ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC HOÀNG NGỌC TRUYỀN NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG ỨC CHẾ TẾ BÀO UNG THƯ CỦA NANO BẠC TỔNG HỢP TỪ DỊCH CHIẾT CÂY ĐU ĐỦ RỪNG TREVESIA PALMATA LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC ỨN[.]
ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC HOÀNG NGỌC TRUYỀN NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG ỨC CHẾ TẾ BÀO UNG THƯ CỦA NANO BẠC TỔNG HỢP TỪ DỊCH CHIẾT CÂY ĐU ĐỦ RỪNG TREVESIA PALMATA LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC ỨNG DỤNG THÁI NGUYÊN – 2020 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC HOÀNG NGỌC TRUYỀN NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG ỨC CHẾ TẾ BÀO UNG THƯ CỦA NANO BẠC TỔNG HỢP TỪ DỊCH CHIẾT CÂY ĐU ĐỦ RỪNG TREVESIA PALMATA Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Mã số: 84 20 201 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG Người hướng dẫn khoa học: TS Lê Thị Thanh Hương THÁI NGUYÊN – 2020 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết trình bày luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình Mọi kết thu không chỉnh sửa chép từ nghiên cứu khác Mọi trích dẫn luận văn ghi rõ nguồn gốc Tác giả Hoàng Ngọc Truyền ii LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình học tập thực đề tài luận văn thạc sĩ chuyên ngành Công nghệ Sinh học - Trường Đại học Khoa học Thái Nguyên, em nhận ủng hộ, giúp đỡ thầy cô giáo, bạn bè gia đình! Trước tiên, em xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến Cơ giáo - TS Lê Thị Thanh Hương - người tận tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm q báu để em hồn thành luận văn Em xin chân thành cảm ơn TS Nguyễn Phú Hùng, Trưởng khoa Công nghệ Sinh học, trường Đại học Khoa học Thái Nguyên hướng dẫn, bảo cho em thực thí nghiệm đánh giá mức độ biểu gen phức hệ nano bạc dòng tế bào ung thư dày MKN45 Em xin chân thành cảm ơn TS Nguyễn Văn Hảo, Giảng viên khoa Vật lý Công nghệ, trường Đại học Khoa học Thái Nguyên giúp đỡ em công việc điều chế phức hệ nano bạc - dịch chiết Đu đủ rừng Em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến thầy, cô giáo khoa Công nghệ Sinh học, trường Đại học Khoa học phận đào tạo Sau Đại học - Đại học Khoa học Thái Nguyên, Phịng Thí nghiệm Y sinh - Khoa Cơng nghệ Sinh học trường Đại học Khoa học Thái Nguyên giúp đỡ em suốt trình học tập nghiên cứu Cuối cùng, em xin bày tỏ lòng biết ơn tới tồn thể gia đình, bạn bè đồng nghiệp cổ vũ, động viên em suốt thời gian qua! Em xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, tháng năm 2020 Tác giả Hoàng Ngọc Truyền iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC HÌNH vii DANH MỤC BẢNG vii MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục tiêu đề tài Nội dung nghiên cứu CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Khái quát Đu đủ rừng 1.1.1 Đặc điểm phân loại 1.1.2 Thành phần hóa học 1.1.3 Công dụng Đu đủ rừng 1.2 Nano bạc, phương pháp tổng hợp ứng dụng 1.2.1 Khái quát nano bạc 1.2.2 Các phương pháp tổng hợp nano bạc 1.2.3 Vai trò nano bạc tạo phương pháp tổng hợp xanh y học 1.3 Khái quát ung thư ung thư dày 10 1.3.1 Khái quát ung thư 10 1.3.2 Ung thư dày 10 1.4 Apoptosis 14 1.4.1 Giới thiệu 14 1.4.2 Apoptosis ung thư 15 1.4.3 Trị liệu apoptosis ung thư 17 1.5 Gốc oxy hóa tự ROS 17 1.5.1 Giới thiệu 17 1.5.2 Hệ thống oxy hóa thể 18 1.5.3 Trạng thái stress oxy hóa 19 1.5.4 AgNP gây ROS ung thư 19 iv 1.6 Realtime PCR 21 1.6.1 Giới thiệu 21 1.6.2 Realtime RT-PCR 23 1.6.3 Định lượng tương đối nghiên cứu biểu gen 24 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 Đối tượng vật liệu nghiên cứu 26 2.2 Hóa chất thiết bị nghiên cứu 26 2.3 Thời gian địa điểm nghiên cứu 26 2.4 Phương pháp nghiên cứu 27 2.4.1 Phương pháp thu thập định loại 27 2.4.2 Phương pháp xử lý thu dịch chiết Đu đủ rừng 27 2.4.3 Phương pháp tổng hợp phức hệ AgNPs-TrP 27 2.4.4 Xác định tính chất lý hóa AgNPs-TrP 28 2.4.5 Các phương pháp phân tích đặc tính sinh học chống ung thư phức hệ AgNPs-TrP 29 2.4.6 Phân tích thống kê 31 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 32 3.1 Kết thu thập, xử lý mẫu 32 3.1.1 Thu thập mẫu xác định tên khoa học Đu đủ rừng 32 3.1.2 Kết thu dịch chiết 32 3.2 Tổng hợp xác định tính chất lý hóa phức hệ AgNPs-TrP 32 3.2.1 Tổng hợp phức hệ AgNPs-TrP 32 3.2.2 Phân tích phổ UV-Vis 33 3.2.3 Phân tích nhiễu xạ tia X (XRD) phổ hồng ngoại biến đổi chuỗi Fourier FT-IR 35 3.2.4 Phân tích hình dạng, kích thước kính hiển vi điện tử truyền qua TEM 37 3.3 Ảnh hưởng phức hệ AgNPs-TrP lên tăng sinh tế bào ung thư dày MKN45 38 3.4 Ảnh hưởng phức hệ AgNPs-TrP lên sản sinh gốc oxy hóa tự (ROS) tế bào ung thư 39 v 3.5 Ảnh hưởng phức hệ AgNPs-TrP lên biểu gen liên quan tới sản sinh gốc tự (ROS) 41 3.6 Ảnh hưởng phức hệ AgNPs-TrP lên biểu gen liên quan tới chết tế bào theo chương trình apoptosis 44 3.6.1 Tác động phức hệ AgNPs-TrP lên biểu gen Caspase 8, Caspase khởi động apoptosis 44 3.6.2 Tác động phức hệ AgNPs-TrP lên biểu gen Caspase 3, Caspase thực thi apoptosis 45 3.6.3 Tác động phức hệ AgNPs-TrP lên biểu gen ức chế apoptosis BCL2 47 3.7 Ảnh hưởng phức hệ AgNPs-TrP lên biểu gen liên quan tới khả chống oxy hóa tế bào 52 3.7.1 Tác động phức hệ AgNPs-TrP lên biểu enzyme xúc tác loại bỏ gốc tự superoxyde 48 3.7.2 Tác động phức hệ AgNPs-TrP lên biểu enzyme giải độc aldehyd 50 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 51 KẾT LUẬN 51 KIẾN NGHỊ 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO 53 vi CHỮ VIẾT TẮT AgNPs Silver nanoparticles – Các hạt nano bạc AgNPs-TrP Silver nanoparticles-Trevesia palmata: Phức hệ nano bạc dịch chiết Đu đủ rừng ALDH Aldehyde dehydrogenase APL Alkylphospholipid CSC Cancer stem cell - Tế bào gốc ung thư cDNA Complementary DNA NCDs Noncommunicable diseases - Bệnh không lây nhiễm DNA Deoxyribonucleic acid FACS Fluorescence activated cell sorting IARC International Agency for Research on Cancer - Cơ quan Quốc tế Nghiên cứu Ung thư GC Gastric cancer - Ung thư dày mRNA RNA thông tin H pylori Helicobacter pylori ROS Reactive oxygen species - Các dạng oxy hóa tự RA Retinoic acid RNA Ribonucleic acid SCCHN Squamous cell carcinoma of the head and neck - Ung thư biểu mô tế bào vảy đầu cổ XRD X-ray difractometry - Nhiễu xạ tia X TEM Transmission Electron Microscopy - Kính hiển vi điện tử truyền qua FT-IR Fourier-transform infrared spectroscopy - Quang phổ hồng ngoại biến đổi chuỗi Fourier vii DANH MỤC HÌNH Hình Tên hình Trang Hình 1.1 Cấu trúc aglycon saponin phân lập từ hai loài Trevesia palmata (Roxb & Lindl) Vis Trevesia sundaica Miq Hình 1.2 Các phương pháp tổng hợp AgNPs Hình 1.3 Biểu đồ khuếch đại đặc trưng Realtime PCR 22 Hình 3.1 Cây Đu đủ rừng Trevesia palmata (Roxb & Lindl.) Vis (Cây lá) thu thập huyện Chợ Đồn, tỉnh Bắc Kạn 33 Hình 3.2 Phản ứng tổng hợp AgNPs-TrP 34 Hình 3.3 Phổ hấp phụ UV-vis phức hệ AgNPs-TrP 36 Hình 3.4 Hình ảnh nhiễu xạ tia X (XRD) phức hệ AgNPs-TrP phổ hấp thụ hồng ngoại biến đổi Fourier 38 Hình 3.5 Hình dạng hạt nano chụp kính hiển vi điện tử truyền qua biểu đồ phân bố kích thước hạt 40 Hình 3.6 Hình ảnh ức chế tăng sinh tế bào ung thư dày MKN45 phức hệ AgNPs-TrP 42 Hình 3.7 Tác động phức hệ AgNPs-TrP lên sản sinh gốc oxy hóa tự (ROS) 43 Hình 3.8 Mức độ biểu gen NOX4 46 Hình 3.9 Mức độ biểu gen DUOX2 47 Hình 3.10 Mức độ biểu gen Caspase 49 Hình 3.11 Mức độ biểu gen Caspase 51 Hình 3.12 Mức độ biểu gen BCL2 52 Hình 3.13 Mức độ biểu SOD1 54 Hình 3.14 Mức độ biểu SOD2 55 Hình 3.15 Mức độ biểu ALDH 56 DANH MỤC BẢNG Bảng Bảng 2.1 Tên bảng Trình tự mồi dùng xác định biểu gen Trang 31 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Theo thống kê tổ chức Cơ quan Quốc tế Nghiên cứu Ung thư (IARC) năm 2018, bệnh ung thư cướp sinh mạng khoảng 9,6 triệu người giới 18,1 triệu ca mắc Gần nửa số ca mắc (48,4%) nửa (57,3%) số ca tử vong ung thư giới xảy châu Á, phần gần 60% dân số tồn cầu tập chung Châu Âu chiếm 23,4% tổng số trường hợp ung thư 20,3% ca tử vong ung thư, đại diện cho 9% dân số toàn cầu Tiếp theo châu Mỹ với 21% số ca mắc 14,4% số ca tử vong, châu Phi tỷ lệ 5,8% 7,3%; thấp châu Đại dương với tỷ lệ 1,4 0,7% cho tỷ lệ mắc tỷ lệ chết ung thư gây [17] Cây Đu đủ rừng có tên khoa học Trevesia palmata thuộc họ Nhân sâm (Araliaceae), nhà khoa học giới quan tâm thể hoạt tính hạ đường huyết kháng viêm mạnh [30], kháng loại nấm gây bệnh Magnaporthe oryzae Botrytis cinerea [53] Các nghiên cứu loài T palmata cho thấy có mặt nhiều hợp chất triterpen saponin [30], [31], [53] Đây hợp chất mang lại tác dụng sinh học loài Các nghiên cứu hợp chất saponin có tiềm gây độc với nhiều dòng tế bào ung thư người Các hạt nano bạc (AgNPs) nghiên cứu rộng rãi đặc tính vật lý, hóa học, sinh học vượt trội chúng Kích thước, hình dạng, thành phần, độ kết tinh cấu trúc AgNPs ưu việt hẳn so với dạng khối chúng [56], [92] Khả chống ung thư chúng chứng minh qua nghiên cứu khác [86], [87] Phương pháp tổng hợp xanh (Green sylthesis) sử dụng thực vật để tổng hợp nên hạt nano bạc hướng nghiên cứu quan tâm rộng rãi Phương pháp chứng tỏ điểm ưu việt so với phương pháp tổng hợp khác, điều chế chất có tính diệt khuẩn ức chế tế bào ung thư [20] Nghiên cứu tổng hợp nano bạc từ Đu đủ rừng đánh giá khả ức chế tế bào ung thư cịn chưa nghiên cứu, thực đề tài luận văn: “Nghiên cứu khả ức chế tế bào ung thư nano bạc tổng hợp từ dịch chiết Đu đủ rừng Trevesia palmata” Mục tiêu đề tài Tổng hợp thành công phức hệ nano bạc dịch chiết Đu đủ rừng AgNPs-TrP Đánh giá hoạt tính chống ung thư phức hệ AgNPs-TrP tế bào ung thư mô hình ni cấy in vitro Nội dung nghiên cứu Nội dung Thu thập mẫu Đu đủ rừng tổng hợp phức hệ AgNPs-TrP Nội dung Phân tích đặc điểm hóa lý (phổ UV-vis, phổ hồng ngoại FT-IR, phổ nhiễu xạ XRD hình thành hạt nano kinh hiển vi điện tử truyền qua - TEM) Nội dung Đánh giá khả ức chế tăng sinh tế bào ung thư Nội dung Đánh giá tác động phức hệ AgNPs-TrP lên khả sản sinh gốc oxy hóa tự (ROS) tế bào ung thư Nội dung Tác động phức hệ AgNPs-TrP lên biểu gen chủ chốt liên quan tới đường tín hiệu ROS Nội dung Tác động phức hệ AgNPs-TrP lên biểu gen chủ chốt liên quan tới đường tín hiệu apoptosis Nội dung Tác động phức hệ AgNPs-TrP lên biểu gen chống oxy hóa CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Khái quát Đu đủ rừng 1.1.1 Đặc điểm phân loại Theo hệ thống phân loại Takhtajan ghi Flowering plants [94], Đu đủ rừng (Trevesia palmata (Roxb & Lindl.) Vis.) thuộc chi Trevesia Vis., chi nằm họ Nhân sâm (Araliaceae) Vị trí phân loại chi Trevesia Vis hệ thống phân loại thực vật thức cụ thể tóm tắt sau: Ngành Ngọc lan - Magnoliophyta Lớp Ngọc lan - Magnoliopsida Phân lớp Sổ - Dilleniidae Bộ Nhân sâm (Hoa tán) - Apiales Họ Nhân sâm (Ngũ gia bì) - Araliaceae Chi Trevesia Vis Đu đủ rừng (Trevesia palmata (Roxb & Lindl.) Vis.) cịn gọi Thơng thảo gai, Thầu dầu núi, Thích thơng thảo, Nhật phiến, Thơi hoang [2], [3] thuộc họ Nhân sâm (Araliaceae) Cây nhỡ cao 7-8 m hay hơn, thân phân nhánh, cành có gai, ruột xốp [23], cao m, thân to 10 cm, có gai [3], [8] đơn, phiến phân thùy chân vịt xẻ sâu thầu dầu, có 5-9 thùy nhọn có răng, gân mặt, mép có cưa thơ; cuống dài có gai Lá non phủ lơng mềm màu nâu nhạt, già nhẵn Hoa mọc thành tán, tụ thành chùy nách, hoa to khoảng 1cm, màu trắng, dài 13-18 mm, có khía, hạt dẹt [2] Cây mọc chỗ ẩm, dọc theo sông, suối, thung lũng rừng phục hồi Ra hoa từ tháng đến tháng 6, có từ tháng đến tháng [2], [7] 4 Phân bố: Cây Đu đủ rừng phân bố Sơn La (Mộc Châu), Lào Cai, Hà Giang, Tuyên Quang (Phó Bảng), Lạng Sơn (Hữu Lũng), Hà Tây (Ba Vì), Quảng Trị, Kon Tum (Đắc Glay, Đắc Choong, Đắc Kit, Đắc Long, Đắc môn, Đắc Pết, Gia Lai (Chư Pả, Mang Jang, Chư Ta Mốc), Đắc Lắc, Đắc Nông, Lâm Đồng (Lạc Dương, Langbiang, Tra Nung, Kơ Nớ) Ở Ấn Độ, Bangladet, Trung Quốc [2], [8] 1.1.2 Thành phần hóa học Cho đến nghiên cứu thành phần hóa học lồi chi Trevesia, kể nước nước hạn chế Năm 1997 từ phân đoạn n-BuOH dịch chiết MeOH hoa loài T sundaica Nunziatina de Tommasi cộng phân lập saponin triterpenoid (1-6) với saponin triterpenoid biết (Hình 1.1) [31] Năm 2000 từ phân đoạn n-BuOH dịch chiết EtOH loài T palmata, nhóm nghiên cứu phân lập saponin triterpenoid, có chất (7-12) [30] Phần lớn saponin bisdesmoside, có saponin monodesmoside tất có phần aglycon acid oleanolic dẫn chất acid Hình 1.1 Cấu trúc aglycon saponin phân lập từ hai loài Trevesia palmata (Roxb & Lindl) Vis Trevesia sundaica Miq [31] Bora Kim cộng năm 2018 phân lập năm hợp chất chống nấm từ chiết xuất methanol T palmata: hai glycosides triterpene (TPGs), TPG1 TPG5 với ba TPGs biết đến (TPG2 [macranthoside A], TPG3 [αhederin], TPG4 [ilekudinoside D]) [53] Năm 2019, Phạm Hải Yến cộng tìm ba saponin triterpene bao gồm hai loại lupane loại ursane phân lập từ Trevesia palmata [103] 1.1.3 Công dụng Đu đủ rừng Bộ phận dùng: Lõi thân (tủy cây), - Folium et Medulla Rsdix Trevesiae burkii [2] Tính vị, tác dụng: Vị đắng, tính bình, lõi thân lợi niệu, rễ cường cân tráng cốt [2] Trong y học cổ truyền người ta sử dụng thành phần Đu đủ rừng để chữa số bệnh sau: Lõi thân dùng chữa phù thũng, đái dắt, tê thấp làm thuốc hạ nhiệt, làm phổi bớt nóng, dùng nấu xơng chữa tê liệt bại người giã đắp chữa gãy xương [7], [91] Ở Trung Quốc, lõi thân dùng điều trị tiểu tiện bất lợi, rễ dùng trị đòn ngã tổn thương đau eo lưng [1],[2] Hiện nay, giới có nghiên cứu tác dụng dược lý Đu đủ rừng (Trevesia palmata (Roxb & Lindl.) Vis.) Năm 2000, Nunziatina De Tommasi cộng (Italia) chứng minh dịch chiết saponin thô từ Đu đủ rừng số saponin phân lập thể tác dụng chống tăng sinh tế bào dòng tế bào J774, HEK-293c, WEHI164d [30] 6 Năm 2014, K.M Hasanur Rahman cộng nghiên cứu tác dụng hạ đường huyết giảm đau dịch chiết từ loài T palmata Kết cho thấy mức liều lượng 100, 200 400mg/kg thể trọng làm giảm đường huyết động vật thực nghiệm 17,9; 28,1 47,4% so với đối chứng; tác dụng giảm đau, mức liều lượng 50, 100, 200 400 mg kg trọng lượng thể giảm số lượng bụng co thắt 33,3; 40,7; 48,1 55,6% [82] Mohammed Aktar Sayeed cộng nghiên cứu tác dụng dịch chiết methanol từ loài T.palmata điều trị tan huyết khối chống viêm khớp Kết cho thấy dịch chiết n-hexane ethyl acetate có tác dụng tốt thử nghiệm in vitro hoạt tính tan huyết khối dịch chiết methanol có tác dụng kháng viêm mạnh [89] Năm 2018, Bora Kim cộng chiết xuất từ T.palmata hoạt chất TPGs cách chiết methanol, cho thấy hoạt chất TPG 1, TPG 2, TPG TPG có tác dụng kháng nấm mạnh thực vật khảo sát hoạt động loại nấm cà, lúa mì lúa mạch hồ tiêu [53] 1.2 Nano bạc, phương pháp tổng hợp ứng dụng 1.2.1 Khái quát nano bạc Nano bạc tập hợp nguyên tử bạc có kích thước từ tới 100 nm thường chế tạo dạng bột dạng keo Do có diện tích bề mặt lớn nên hạt nano bạc có khả kháng khuẩn tốt so với vật liệu khối nhờ khả giải phóng nhiều ion Ag+ Các hạt nano bạc có tượng cộng hưởng Plasmon bề mặt Hiện tượng tạo nên màu sắc từ vàng nhạt đến đen cho dung dịch có chứa hạt nano bạc với màu sắc phụ thuộc vào nồng độ kích thước hạt Nano bạc mang đầy đủ tính chất bạc khối dẫn điện, dẫn nhiệt, khả xúc tác, tính điện quang, khả diệt khuẩn Ngoài ra, bạc nano có nhiều tính chất khác biệt so với bạc kim loại nhờ đặc tính nano diện tích bề mặt lớn, khả phân tán tốt dung mơi mà điển hình khả diệt khuẩn [57] 1.2.2 Các phương pháp tổng hợp nano bạc Các phương pháp tổng hợp nano kim loại chủ yếu chia thành cách tiếp cận từ xuống (topdown) từ lên (bottom up) Cách tiếp cận từ xuống vật liệu khối phân tách thành hạt mịn để tạo cấu trúc nano cần thiết, phương pháp từ lên lắp ráp nguyên tử phân tử đơn lẻ thành cấu trúc nano lớn để tạo vật liệu có kích thước nano [47] Ngày nay, phương pháp tổng hợp phân loại thành tổng hợp xanh, vật lý hóa học (Hình 1.2) Các tổng hợp vật lý hóa học có xu hướng tốn nhiều công sức phức tạp so với tổng hợp sinh học thể tính chất hấp dẫn, suất cao, độ hịa tan tính ổn định [107] Phương pháp vật lý: Sự tổng hợp vật lý AgNPs bao gồm phương pháp ngưng tụ bay kỹ thuật cắt đốt laser [47] Cả hai phương pháp tổng hợp lượng lớn AgNPs với độ tinh khiết cao mà không sử dụng hóa chất giải phóng chất độc hại gây nguy hiểm cho sức khỏe môi trường người Nhưng hai phương pháp tiêu thụ lượng lớn đòi hỏi thời gian tổng hợp thiết bị phức tạp tương đối dài, làm tăng chi phí vận hành [58] Phương pháp hóa học/quang hóa: Phương pháp tổng hợp hóa học áp dụng phổ biến trình tổng hợp nano kim loại dạng phân tán keo dung dịch nước dung môi hữu cách khử muối kim loại chúng Các loại muối kim loại khác sử dụng để chế tạo ống nano kim loại tương ứng, vàng, bạc, sắt, oxyt kẽm, đồng, palladi, bạch kim, [67] 8 Hình 1.2 Các phương pháp tổng hợp AgNPs [44] Phương pháp tổng hợp hóa học chia thành phương pháp khử hóa học, điện hóa, hỗ trợ chiếu xạ phương pháp nhiệt phân Loại chất khử chất ổn định yếu tố việc tổng hợp hạt nano kim loại phương pháp Quan trọng hơn, chất ổn định chất khử thường độc hại, nên việc sử dụng loại chất cần xem xét tính an tồn hiệu phương pháp Đây nhược điểm phương pháp tổng hợp hóa học [47] Phương pháp tổng hợp xanh: Cách tiếp cận tổng hợp xanh hay gọi tổng hợp sinh học sử dụng chiết xuất thực vật kỳ vọng phương pháp thay cho tổng hợp hóa học cho hạt nano kim loại giảm phản ứng độc hại Các phận khác thực vật sử dụng để tổng hợp hạt nano bạc tối ưu hóa Kích thước hình dạng mong muốn thu cách tối ưu hóa loại dung môi thời gian Tổng hợp xanh hạt nano bạc phương pháp đơn giản dễ thực bao gồm liên kết ion kim loại với vật liệu thực vật Quy trình chung cho tổng hợp bắt đầu cách ủ muối bạc AgNO3 tác nhân chiết xuất thực vật gây giảm ion bạc để tạo AG+0 phản ứng khử dẫn đến hình thành hạt nano bạc [44] 1.2.3 Vai trò nano bạc tạo phương pháp tổng hợp xanh y học Do khả tương thích sinh học, khả mở rộng khả ứng dụng cao, hạt nano bạc chiết xuất từ thực vật cho thấy đặc tính chống oxy hóa chống ung thư vượt trội bên cạnh hoạt động kháng khuẩn cao chống lại mầm bệnh phân lập lâm sàng bao gồm mầm bệnh đa kháng thuốc nấm men Do đó, cơng nghệ nano thực vật mở đường việc điều trị kiểm soát bệnh nguy hiểm đặc biệt ung thư Các nghiên cứu cung cấp kiến thức cập nhật hạt nano bạc chiết xuất từ thực vật, đặc biệt trọng đến ứng dụng chúng hoạt động chống vi trùng, chống oxy hóa chống ung thư Nghiên cứu Ji X cộng năm 2017 điều tra khả điều trị Trametes robiniophila tế bào ung thư dày cách sử dụng dòng tế bào ung thư dày MKN45 Nghiên cứu cho thấy Trametes robiniophila có tiềm điều trị tế bào ung thư dày tác động lên tế bào dày thông qua cảm ứng apoptosis ức chế biểu matrix metalloproteinase (MMPs) [48] Năm 2018, Saratale RG cộng tổng hợp nano bạc từ Bồ công anh lùn (Taraxacum officinale) thử nghiệm ức chế ung thư tế bào gan mức cao Nghiên cứu sử dụng Taraxacum officinale tổng hợp nano bạc (TOL-AgNPs) TOL-AgNPs cho thấy hoạt động kháng khuẩn chống lại phytopathogens Xanthomonas axonopodis Pseudomonas syringae TOL-AgNPs (tại nồng độ 20 μg/ml) cho thấy hoạt động kháng khuẩn ức chế phytopathogens X axonopodis (22,0 ± 0,84 mm) P syringae (19,5 ± 0.66 mm) AgNPs tổng hợp có hoạt tính kháng khuẩn cao so với AgNPs thương mại [85] Cũng năm này, Mousavi B cộng nghiên cứu tổng hợp xanh nano bạc cách sử dụng dịch chiết từ Artemisia turcomanica để nghiên cứu cảm ứng 10 apoptosis hạt nano bạc tổng hợp sinh học dòng tế bào ung thư dày (AGS) nhằm so sánh tiềm chống ung thư chúng với hạt nano bạc thương mại [70] Năm 2019, Ahmed MJ cộng tiến hành tổng hợp nano bạc từ dịch chiết rễ loài Jurinea dolomiaea; đồng thời khả ức chế dòng tế bào ung thư cổ tử cung (HELA) dòng tế bào ung thư vú (MCF 7) phức hệ nano bạc tổng hợp [9] 1.3 Khái quát ung thư ung thư dày 1.3.1 Khái quát ung thư Các bệnh không lây nhiễm (NCDs) nguyên nhân phần lớn ca tử vong toàn cầu ung thư rào cản lớn làm giảm tuổi thọ người quốc gia kỷ 21 Theo ước tính Tổ chức Y tế giới (WHO) 2015, ung thư nguyên nhân hàng đầu gây chết trước tuổi 70 91/172 quốc gia, đứng thứ ba 22 quốc gia khác Ung thư phổi bệnh ung thư thường chẩn đoán (11,6%) nguyên nhân gây tử vong ung thư hàng đầu (18,4%), số ca mắc ung thư vú nữ (11,6%), ung thư tuyến tiền liệt (7,1%), ung thư đại trực tràng (6,1%) Tỷ lệ chết ung thư đại trực tràng 9,2%, ung thư dày 8,2%, ung thư gan 8,2% [17] Ung thư bệnh lý ác tính tế bào Khi bị kích thích tác nhân sinh ung thư, tế bào tăng sinh cách vô hạn, không tuân theo chế kiểm soát phát triển thể Tất tế bào khối u cho thấy dấu hiệu bệnh ung thư, bao gồm: Phát triển tế bào phân chia thiếu tín hiệu thích hợp; Liên tục tăng trưởng; Tránh apoptosis; Tiềm chép vô hạn; Thúc đẩy xây dựng mạch máu; Xâm lấn mơ hình thành di [42] 1.3.2 Ung thư dày Ung thư dày (GC) bệnh đa yếu tố, có nhiều tác nhân ảnh hưởng đến phát triển nó, mơi trường di truyền Thống 11 kê cho thấy, GC nguyên nhân tử vong thứ tư loại ung thư tồn giới, với tỷ lệ sống sót trung bình giai đoạn phát triển 12 tháng [81] Ung thư dày bệnh ác tính nguy hiểm vấn đề sức khỏe tồn cầu Các biện pháp dự phịng điều chỉnh chế độ ăn uống thích hợp, chẩn đốn sớm theo dõi sức khỏe thường xuyên góp phần giảm nguy mắc bệnh GC thường gặp người trẻ (dưới 45 tuổi), tỷ lệ nhỏ 10% bệnh nhân giai đoạn phát triển [93] 1.3.2.1 Các yếu tố nguy Một số yếu tố ghi nhận để có tác động đáng kể tăng nguy phát triển GC, lịch sử gia đình, chế độ ăn uống, tiêu thụ rượu, hút thuốc lá, nhiễm Helicobacter pylori Epstein - Barr virus (EBV) Tiền sử gia đình GC yếu tố rủi ro quan trọng Ung thư dày khuếch tán di truyền (HDGC) loại ung thư có yếu tố gia đình dễ nhận biết nhất, gây thay đổi gen cadherin (CDH1) Nguy ung thư biểu mô dày bệnh nhân có tiền sử gia đình cao khoảng ba lần so với người khơng có tiền sử [79] Số lượng nghiên cứu có sẵn tỷ lệ mắc bệnh tiền sử gia đình ít, tiền sử gia đình cá nhân trải qua kiểm tra sức khỏe ghi nhận khoảng 11% theo nghiên cứu Seon Hee Lim cộng Hàn Quốc thu thập số liệu 13 năm [61] Mối tương quan chế độ ăn uống nguy phát triển GC nghiên cứu rộng rãi Quỹ Nghiên cứu Ung thư Thế giới/Viện Nghiên cứu Ung thư Hoa Kỳ (WCRF/AICR) tóm tắt rằng, trái rau thực phẩm bảo vệ chống lại phát triển GC, thịt động vật nướng, thực phẩm bảo quản muối thực phẩm hun khói giúp tăng tiến triển GC [98] Các chất gây ung thư thực phẩm tương tác với tế bào biểu mơ dày kích thích thay đổi gen biểu chúng Một lượng lớn muối chứng minh tàn phá niêm mạc dày, thúc đẩy chết tế bào tăng sinh tế bào tái tạo mơ hình động vật [109] ... chưa nghiên cứu, thực đề tài luận văn: ? ?Nghiên cứu khả ức chế tế bào ung thư nano bạc tổng hợp từ dịch chiết Đu đủ rừng Trevesia palmata? ?? Mục tiêu đề tài Tổng hợp thành công phức hệ nano bạc dịch. .. chứng tỏ điểm ưu việt so với phương pháp tổng hợp khác, điều chế chất có tính diệt khuẩn ức chế tế bào ung thư [20] Nghiên cứu tổng hợp nano bạc từ Đu đủ rừng đánh giá khả ức chế tế bào ung thư. ..ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC HOÀNG NGỌC TRUYỀN NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG ỨC CHẾ TẾ BÀO UNG THƯ CỦA NANO BẠC TỔNG HỢP TỪ DỊCH CHIẾT CÂY ĐU ĐỦ RỪNG TREVESIA PALMATA Chuyên ngành: