TCCS CAO CHIẾT) 90 3.2.1 Xây dựng quy trình định lượng đồng thời asperulosid scutellarin dịch chiết BB .90 3.2.2 Thẩm định quy trình định lượng đồng thời asperulosid scutellarin dịch chiết BB .92 3.2.3 Nghiên cứu mối liên quan nhân tối ưu hóa quy trình chiết xuất dược liệu BHX BCL 98 3.2.4 Xây dựng quy trình chiết xuất .103 3.2.5 Xây dựng quy trình định lượng đồng thời asperulosid scutellarin cao BB 107 3.2.6 Thẩm định quy trình định lượng đồng thời asperulosid scutellarin cao BB .110 3.2.7 Xây dựng tiêu chuẩn sở cao BB .117 3.2.8 Thẩm định quy trình sản xuất cao BB với quy mơ từ 45 kg dược liệu 122 iii 3.3 NỘI DUNG (KHẢO SÁT LIỀU CÓ TÁC DỤNG BẢO VỆ GAN CỦA CAO CHIẾT) 127 3.3.1 Sàng lọc tác dụng bảo vệ gan cao chiết từ BHX BCL với dung môi khác .127 3.3.2 Khảo sát độc tính cấp đường uống cao BB 131 3.3.3 Khảo sát liều có tác dụng bảo vệ gan cao chiết BB 131 3.4 NỘI DUNG (NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ SẢN PHẨM) 134 3.4.1 Xây dựng công thức bào chế viên nang cứng BB 134 3.4.2 Bào chế viên nang BB quy mô 1.000 viên .139 3.4.3 Xây dựng TCCS viên nang cứng BB 141 3.4.4 Xây dựng quy trình sản xuất thử nghiệm viên nang cứng BB quy mô 14.000 viên 156 3.4.5 Thẩm định quy trình sản xuất thử nghiệm viên nang cứng BB quy mô 70.000 viên 157 3.4.6 Đánh giá độ ổn định viên nang cứng BB 175 3.5 NỘI DUNG (ĐÁNH GIÁ TÍNH AN TỒN VÀ TÁC DỤNG BẢO VỆ GAN CỦA CHẾ PHẨM) 182 3.5.1 Đánh giá độc tính cấp 182 3.5.2 Đánh giá độc tính bán trường diễn 183 3.5.3 Đánh giá tác dụng bảo vệ gan viên nang cứng BB .196 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 202 4.1 KẾT LUẬN 202 4.2 KIẾN NGHỊ .207 TÀI LIỆU THAM KHẢO 208 PHỤ LỤC 215 iv DANH MỤC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ tắt Từ nguyên Ý nghĩa tiếng Việt AcCN Acetonitrile Acetonitril ALT Alamine aminotransferase Alamine aminotransferase AS asperulosid Chuẩn asperulosid AST Aspartate aminotransferase Aspartate aminotransferase BB BHX – BCL Cao chiết nước từ dược liệu BHX BCL DĐVN Dược điển Việt Nam Dược điển Việt Nam EtOAc Ethyl acetate Ethyl acetat EtOH Ethanol Ethanol GSH Glutathione Glutathion HPLC High performance liquid chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao MDA Malonyl dialdehyde Malonyl dialdehyde MeOH Methanol Methanol PDA Photodiode Array Dãy diod quang SC scutellarin Chuẩn scutellarin SKLM Sắc ký lớp mỏng Sắc ký lớp mỏng TLTK Tài liệu tham khảo Tài liệu tham khảo BHX Bạch hoa xà thiệt thảo Dược liệu Bạch hoa xà thiệt thảo BCL Bán chi liên Dược liệu Bán chi liên v DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Chương trình gradient định lượng asperulosid BHX theo Dược điển Hong Kong Bảng 1.2 Các nghiên cứu định lượng hoạt chất BHX Bảng 2.3 Tiến hành sắc ký theo điều kiện dung môi 23 Bảng 2.4 Nồng độ chuẩn asperulosid khảo sát tính tuyến tính 25 Bảng 2.5 Độ lặp lại độ hồi phục chấp nhận nồng độ khác 26 Bảng 2.6 Các điều kiện sắc ký khảo sát quy trình định lượng asperulosid scutellarin dịch chiết BB 28 Bảng 2.7 Nồng độ chuẩn asperulosid scutellarin khảo sát tính tuyến tính 30 Bảng 2.8 Ý nghĩa mức biến 31 Bảng 2.9 Đánh giá quy trình chiết xuất cao BB quy mơ kg dược liệu 34 Bảng 2.10 Nồng độ chuẩn asperulosid scutellarin khảo sát tính tuyến tính 38 Bảng 2.11 Thiết bị sản xuất 42 Bảng 2.12 Thiết bị phân tích 42 Bảng 2.13 Kế hoạch lấy mẫu yêu cầu tiêu chuẩn 43 Bảng 2.14 Bố trí thử nghiệm tác dụng bảo vệ gan mẫu thử (TN1) 45 Bảng 2.15 Bố trí thử nghiệm tác dụng bảo vệ gan mẫu thử (TN2) 47 Bảng 2.16 Thành phần công thức khảo sát lựa chọn tỷ lệ tá dược độn 51 Bảng 2.17 Các mức đánh giá khả chảy bột 52 Bảng 2.18 Các điều kiện sắc ký khảo sát quy trình định lượng asperulosid scutellarin viên nang BB 54 Bảng 2.19 Nồng độ chuẩn asperulosid scutellarin khảo sát tính tuyến tính 55 Bảng 2.20 Thăm dị thơng số thiết bị quy trình sản xuất, đánh giá thơng số lưu tính cốm tính chất viên nang sản xuất quy mô 14.000 viên 57 Bảng 2.21 Danh mục thiết bị sản xuất 57 Bảng 2.22 Danh mục máy móc thiết bị dùng phân tích 58 Bảng 2.23 Thơng số công đoạn trộn khô trộn ướt 60 Bảng 2.24 Thông số công đoạn sấy cốm 60 vi Bảng 2.25 Thiết bị dùng sản xuất 64 Bảng 2.26 Thiết bị dùng phân tích 64 Bảng 2.27 Giai đoạn trọng yếu thông số quan trọng 65 Bảng 2.28 Thăm dị thơng số q trình thẩm định viên nang cứng BB quy mô 70.000 viên 66 Bảng 2.29 Bố trí thử viên nang cứng BB thực nghiệm paracetamol 72 Bảng 2.30 Bố trí thử sản phẩm thực nghiệm ethanol 73 Bảng 3.31 Kết kiểm nghiệm dược liệu BCL (toàn - Herba Scutellariae barbatae) 75 Bảng 3.32 Lượng asperulosid chiết với tỷ lệ khối lượng dược liệu BHX : thể tích methanol khảo sát 78 Bảng 3.33 Chương trình pha động định lượng asperulosid dược liệu BHX 79 Bảng 3.34 Tính tương thích hệ thống quy trình định lượng asperulosid dược liệu BHX 80 Bảng 3.35 Tính tuyến tính quy trình định lượng asperulosid dược liệu BHX 82 Bảng 3.36 Kết xử lý thống kê khảo sát tính tuyến tính quy trình định lượng asperulosid dược liệu BHX 82 Bảng 3.37 Độ lặp lại qui trình định lượng asperulosid dược liệu BHX 83 Bảng 3.38 Độ quy trình định lượng asperulosid dược liệu BHX 84 Bảng 3.39 Hàm lượng asperulosid dược liệu BHX 85 Bảng 3.40 Kết kiểm nghiệm dược liệu BHX (toàn – Hedyotis diffusa) 89 Bảng 3.41 Tính tương thích hệ thống quy trình định lượng asperulosid scutellarin dịch chiết BB 93 Bảng 3.42 Tính tuyến tính quy trình định lượng asperulosid scutellarin dịch chiết BB 95 Bảng 3.43 Kết xử lý thống kê khảo sát tính tuyến tính định lượng asperulosid dịch chiết BB 95 Bảng 3.44 Kết xử lý thống kê khảo sát tính tuyến tính định lượng scutellarin dịch chiết BB 96 vii Bảng 