NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG KHÁNG U THỰC NGHIỆM CỦA RỄ CỦ TAM THẤT (PANAX NOTOGINSENG (BURK.) F.H. CHEN, ARALIACEAE) TRỒNG Ở VIỆT NAM TRƯỚC VÀ SAU CHẾ BIẾN

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ VIỆN DƯỢC LIỆU BÙI THỊ THU HÀ NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG KHÁNG U THỰC NGHIỆM CỦA RỄ CỦ TAM THẤT (PANAX NOTOGINSENG (BURK.) F.H CHEN, ARALIACEAE) TRỒNG Ở VIỆT NAM TRƯỚC VÀ SAU CHẾ BIẾN LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI, NĂM 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ VIỆN DƯỢC LIỆU BÙI THỊ THU HÀ NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG KHÁNG U THỰC NGHIỆM CỦA RỄ CỦ TAM THẤT (PANAX NOTOGINSENG (BURK.) F.H CHEN, ARALIACEAE) TRỒNG Ở VIỆT NAM TRƯỚC VÀ SAU CHẾ BIẾN LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƯỢC LÝ – DƯỢC LÂM SÀNG MÃ SỐ: 972.02.05 Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Vũ Mạnh Hùng GS TS Nguyễn Thanh Hải HÀ NỘI, NĂM 2022 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan Luận án “Nghiên cứu tác dụng kháng u thực nghiệm rễ củ Tam thất (Panax notoginseng (Burk.) F.H Chen, Araliaceae) trồng Việt Nam trước sau chế biến” cơng trình nghiên cứu tơi với hướng dẫn khoa học tập thể thầy hướng dẫn Các số liệu, kết nêu luận án trung thực công bố báo khoa học nhóm nghiên cứu Luận án chưa công bố, không trùng lặp với luận văn, luận án cơng trình nghiên cứu khoa học tác giả khác Nếu có điều sai tơi hồn tồn chịu trách nhiệm Hà Nội, ngày 25 tháng năm 2022 Tác giả Bùi Thị Thu Hà LỜI CẢM ƠN Trong trình thực Luận án này, nhận nhiều giúp đỡ, động viên từ thầy cô giáo, đồng nghiệp, gia đình bạn bè Lời đầu tiên, tơi xin trân trọng gửi lời cảm ơn sâu sắc đến Thầy hướng dẫn PGS TS Vũ Mạnh Hùng - nguyên Chủ nhiệm Bộ môn Dược lý, Học viện Quân y GS TS Nguyễn Thanh Hải - Phó Hiệu trưởng trường Đại học Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, hết lòng hướng dẫn, bảo, định hướng, giúp đỡ từ ngày trình học tập, nghiên cứu thực luận án Tôi xin trân trọng cảm ơn cán bộ, nhân viên Khoa phân tích-tiêu chuẩn, Viện Dược liệu; cán bộ, kỹ thuật viên Bộ môn Dược lý - Học viện Quân y, hết lòng giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho trình học tập, cơng tác Tơi xin trân trọng cảm ơn Lãnh đạo Viện Dược liệu, Thủ trưởng Bệnh viện 19-8 Bệnh viện Y học Cổ truyền - Bộ Công an tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình học tập thực luận án Từ đáy lịng mình, xin cảm ơn gia đình, cảm ơn chồng, con, bố mẹ hai bên tồn thể gia đình ln tin tưởng, động viên, chia sẻ, ủng hộ giúp đỡ lúc, nơi Xin cảm ơn tất người thân, bạn bè, đồng nghiệp ủng hộ, giúp đỡ trình thực luận án Xin trân trọng cảm ơn! Bùi Thị Thu Hà MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ BỆNH UNG THƯ 1.1.1 Tình hình ung thư giới Việt Nam 1.1.2 Ung thư với đáp ứng miễn dịch 1.2 TỔNG QUAN VỀ TAM THẤT 11 1.2.1 Tổng quan thực vật 11 1.2.2 Hóa thực vật rễ củ Tam thất 14 1.2.3 Các tác dụng dược lý Tam thất 16 1.2.3.1 Tác dụng chống ung thư 16 1.2.3.2.Tác dụng tăng cường miễn dịch 18 1.2.3.3 Tác dụng chống oxy hóa bảo vệ tế bào gan 19 1.2.3.4 Các tác dụng khác 21 1.3 TỔNG QUAN VỀ CÁC MƠ HÌNH THỰC NGHIỆM ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG KHÁNG U 22 1.3.1 Các mơ hình nghiên cứu in vitro 22 1.3.2 Các mơ hình nghiên cứu in vivo 26 CHƯƠNG 31 CHẤT LIỆU, ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 31 2.1 CHẤT LIỆU VÀ ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 31 2.1.1 Chất liệu nghiên cứu 31 2.1.2.Đối tượng nghiên cứu 35 2.1.3 Thiết bị, dụng cụ, hóa chất sử dụngtrong nghiên cứu 35 2.1.3.1 Thiết bị, dụng cụ sử dụng nghiên cứu 35 2.1.3.2 Hóa chất sử dụng nghiên cứu 37 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 39 2.2.1 Nghiên cứu ảnh hưởng phương pháp chế biến hấp nhiệt đến hàm lượng saponin rễ củ Tam thất 39 2.2.1.1 Chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc saponin có trongcác mẫu Tam thất hấp không hấp 39 2.2.1.2 Nghiên cứu biến đổi hàm lượng hoạt chất Tam thất trước sau hấp điều kiện khác phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 40 2.2.1.3 Định lượng hàm lượng saponin mẫu cao NP(O) NP(H) HPLC 42 2.2.2 Nghiên cứu tác dụng kháng u thực nghiệm dạng cao định lượng số saponin phân lập từ rễ củ Tam thất 42 2.2.2.1 Đánh giá tác dụng kháng u saponin phân lập cao định lượng NP(O), NP(H) số dòng tế bào ung thư người 42 2.2.2.2 Đánh giá khả gây độc tế bào khả kích thích chết tế bào theo chương trình (apoptosis) cao định lượng NP(H) dịng tế bào ung thư mơ liên kết chuột sarcoma TG180 44 2.2.2.3 Nghiên cứu tác dụng ức chế phát triển u cao định lượng NP(H) NP(O) chuột nhắt trắng mang khối u rắn sarcoma TG 180 48 2.2.2.4 Đánh giá tác dụng cao định lượng NP(H) NP(O) lên hệ miễn dịch chuột mang khối u rắn sarcoma TG180 50 2.2.2.5 Đánh giá tác dụng chống oxy hoá cao định lượng NP(H) NP(O) chuột mang khối u rắn sarcoma TG180 52 2.2.2.6 Xác định thời gian sống thêm chuột mang khối u rắn sarcoma TG180.53 2.2.3 Đánh giá độc tính cấp, độc tính bán trường diễn cao định lượng NP(H)…………………………………………………………………………… 54 2.2.3.1 Đánh giá độc tính cấp cao định lượng NP(H) chuột nhắt trắng 54 2.2.3.2 Đánh giá độc tính bán trường diễn cao định lượng NP(H) chuột cống trắng 55 2.3 XỬ LÝ SỐ LIỆU 56 2.4 ĐỊA ĐIỂM, THỜI GIAN NGHIÊN CỨU 56 CHƯƠNG 59 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 59 3.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng phương pháp chế biến đến hàm lượng saponin rễ củ Tam thất 59 3.1.1 Kết chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc saponin có mẫu Tam thất hấp không hấp 59 3.1.1.1 Phân lập saponin từ rễ củ Tam thất (dược liệu không xử lý hấp) 59 3.1.1.2 Phân lập saponin rễ Tam thất sau hấp nhiệt độ cao 61 3.1.1.3 Đặc trưng vật lý liệu phổ hợp chất phân lập 64 3.1.1.4 Biện giải cấu trúc hợp chất phân lập từ rễ củ Tam thất 72 3.1.2 Kết nghiên cứu biến đổi hàm lượng hoạt chất Tam thất hấp điều kiện khác phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) …………………………………………………………………………… 78 3.1.2.1 Lựa chọn điều kiện sắc ký 78 3.1.2.2 Xây dựng đường chuẩn 79 3.1.2.3 Kết định lượng saponin từ Tam thất hấp điều kiện khác 82 3.1.3 Hiệu suất chiết cao kết định lượnghàm lượng saponin mẫu cao định lượng NP(O) NP(H) HPLC 86 3.1.3.1 Hiệu suất chiết cao từ mẫu dược liệu 86 3.1.3.2 Định lượng mẫu cao chiết 87 3.2 Kết nghiên cứu tác dụng kháng u thực nghiệm dạng cao định lượng số saponin phân lập từ rễ củ Tam thất 88 3.2.1 Kết đánh giá tác dụng kháng u saponin phân lập cao định lượng NP(O), NP(H) số dòng tế bào ung thư người 88 3.2.2 Kết đánh giá khả gây độc tế bào khả kích thích chết tế bào theo chương trình (apoptosis) cao định lượng NP(H) dịng tế bào ung thư mơ liên kết chuột sarcoma TG180 91 3.2.2.1 Kết đánh giá khả gây độc tế bào cao định lượng NP(H) 91 3.2.2.2 Kết đánh giá khả kích thích chết tế bào theo chương trình (apoptosis) cao định lượng NP(H) dịng tế bào ung thư mô liên kết chuột sarcoma TG180 94 3.2.3 Kết nghiên cứu tác dụng kháng u cao định lượng NP(H) NP(O) chuột nhắt trắng mang khối u rắn sarcoma TG 180 97 3.2.3.1 Kết tạo mơ hình khối u sarcoma TG 180 chuột 97 3.2.3.2 Ảnh hưởng cao định lượng NP(H) NP(O) đến trọng lượng thể chuột mang khối u rắn sarcoma TG 180 98 3.2.3.3 Ảnh hưởng cao định lượng NP(H) NP(O) đến phát triển khối u rắn sarcoma TG 180 99 3.2.4 Kết đánh giá tác dụng cao định lượng NP(H) NP(O) lên miễn dịch chuột mang khối u rắn Sarcoma TG180 103 3.2.4.1 Kết đánh giá số lượng công thức bạch cầu máu chuột 103 3.2.4.2 Kết đánh giá nồng độ IL-2 TNF-α máu 104 3.2.4.3 Kết đánh giá số tiêu huyết học 105 3.2.4.4 Kết đánh giá cân nặng lách tuyến ức 107 3.2.5 Kết đánh giá tác dụng chống oxy hóa củacao định lượngNP(H) NP(O)trên chuột mang khối u rắn sarcoma TG 180 108 3.2.5.1 Hàm lượng MDA, GSH, SOD CAT gan chuột mang khối u rắn sarcoma TG180 108 3.2.5.2 Hoạt độ enzym ALT, AST máu chuột mang khối u rắn sarcoma TG180 110 3.2.5.3 Ảnh hưởng cao định lượng NP(H) NP(O) hình thái đại thể vi thể gan chuột chuột mang khối u rắn sarcoma TG 180 111 3.3.6 Kết đánh giá tác dụng kéo dài thời gian sống thêm cao định lượng NP(H) NP(O) chuột mang khối u rắn sarcoma TG 180 113 3.4 Kết đánh giá độc tính cao định lượng NP(H) 116 3.4.1 Kết xác định độc tính cấp (LD50) NP(H) 116 3.4.2 Kết đánh giá độc tính bán trường diễn NP(H) 117 CHƯƠNG 126 BÀN LUẬN 126 4.1 Về ảnh hưởng phương pháp chế biến hấp nhiệt đến hàm lượng saponin rễ củ Tam thất 128 4.1.1 Hàm lượng saponin Tam thất chưa hấp 128 4.1.2 Hàm lượng saponin Tam thất sau hấp 129 4.1.3 Ảnh hưởng điều kiện hấp nhiệt đến hàm lượng saponin rễ củ Tam thất 130 4.2 Về tác dụng kháng u thực nghiệm dạng cao định lượng số saponin phân lập từ rễ củ Tam thất 132 4.2.1 Về tác dụng kháng u saponin phân lập cao định lượng NP(O), NP(H) số dòng tế bào ung thư người 132 4.2.2 Về kết đánh giá khả kích thích chết tế bào theo chương trình (apoptosis) cao định lượng NP(H) dòng tế bào ung thư mô liên kết chuột sarcoma TG180 134 4.2.3 Về kết nghiên cứu tác dụng kháng u cao định lượng NP(H) NP(O) chuột nhắt trắng mang khối u rắn sarcoma TG 180 136 4.2.3.1 Về mơ hình nghiên cứu 136 4.2.3.2 Về liều dùng cao định lượng NP(H) NP(O) 138 4.2.4 Về tác dụng cao định lượng NP(H) NP(O) lên miễn dịch chuột mang khối u rắn Sarcoma TG180 141 4.2.5 Về kết đánh giá tác dụng chống oxy hóa chuột mang khối u rắn sarcoma TG 180 145 4.2.6 Về tác dụng kéo dài thời gian sống thêm chuột mang khối u rắn sarcoma TG 180 147 4.3 Về kết đánh giá độc tính cao định lượng NP(H) 153 4.3.1 Về độc tính cấp cao định lượng NP(H) 153 4.3.2 Về độc tính bán trường diễn cao định lượng NP(H) 154 KẾT LUẬN 159 KIẾN NGHỊ 161 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC ... DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ VIỆN DƯỢC LI? ?U BÙI THỊ THU HÀ NGHIÊN C? ?U TÁC DỤNG KHÁNG U THỰC NGHIỆM CỦA RỄ CỦ TAM THẤT (PANAX NOTOGINSENG (BURK.) F.H CHEN, ARALIACEAE) TRỒNG Ở VIỆT NAM TRƯỚC VÀ SAU CHẾ... xin cam đoan Luận án ? ?Nghiên c? ?u tác dụng kháng u thực nghiệm rễ củ Tam thất (Panax notoginseng (Burk.) F.H Chen, Araliaceae) trồng Việt Nam trước sau chế biến? ?? cơng trình nghiên c? ?u với hướng... đi? ?u trị ung thư Tam thất trồng Việt Nam Từ thực tế trên, tiến hành nghiên c? ?u đề tài: ? ?Nghiên c? ?u tác dụng kháng u thực nghiệm rễ củ Tam thất (Panax notoginseng, (Burk.) F.H Chen, Araliaceae) trồng