Chuyên đề «Cải tiến sản lượng Cephalosporin C bằng ADN tái tổ hợp được hợp nhất trong Acremonium chrysogenum» CHUYÊN ĐỀ «CẢI TIẾN SẢN LƯỢNG CEPHALOSPORIN C BẰNG ADN TÁI TỔ HỢP ĐƯỢC HỢP NHẤT TRONG ACRE[.]
CHUYÊN ĐỀ: «CẢI TIẾN SẢN LƯỢNG CEPHALOSPORIN C BẰNG ADN TÁI TỔ HỢP ĐƯỢC HỢP NHẤT TRONG ACREMONIUM CHRYSOGENUM» Giáo viên hướng dẫn: Nguyễn Thị Minh Hằng Nhóm sinh viên thực hiện: Nguyễn Thị Kim Liên Nguyễn Thị Huyền Cấn Đỗ Tuần Hồng Tiến Qun Trần Đức Tài «CẢI TIẾN SẢN LƯỢNG CEPHALOSPORIN C BẰNG ADN TÁI TỔ HỢP ĐƯỢC HỢP NHẤT TRONG ACREMONIUM CHRYSOGENUM» Đặt vấn đề Tổng quan Nội dung phương pháp Kết luận I ĐẶT VẤN ĐỀ Kháng sinh nhóm thuốc sử dụng phổ biến y học điều trị bệnh viêm nhiễm vi sinh vật gây Cephalosporin C (CPC) thuộc nhóm βlactam, kháng sinh bán tổng hợp sử dụng rộng rãi CPC sản xuất quy trình lên men truyền thống quy mô công nghiệp nhờ chủng nấm mốc Acremonium chrysogenum tự nhiên suất chưa cao Áp dụng kĩ thuật di truyền cải thiện quy trình tìm kiếm chủng cho sản lượng cao Từ cho phép tạo chủng nấm Acremonium chrysogenum mang ADN tái tổ hợp cho sản lượng kháng sinh cao quy trình sản xuất Các gen hợp chủng Acremonium chrysogenum gen quan trọng đường sinh tổng hợp CPC: cefEF, cefG ,vgb II TỔNG QUAN Sơ lược phát kháng sinh Nấm mốc Acremonium chrysogenum Con đường sinh tổng hợp CPC SƠ LƯỢC VỀ SỰ PHÁT HIỆN KHÁNG SINH Hiện tượng kìm hãm khả gây bệnh vi khuẩn Bacillus anthracis (Pasteur Joubert, 1877) 1 chế phẩm tách từ nấm mốc dùng để điều trị bệnh truyền nhiễm da cầu khuẩn gây (Gratia đồng nghiệp, 1925) SƠ LƯỢC VỀ SỰ PHÁT HIỆN KHÁNG SINH 1929, Fleming mô tả chi tiết chất kháng sinh báo cáo Penicillin Trong chiến tranh giới thứ II, kháng sinh dùng để điều trị bệnh cho người bị thương với số lượng lớn Các nhà khoa học nhận thấy không vi sinh vật mà thực vật, động vật có khả sinh kháng sinh SƠ LƯỢC VỀ SỰ PHÁT HIỆN KHÁNG SINH Từ thực tế đó, Glasby(1976) đưa định nghĩa chất kháng sinh: “ Một chất kháng sinh hợp chất tổng hợp ta từ thể sống ức chế trình sống vi sinh vật nồng độ thấp” Trong số kháng sinh nhóm β-lactam sử dụng nhiều phổ biến Các Cephalosporin C kháng sinh bán tổng hợp thuộc nhóm β-lactam sử dụng rộng rãi phổ kháng khuẩn rộng độc với người SƠ LƯỢC VỀ KHÁNG SINH Cephalosporin C gồm hệ 1,2,3,4 Trong sử dụng nhiều CPC hệ 1,2,3 hệ sử dụng hạn chế Chủng vi nấm sử dụng để sản xuất CPC công nghiệp Acremonium chrysogenum (Cephalosporium acremonium) NẤM MỐC ACREMONIUM CHRYSOGENUM Acremonium chrysogenum dùng chủ yếu để sản xuất CPC quy mô công nghiệp Cephalosporium chi thuộc nấm bất toàn (Deuteromycetes) Căn vào đặc điểm sinh sản hữu tính, thấy nấm thuộc chi Emericellopis chi nấm túi (Ascomycetes).Chi có tên khác Peyronellula Saturnomycetes III NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP Tạo chủng Acremonium chrysogenum mang ADN tái tổ hợp Quy trình sản xuất CPC Tối ưu hóa điều kiện lên men chủng A.chrysogenum mang gen tái tổ hợp TẠO CHỦNG ACREMONIUM CHRYSOGENUM MANG ADN TÁI TỔ HỢP Bước 1: Tách ADN tổng số từ khuẩn ty nấm Acremonium chrysogenum phương pháp tách chiết ADN Bước 2: Nhân dòng cefEF, cefG kĩ thuật PCR Bước 3: Tạo chủng Acremonium chrysogenum tái tổ hợp Bước 4: Kiểm tra chủng biến nạp kĩ thuật lai Southern QUY TRÌNH SẢN XUẤT CPC Phân lập, tuyển chọn ↓ Bảo quản hoạt hóa giống ↓ Lên men sản xuất ↓ Tách chiết tinh ↓ Thu sản phẩm PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN CHỦNG GIỐNG Thu nhận mẫu từ đất, nước, bùn Sử dụng YPS môi trường thạch – glucose – khoai tây bổ sung Cephalosporin C (CPC) nhằm ức chế chủng nấm vi khuẩn khác khơng có khả kháng lại kháng sinh Mơi trường có mọc khuẩn lạc nấm mốc dạng Cephalosporium tách Kiểm tra hoạt tính phương pháp cục thạch nghiên cứu đặc điểm sinh học chủng có hoạt tính ...? ?C? ??I TIẾN SẢN LƯỢNG CEPHALOSPORIN C BẰNG ADN TÁI TỔ HỢP ĐƯ? ?C HỢP NHẤT TRONG ACREMONIUM CHRYSOGENUM? ? Đặt vấn đề Tổng quan Nội dung phương pháp Kết luận I ĐẶT VẤN ĐỀ Kháng sinh nhóm thu? ?c sử... hạn chế Chủng vi nấm sử dụng để sản xuất CPC c? ?ng nghiệp Acremonium chrysogenum (Cephalosporium acremonium) NẤM M? ?C ACREMONIUM CHRYSOGENUM Acremonium chrysogenum dùng chủ yếu để sản xuất CPC... mang ADN tái tổ hợp Quy trình sản xuất CPC Tối ưu hóa điều kiện lên men chủng A .chrysogenum mang gen tái tổ hợp TẠO CHỦNG ACREMONIUM CHRYSOGENUM MANG ADN TÁI TỔ HỢP Bư? ?c 1: Tách ADN tổng