3.45 Độ lặp lại quy trình định lượng đồng thời asperulosid scutellarin dịch chiết BB 97 Bảng 3.46 Độ quy trình định lượng đồng thời asperulosid scutellarin dịch chiết BB 97 Bảng 3.47 Kết thực nghiệm 99 Bảng 3.48 Tương quan hồi quy phương pháp tối ưu hóa 100 Bảng 3.49 Điều kiện chiết xuất tối ưu giá trị dự đoán biến Y 102 Bảng 3.50 So sánh kết dự đoán thực nghiệm kiểm chứng (n=3) 103 Bảng 3.51 Khảo sát thông số kiểm sốt chất lượng q trình chiết xuất cao BB 103 Bảng 3.52 Thông số quy trình chiết xuất cao BB 105 Bảng 3.53 Thơng số quy trình dịch chiết BB 105 Bảng 3.54 Hàm lượng asperulosid scutellarin chiết với thời gian chiết siêu âm khác 109 Bảng 3.55 Hàm lượng asperulosid scutellarin chiết với tỷ lệ khối lượng cao BB : thể tích methanol khảo sát 109 Bảng 3.56 Tính tương thích hệ thống quy trình định lượng asperulosid scutellarin cao BB 111 Bảng 3.57 Tính tuyến tính quy trình định lượng asperulosid scutellarin cao BB 113 Bảng 3.58 Kết xử lý thống kê khảo sát tính tuyến tính quy trình định lượng asperulosid cao BB 114 Bảng 3.59 Kết xử lý thống kê khảo sát tính tuyến tính quy trình định lượng scutellarin cao BB 114 Bảng 3.60 Độ lặp lại qui trình định lượng asperulosid scutellarin cao BB 115 Bảng 3.61 Độ quy trình định lượng asperulosid scutellarin cao BB 116 Bảng 3.62 Kết độ ẩm cao BB 117 Bảng 3.63 Kết kim loại nặng cao BB 117 Bảng 3.64 Giới hạn nhiễm khuẩn lô cao BB 118 viii Bảng 3.65 Dư lượng hóa chất BVTV lơ cao BB 119 Bảng 3.66 Chất chiết với tỷ lệ khối lượng cao BB : thể tích methanol khảo sát 120 Bảng 3.67 Chất chiết lô cao BB 121 Bảng 3.68 Hàm lượng asperulosid scutellarin lô cao BB 121 Bảng 3.69 Tóm tắt TCCS cao BB 122 Bảng 3.70 Kết đánh giá thơng số quan trọng q trình chiết xuất 123 Bảng 3.71 Kết độ ẩm lô thẩm định 124 Bảng 3.72 Kết giới hạn kim loại nặng 124 Bảng 3.73 Kết giới hạn nhiễm khuẩn lô thẩm định 125 Bảng 3.74 Kết chất chiết methanol lô thẩm định 126 Bảng 3.75 Kết định lượng lô thẩm định 126 Bảng 3.76 Hoạt độ AST ALT huyết tương chuột 128 Bảng 3.77 Hàm lượng MDA GSH gan chuột 129 Bảng 3.78 Tổng hợp kết tác dụng bảo vệ gan mẫu thử 130 Bảng 3.79 Kết khảo sát độc tính cấp đường uống cao BB 131 Bảng 3.80 Hoạt độ AST ALT huyết tương chuột (TN2) 132 Bảng 3.81 Hàm lượng MDA GSH gan chuột (TN2) 132 Bảng 3.82 Tổng hợp kết tác dụng bảo vệ gan mẫu thử (TN2) 133 Bảng 3.83 Kết đánh giá khả hút cao BB tá dược hút (n=3) 135 Bảng 3.84 Thành phần công thức khảo sát lựa chọn tỷ lệ tá dược CSD sử dụng 135 Bảng 3.85 Kết khảo sát hàm lượng tá dược hút (n = 3) 136 Bảng 3.86 Thành phần công thức khảo sát tỷ lệ tá dược độn 136 Bảng 3.87 Kết khảo sát lựa chọn tỷ lệ tá dược độn (n = 3) 137 Bảng 3.88 Thành phần công thức khảo sát lựa chọn tá dược rã 138 Bảng 3.89 Thời gian rã viên nang m (n = 6) 138 Bảng 3.90 Thành phần công thức cho viên nang 139 Bảng 3.91 Công thức nguyên liệu lô thử nghiệm 1.000 viên 139 ix C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ lục 58 Kết chất chiết lô thời điểm sau tháng bảo quản điều kiện già hóa cấp tốc Chất chiết methanol (%) Viên Lô 030921 Lô 040921 Lô 050921 14,77 14,83 14,23 14,09 14,96 14,47 15,21 13,97 15,02 Trung bình 14,69 14,59 14,57 SD 0,56 0,54 0,41 Phụ lục 59 Kết chất chiết lô thời điểm sau tháng bảo quản điều kiện già hóa cấp tốc Chất chiết methanol (%) Viên Lô 030921 Lô 040921 Lô 050921 14,26 14,55 14,33 14,73 15,09 14,24 14,66 15,14 14,98 Trung bình 14,55 14,93 14,52 SD 0,25 0,33 0,40 PL.75 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ lục 60 Kết định tính viên nang cứng BB sau tháng bao quản điều kiện thực lơ Hình Sắc ký đồ SKLM định tính asperulosid viên nang cứng BB sau 1, tháng bảo quản điều kiện thực lô Bản mỏng: Silica gel 60 F254 Hệ dung môi: Cloroform – methanol – nước (65:35:10, lớp dưới) Phát hiện: H2SO4 10%/EtOH sấy 105 oC Asp: Chất đối chiếu asperulosid; 0,1,3,6: 0, 1, tháng bảo quản điều kiện thực Hình Sắc ký đồ SKLM định tính scutellarin viên nang cứng BB sau 1, tháng bảo quản điều kiện thực lô Bản mỏng: Silica gel 60 F254 Hệ dung môi: Ethyl acetat – nước – acid acetic (7:1:2) Phát hiện: Soi UV 254 nm Scu: Chất đối chiếu scutellarin 0,1,3,6: 0, 1, tháng bảo quản điều kiện thực PL.76 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ lục 61 Kết định tính viên nang cứng BB sau tháng bao quản điều kiện thực lơ Hình Sắc ký đồ SKLM định tính asperulosid viên nang cứng BB sau 1, tháng bảo quản điều kiện thực lô Bản mỏng: Silica gel 60 F254 Hệ dung môi: Cloroform – methanol – nước (65:35:10, lớp dưới) Phát hiện: H2SO4 10%/EtOH sấy 105 oC Asp: Chất đối chiếu asperulosid; 0,1,3,6: 0, 1, tháng bảo quản điều kiện thực Hình Sắc ký đồ SKLM định tính scutellarin viên nang cứng BB sau 1, tháng bảo quản điều kiện thực lô Bản mỏng: Silica gel 60 F254 Hệ dung môi: Ethyl acetat – nước – acid acetic (7:1:2) Phát hiện: Soi UV 254 nm Scu: Chất đối chiếu scutellarin 0,1,3,6: 0, 1, tháng bảo quản điều kiện thực PL.77 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ lục 62 Kết định tính viên nang cứng BB sau tháng bao quản điều kiện thực lô Hình Sắc ký đồ SKLM định tính asperulosid viên nang cứng BB sau 1, tháng bảo quản điều kiện thực lô Bản mỏng: Silica gel 60 F254 Hệ dung môi: Cloroform – methanol – nước (65:35:10, lớp dưới) Phát hiện: H2SO4 10%/EtOH sấy 105 oC Asp: Chất đối chiếu asperulosid; 0,1,3,6: 0, 1, tháng bảo quản điều kiện thực Hình Sắc ký đồ SKLM định tính scutellarin viên nang cứng BB sau 1, tháng bảo quản điều kiện thực lô Bản mỏng: Silica gel 60 F254 Hệ dung môi: Ethyl acetat – nước – acid acetic (7:1:2) Phát hiện: Soi UV 254 nm Scu: Chất đối chiếu scutellarin 0,1,3,6: 0, 1, tháng bảo quản điều kiện thực PL.78 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ lục 63 Kết định tính viên nang cứng BB sau tháng bao quản điều kiện già hóa cấp tốc lơ Hình Sắc ký đồ SKLM định tính asperulosid viên nang cứng BB sau 1, tháng bảo quản điều kiện già hóa cấp tốc lơ Bản mỏng: Silica gel 60 F254 Hệ dung môi: Cloroform – methanol – nước (65:35:10, lớp dưới) Phát hiện: H2SO4 10%/EtOH sấy 105 oC Asp: Chất đối chiếu asperulosid; 0,1,3,6: 0, 1, tháng bảo quản điều kiện thực Hình Sắc ký đồ SKLM định tính scutellarin viên nang cứng BB sau 1, tháng bảo quản điều kiện già hóa cấp tốc lơ Bản mỏng: Silica gel 60 F254 Hệ dung môi: Ethyl acetat – nước – acid acetic (7:1:2) Phát hiện: Soi UV 254 nm Scu: Chất đối chiếu scutellarin 0,1,3,6: 0, 1, tháng bảo quản điều kiện thực PL.79 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ lục 64 Kết định tính viên nang cứng BB sau tháng bao quản điều kiện già hóa cấp tốc lơ Hình Sắc ký đồ SKLM định tính asperulosid viên nang cứng BB sau 1, tháng bảo quản điều kiện già hóa cấp tốc lơ Bản mỏng: Silica gel 60 F254 Hệ dung môi: Cloroform – methanol – nước (65:35:10, lớp dưới) Phát hiện: H2SO4 10%/EtOH sấy 105 oC Asp: Chất đối chiếu asperulosid; 0,1,3,6: 0, 1, tháng bảo quản điều kiện thực Hình Sắc ký đồ SKLM định tính scutellarin viên nang cứng BB sau 1, tháng bảo quản điều kiện già hóa cấp tốc lơ Bản mỏng: Silica gel 60 F254 Hệ dung môi: Ethyl acetat – nước – acid acetic (7:1:2) Phát hiện: Soi UV 254 nm Scu: Chất đối chiếu scutellarin 0,1,3,6: 0, 1, tháng bảo quản điều kiện thực PL.80 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ lục 65 Kết định tính viên nang cứng BB sau tháng bao quản điều kiện già hóa cấp tốc lơ Hình Sắc ký đồ SKLM định tính asperulosid viên nang cứng BB sau 1, tháng bảo quản điều kiện già hóa cấp tốc lơ Bản mỏng: Silica gel 60 F254 Hệ dung môi: Cloroform – methanol – nước (65:35:10, lớp dưới) Phát hiện: H2SO4 10%/EtOH sấy 105 oC Asp: Chất đối chiếu asperulosid; 0,1,3,6: 0, 1, tháng bảo quản điều kiện thực Hình Sắc ký đồ SKLM định tính scutellarin viên nang cứng BB sau 1, tháng bảo quản điều kiện già hóa cấp tốc lơ Bản mỏng: Silica gel 60 F254 Hệ dung môi: Ethyl acetat – nước – acid acetic (7:1:2) Phát hiện: Soi UV 254 nm Scu: Chất đối chiếu scutellarin 0,1,3,6: 0, 1, tháng bảo quản điều kiện thực PL.81 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ lục 66 Kết định lượng đồng thời asperulosid scutellarin lô viên nang cứng bảo quản điều kiện thực Asperulosid (%) Tháng Scutellarin (%) Lô 030921 0,0423 Lô 040921 0,0423 Lô 050921 0,0430 Lô 030921 0,2223 Lô 040921 0,2167 Lô 050921 0,2231 0,0430 0,0420 0,0431 0,2230 0,2158 0,2224 0,0425 0,0420 0,0428 0,2233 0,2160 0,2209 TB 0,0426 0,0421 0,0429 0,2229 0,2162 0,2221 SD 0,0004 0,0002 0,0002 0,0005 0,0005 0,0011 0,0425 0,0420 0,0431 0,2222 0,2158 0,2213 0,0423 0,0419 0,0425 0,2217 0,2142 0,2206 0,0426 0,0422 0,0429 0,2217 0,2156 0,2218 TB 0,0425 0,0420 0,0428 0,2219 0,2152 0,2212 SD 0,0001 0,0002 0,0003 0,0003 0,0009 0,0006 0,0423 0,0417 0,0426 0,2209 0,2141 0,2189 0,0423 0,0423 0,0429 0,2209 0,2152 0,2219 0,0425 0,0419 0,0428 0,2217 0,2149 0,2209 TB 0,0424 0,0420 0,0428 0,2212 0,2147 0,2206 SD 0,0001 0,0003 0,0002 0,0004 0,0006 0,0015 0,0423 0,0417 0,0427 0,2200 0,2143 0,2200 0,0423 0,0421 0,0426 0,2208 0,2152 0,2199 0,0427 0,0423 0,0428 0,2227 0,2144 0,2217 TB 0,0424 0,0420 0,0427 0,2211 0,2146 0,2205 SD 0,0002 0,0003 0,0001 0,0014 0,0004 0,0010 STT PL.82 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ lục 67 Kết định lượng đồng thời asperulosid scutellarin lô viên nang cứng bảo quản điều kiện già hóa cấp tốc Asperulosid Tháng Scutellarin Lô 030921 0,0432 Lô 040921 0,0423 Lô 050921 0,0430 Lô 030921 0,2236 Lô 040921 0,2143 Lô 050921 0,2216 0,0439 0,0420 0,0425 0,2244 0,2151 0,2198 0,0429 0,0419 0,0434 0,2210 0,2148 0,2232 TB 0,0434 0,0421 0,0430 0,2230 0,2147 0,2215 SD 0,0005 0,0002 0,0005 0,0018 0,0004 0,0017 0,0435 0,0414 0,0428 0,2223 0,2105 0,2178 0,0434 0,0419 0,0433 0,2210 0,2142 0,2201 0,0427 0,0423 0,0426 0,2175 0,2121 0,2173 TB 0,0432 0,0418 0,0429 0,2203 0,2122 0,2184 SD 0,0004 0,0004 0,0004 0,0025 0,0018 0,0015 0,0416 0,0411 0,0407 0,2136 0,2105 0,2135 0,0426 0,0412 0,0416 0,2180 0,2091 0,2176 0,0421 0,0412 0,0413 0,2192 0,2103 0,2173 TB 0,0421 0,0412 0,0412 0,2169 0,2100 0,2161 SD 0,0005 0,0001 0,0004 0,0029 0,0007 0,0023 0,0398 0,0385 0,0397 0,2146 0,2049 0,2133 0,0402 0,0395 0,0397 0,2164 0,2102 0,2140 0,0399 0,0387 0,0408 0,2155 0,2061 0,2199 TB 0,0400 0,0389 0,0401 0,2155 0,2071 0,2157 SD 0,0002 0,0006 0,0006 0,0009 0,0028 0,0036 STT PL.83 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ lục 68 Kết tính tốn tuổi thọ sản phẩm chất đối chiếu bảo quản sau tháng điệu kiện già hóa cấp tốc Lơ 030921 (asperulosid) Thời gian T (ngày) 30 90 180 Do (%) D(%) log(D/Do) Kt=-2,303log (D/Do)/t 99,6075377 97,0732627 92,1621033 -0,0017078 -0,0129004 -0,0354476 0,0001311 0,0003301 0,0004535 Hàm lượng (%) Kt Giá trị thống kê 100 Thời gian T (ngày) 100 30 99,6075377 0,0001311 90 97,0732627 0,0003301 180 92,1621033 0,0004535 0,0003049 T90 (40 oC) = 0,1053/K T90 (30 oC) = k x T90 (40 o C) Ngày Tháng 345,3437952 11,5114598 23,0229197 Bào chế ngày Bắt đầu thử độ ổn Co= ngày = 0,2 03/09/2021 định 10/09/2021 tháng Tuổi (tháng) thọ 0,2 23,22 PL.84 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn t1 = 40 oC t2 = 30 oC Delta t =10 oC delta t/10 = k tra bảng = C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Lô 040921 (asperulosid) Thời gian T (ngày) D(%) log(D/Do) Kt=-2,303log (D/Do)/t 99,4417629 97,8521686 92,4810873 -0,0024312 -0,0094295 -0,0339471 0,0001866 0,0002413 0,0004343 Thời gian T (ngày) Hàm lượng (%) Kt Giá trị thống kê 100 30 99,4417629 0,0001866 90 97,8521686 0,0002413 180 92,4810873 0,0004343 30 90 180 Do (%) 100 0,0002874 Ngày Tháng 366,3630199 12,2121007 o T90 (40 C) = 0,1053/K T90 (30 oC) = k x T90 (40 o C) 24,4242013 Bào chế ngày Bắt đầu thử độ ổn Co = ngày = 0,2 04/09/2021 định 11/09/2021 tháng Tuổi (tháng) thọ 0,2 24,56 PL.85 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn t1 = 40 oC t2 = 30 oC Delta t =10 oC delta t/10 = k tra bảng = C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Lô 050921 (asperulosid) Thời gian T (ngày) D(%) log(D/Do) Kt=-2,303log (D/Do)/t 99,8824878 95,8354637 93,2673841 -0,0005106 -0,0184738 -0,0302702 0,0000392 0,0004727 0,0003873 Thời gian T (ngày) Hàm lượng (%) Kt Giá trị thống kê 100 30 99,8824878 0,0000392 90 95,8354637 0,0004727 180 93,2673841 0,0003873 30 90 180 Do (%) 100 0,0002997 Ngày Tháng 351,3067940 11,7102265 o T90 (40 C) = 0,1053/K T90 (30 oC) = k x T90 (40 o C) 23,4204529 Bào chế ngày Bắt đầu thử độ ổn Co = ngày = 0,2 05/09/2021 định 12/09/2021 tháng Tuổi (tháng) thọ 0,2 23,49 PL.86 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn t1 = 40 oC t2 = 30 oC Delta t =10 oC delta t/10 = k tra bảng = C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Lô 030921 (scutellarin) Thời gian T (ngày) D(%) log(D/Do) Kt=-2,303log (D/Do)/t 98,7684740 97,2720028 96,6210365 -0,0053817 -0,0120121 -0,0149283 0,0004131 0,0003074 0,0001910 Thời gian T (ngày) Hàm lượng (%) Kt Giá trị thống kê 100 30 98,7684740 0,0004131 90 97,2720028 0,0003074 180 96,6210365 0,0001910 30 90 180 Do (%) 100 0,0003038 Ngày Tháng 346,5683267 11,5522776 o T90 (40 C) = 0,1053/K T90 (30 oC) = k x T90 (40 o C) 23,1045551 Bào chế ngày Bắt đầu thử độ ổn Co = ngày = 0,2 03/09/2021 định 10/09/2021 tháng Tuổi (tháng) thọ 0,2 23,30 PL.87 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn t1 = 40 oC t2 = 30 oC Delta t =10 oC delta t/10 = k tra bảng = C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Lô 040921 (scutellarin) Thời gian T (ngày) D(%) log(D/Do) Kt=-2,303log (D/Do)/t 98,8351298 97,7756353 96,4312359 -0,0050887 -0,0097694 -0,0157823 0,0003906 0,0002500 0,0002019 Thời gian T (ngày) Hàm lượng (%) Kt Giá trị thống kê 100 30 98,8351298 0,0003906 90 97,7756353 0,0002500 180 96,4312359 0,0002019 30 90 180 Do (%) 100 0,0002809 Ngày Tháng 374,9323745 12,4977458 o T90 (40 C) = 0,1053/K T90 (30 oC) = k x T90 (40 o C) 24,9954916 Bào chế ngày Bắt đầu thử độ ổn Co = ngày = 0,2 04/09/2021 định 11/09/2021 tháng Tuổi (tháng) thọ 0,2 25,13 PL.88 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn t1 = 40 oC t2 = 30 oC Delta t =10 oC delta t/10 = k tra bảng = C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn