Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN8766 2011 Công ty luật Minh Khuê www luatminhkhue vn TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 8766 2011 SỮA VÀ SẢN PHẨM SỮA XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG PROTEIN PHƯƠNG PHÁP NHUỘM DA CAM AXIT 12 Milk and[.]
Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 8766:2011 SỮA VÀ SẢN PHẨM SỮA - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG PROTEIN - PHƯƠNG PHÁP NHUỘM DA CAM AXIT 12 Milk and milk products - Determination of protein content - Acid orange 12 dye-binding method Lời nói đầu TCVN 8766:2011 xây dựng sở AOAC 967.12 Protein in Milk Dye Binding Method I; TCVN 8766:2011 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC/F13 Ống Phương pháp phân tích lấy mẫu biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đề nghị, Bộ Khoa học Công nghệ công bố SỮA VÀ SẢN PHẨM SỮA - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG PROTEIN - PHƯƠNG PHÁP NHUỘM DA CAM AXIT 12 Milk and milk products - Determination of protein content - Acid orange 12 dye-binding method Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp xác định hàm lượng protein sữa sản phẩm sữa phương pháp nhuộm màu, sử dụng thuốc nhuộm da cam axit 12 Phương pháp áp dụng cho sữa dạng lỏng, sữa bột gầy, hỗn hợp từ sữa cream, kem lạnh, buttermilk đồ uống từ sữa chứa socola Thuật ngữ định nghĩa Trong tiêu chuẩn áp dụng thuật ngữ định nghĩa sau: Hàm lượng protein (protein content) Phần khối lượng protein xác định phương pháp quy định tiêu chuẩn CHÚ THÍCH: Hàm lượng protein biểu thị phần trăm khối lượng Nguyên tắc Khi nhuộm phần mẫu thử dung dịch thuốc nhuộm da cam axit 12, phần thuốc nhuộm liên kết với protein sữa, tạo thành phức chất protein nhuộm màu khơng hịa tan, phần cịn lại khơng liên kết với protein hòa tan vào dung dịch Đo màu dung dịch máy đo phổ bước sóng 480 nm để tính phần khối lượng thuốc nhuộm không liên kết với protein Hàm lượng protein tính thơng qua phần khối lượng thuốc nhuộm liên kết với protein Thuốc thử Tất thuốc thử sử dụng phải loại tinh khiết phân tích, trừ có quy định khác Nước sử dụng phải nước cất nước có chất lượng tương đương 4.1 Dung dịch đệm phosphat, 0,05 M, pH từ 1,8 đến 1,9 Hòa tan 3,4 g kali dihydro phosphat (KH2PO4), 3,4 ml axit phosphoric (H3PO4) (hỗn hợp dung dịch axit phosphoric 85 % nước với tỷ lệ 1:1), 60 ml axit axetic, ml axit propionic g axit oxalic khoảng 800 ml nước Thêm nước đến 000 ml trộn 4.2 Thuốc nhuộm da cam axit 12 [natri (5Z)-6-oxo-5-(phenylhydrazinyliden) naphthalen-2-sulfonat], tinh 1) Hòa tan 100 g thuốc nhuộm 400 ml nước sôi khuấy trộn 400 ml cồn biến tính sôi Làm mát đến nhiệt độ từ oC đến oC khoảng 15 h Lọc hỗn hợp qua phễu Buchner, rửa lần với cồn lạnh rửa hút liên tục cồn loại bỏ hết Sấy khơ 125 oC Lặp lại q trình kết tinh lại sấy khô tủ sấy chân không 10 oC 4.3 Dung dịch thuốc nhuộm 1) 1) Có thể sử dụng sản phẩm có bán sẵn thị trường, ví dụ Udy Crop., 201 Rome Ct, Fort Collins, CO 80524, USA Thông tin đưa nhằn tạo thuận lợi cho người sử dụng tiêu chuẩn tiêu chuẩn không ấn định phải sử dụng sản phẩm nhà cung cấp nêu LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn 4.3.1 Công thức Hòa tan 1,300 g (đã hiệu chỉnh theo 4.3.3) thuốc nhuộm da cam axit 12 (4.2), kết tinh lại hai lần 000 ml dung dịch đệm phosphat 0,05 M (4.1) 4.3.2 Cơng thức Hịa tan 1,320 g (đã hiệu chỉnh theo 4.3.3) thuốc nhuộm da cam axit 12 (4.2), kết tinh lại hai lần 000 ml dung dịch có chứa 60 ml axit axetic (CH 3COOH) 10 g axit oxalic (C2H2O4) 4.3.3 Hiệu chỉnh nồng độ thuốc nhuộm Đo độ hấp thụ dung dịch thuốc nhuộm, A, tính nồng độ thuốc nhuộm dung dịch, c, sử dụng cơng thức: đó: b chiều dài đường quang cuvet, tính milimet (mm) Kiểm tra tiếp nồng độ dung dịch dựa vào sữa biết hàm lượng protein dung dịch thuốc nhuộm màu xác nhận giá trị sử dụng CHÚ THÍCH: Sử dụng công thức thuốc nhuộm cho phép thử hiệu chuẩn 4.4 Dung dịch thuốc nhuộm chuẩn 1) Hòa tan 0,600 g thuốc nhuộm da cam axit 12 (4.2) kết tinh lại hai lần axit propionic khoảng 900 ml nước Pha loãng nước đến 000 ml Hiệu chỉnh phép thử 4.3.3 Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm thông thường cụ thể sau: 5.1 Máy đo phổ, cài đặt bước sóng 480 nm2) lại thích hợp 5.2 Cuvet, có chiều dài đường quang ngắn Cuvet với chiều dài đường quang khoảng 0,3 mm, kiểu dịng chảy thích hợp Đo độ hấp thụ As dung dịch K2CrO4 0,0400 g/l kali hydroxit 0,05 M bước sóng 370 nm Tính chiều dài đường quang, b, milimet theo công thức: b = As/0,09914 Lắp ống thoát ống cấp phù hợp có, theo hướng dẫn nhà sản xuất để đảm bảo dòng chảy mức dịch lỏng 5.3 Pipet tự động Điều chỉnh để pipet phân phối tương đương 40,44 g dung dịch thuốc thử nhuộm màu 20 oC (tương ứng với 39.887 g nước hay 40 ml) Điều chỉnh cho khối lượng 10 lần phân phối liên tục nằm khoảng 40,44 g ± 0,02 g 5.4 Xyranh Chuẩn hóa xyranh lấy mẫu để phân phối 2,24 ml 20 oC (tương ứng 2,2337 g nước) 5.5 Túi đựng mẫu, làm polyetylen 5.6 Chai phân phối, loại bóp, gắn nắp, làm polyetylen có mặt phía màng thủy tinh 5.7 Cân phân tích, cân xác đến 0,5 mg 5.8 Bình định mức, dung tích 000 ml 5.9 Tủ lạnh 2) Có thể sử dụng máy đo màu phù hợp với cuvet dịng chảy, có chiều dài đường quang ngắn đường chuẩn thích hợp, ví dụ Udy Corp., 201 Rome Ct, Fort Collins, CO 80524, USA Thông tin đưa nhằm tạo thuận lợi cho người sử dụng tiêu chuẩn tiêu chuẩn không ấn định phải sử dụng sản phẩm nhà cung cấp nêu LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Lấy mẫu Việc lấy mẫu không quy định tiêu chuẩn này, nên lấy mẫu theo TCVN 6400 (ISO 707), Sữa sản phẩm sữa - Hướng dẫn lấy mẫu [1] Mẫu gửi đến phòng thử nghiệm phải mẫu đại diện Mẫu không bị hư hỏng thay đổi suốt trình vận chuyển bảo quản Cách tiến hành 7.1 Chuẩn bị mẫu thử 7.1.1 Sữa dạng lỏng kem lạnh Sử dụng mẫu nhận 7.1.2 Buttermilk, hỗn hợp từ sữa cream, đồ uống từ sữa chứa socola Làm ấm mẫu đến nhiệt độ từ 35 oC đến 38 oC khuấy trộn kỹ 7.1.3 Sữa bột gầy Sử dụng sản phẩm dạng bột hoàn nguyên sau: Cân túi chất dẻo (5.5), xác đến 0,5 mg Thêm khoảng 7,5 g cân lại Thêm tiếp khoảng 75 ml nước (ở khoảng 60 oC) Làm kín túi lắc mạnh Để nguội đến nhiệt độ phòng cân lại Cho vào tủ lạnh để qua đêm Hoàn nguyên phần mẫu thử mẫu sữa bột gầy phép thử lặp lại CHÚ THÍCH: Khơng sử dụng nồi cách thủy q trình hồn ngun 7.2 Dựng đường chuẩn Sử dụng dung dịch đệm thích hợp để pha lỗng dung dịch thuốc nhuộm (4.3) đến nồng độ 0,350 g/l, 0,600 g/l, 0,750 g/l 0,850 g/l Dựng đồ thị độ hấp thụ A dựa nồng độ dung dịch thuốc nhuộm pha loãng 7.3 Phép xác định Chỉnh máy đo phổ zero điều chỉnh cho dung dịch thuốc nhuộm chuẩn (4.4) có số đọc 42 % T bước sóng 480 nm Dùng xyranh (5.4) thêm lượng phần mẫu thử vào chai phân phối (5.6): - 2,24 ml sữa, buttermilk hỗn hợp từ sữa cream; - từ 2,5 ml đến 2,8 ml đồ uống từ sữa chứa socola sữa bột gầy hoàn nguyên; - Từ 2,0 g đến 2,3 g kem lạnh; - từ 0,22 g đến 0,24 g sữa bột gầy Dùng pipet tự động (5.3) thêm 40,44 g dung dịch thuốc nhuộm màu (4.3) vào chai phân phối (5.6) Lắc mạnh 30 s, riêng với chai phân phối có chứa sữa bột gầy lắc Cài đặt lại số đọc dung dịch thuốc nhuộm chuẩn (4.4) 42 %T, cần Nhỏ giọt dung dịch hỗn hợp từ chai phân phối (5.6) vào cuvet (5.2) qua phễu chiết Khi số đọc ổn định, ghi lại số đọc xác đến 0,1 % Kiểm tra số đọc máy đo quang Nếu đọc không 42 % T với dung dịch thuốc nhuộm chuẩn (4.4) điều chỉnh lại thiết bị lặp lại phép xác định phần mẫu thử Tất dung dịch phải đưa nhiệt độ 25 oC ± oC trước đưa vào cuvet đo Đo nhiệt độ trước lấy số đọc; làm ấm dung dịch dụng cụ đo Tính biểu thị kết 8.1 Sữa dạng lỏng, sữa bột gầy hoàn nguyên, kem lạnh, buttermilk, hỗn hợp từ sữa cream, đồ uống từ sữa chứa socola 8.1.1 Đối với dung dịch thuốc thử nhuộm màu công thức Hàm lượng protein mẫu thử, X1, biểu thị phần trăm khối lượng (%), tính theo cơng thức sau: LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn đó: m khối lượng phần mẫu thử, tính gam (g); 0,312 số miligam thuốc nhuộm liên kết tương ứng với mg protein; 1000 hệ số chuyển đổi từ miligam sang gam; m2 khối lượng thuốc nhuộm liên kết, tính miligam (mg), tính theo cơng thức sau: m2 = m3 - m1 = m3 - V x c1 = m3 Trong đó: m0 khối lượng dung dịch thuốc nhuộm (4.3), tính gam (g) Trong trường hợp này, m0 = 40,44 g; m3 khối lượng thuốc nhuộm tổng số, tính miligam (mg) Trong trường hợp này, m3 = 52 mg tương ứng với m0 = 40,44 g; m1 khối lượng thuốc nhuộm không liên kết, tính miligam (mg); c1 nồng độ thuốc nhuộm khơng liên kết hỗn hợp, tính miligam mililit (mg/ml) tính từ đường chuẩn dựa độ hấp thụ đọc được; V tổng thể tích phần mẫu thử dung dịch thuốc thử nhuộm màu thêm vào, tính mililit (ml); 1,012 khối lượng riêng hỗn hợp phần mẫu thử dung dịch thuốc thử nhuộm màu thêm vào, tính gam mililit (g/ml) 8.1.2 Đối với dung dịch thuốc thử nhuộm màu công thức Hàm lượng protein mẫu thử, X1, biểu thị phần trăm khối lượng (%), tính theo cơng thức sau: Trong đó: c2 nồng độ thuốc nhuộm khơng liên kết hỗn hợp, tính miligam mililit (mg/ml), tính từ đường chuẩn dựa độ hấp thụ đọc 8.2 Sữa bột gầy Hàm lượng protein sữa bột gầy, X2, tính phần trăm khối lượng (%), tính theo cơng thức sau: Trong đó: X1 hàm lượng protein sữa bột gầy hoàn nguyên, tính phần trăm khối lượng, tính theo 8.1; m4 khối lượng phần mẫu thử sữa bột gầy, tính gam (g); m5 khối lượng phần mẫu thử sữa bột gầy hồn ngun, tính gam (g) Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ: a) thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử; b) phương pháp lẫy mẫu sử dụng, biết; c) phương pháp thử dùng, viện dẫn tiêu chuẩn này; d) tất chi tiết thao tác không quy định tiêu chuẩn này, tùy ý lựa chọn với chi tiết bất thường khác ảnh hưởng đến kết quả; e) kết thử nghiệm thu LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] TCVN 6400 (ISO 707), Sữa sản phẩm sữa - Hướng dẫn lấy mẫu [2] J.AOAC 50, 542, 557 (1967) [3] J.AOAC 51, 811 (1968) [4] J.AOAC 52, 138 (1969) [5] J.AOAC 58, 773 (1975) LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 ... dài đường quang ngắn đường chuẩn thích hợp, ví dụ Udy Corp., 201 Rome Ct, Fort Collins, CO 80524, USA Thông tin đưa nhằm tạo thuận lợi cho người sử dụng tiêu chuẩn tiêu chuẩn không ấn định phải... phương pháp lẫy mẫu sử dụng, biết; c) phương pháp thử dùng, viện dẫn tiêu chuẩn này; d) tất chi tiết thao tác không quy định tiêu chuẩn này, tùy ý lựa chọn với chi tiết bất thường khác ảnh hưởng... GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Lấy mẫu Việc lấy mẫu không quy định tiêu chuẩn này, nên lấy mẫu theo TCVN 6400 (ISO 707), Sữa sản phẩm sữa - Hướng dẫn lấy mẫu [1] Mẫu