(LUẬN văn THẠC sĩ) nghiên cứu xác định tỷ lệ nhiễm và tình trạng kháng kháng sinh của vi khuẩn e coli và salmonella phân lập từ thịt lợn tại huyện luangprabang, tỉnh luangprabang, lào

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM PHONGSAVATH SAYKOSON NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH TỶ LỆ NHIỄM VÀ TÌNH TRẠNG KHÁNG KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E COLI VÀ SALMONELLA PHÂN LẬP TỪ THỊT LỢN TẠI HUYỆN LUANGPRABANG, TỈNH LUANGPRABANG, LÀO Ngành: Thú y Mã số: 8640101 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Phạm Hồng Ngân NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2019 download by : skknchat@gmail.com LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tơi xin cam đoan thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Mọi giúp đỡ cảm ơn Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Tác giả luận văn Phongsavath Saykoson i download by : skknchat@gmail.com LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành tốt luận văn tốt nghiệp nỗ lực thân nhận quan tâm giúp đỡ nhiều cá nhân tập thể Lời đầu tiên, xin trân trọng cảm ơn thầy giáo, cô giáo Khoa Thú Y – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam đặc biệt thầy giáo, cô giáo môn Thú Y Cộng Đồng – Khoa Thú Y tạo điều kiện giúp đỡ tơi hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Phạm Hồng Ngân giáo TS Nguyễn Thị Hương Giang tận tình giúp đỡ suốt thời gian học tập thời gian thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè động viên giúp đỡ tơi suốt q trình học tập Xin trân trọng cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Tác giả luận văn Phongsavth Saykoson ii download by : skknchat@gmail.com MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vi Danh mục bảng vii Danh mục hình viii Trích yếu luận văn ix Thesis abtract xi Phần Mở đầu 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích đề tài Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Tình hình ngộ độc thực phẩm 2.1.1 Ngộ độc thực phẩm bệnh truyền qua thực phẩm 2.1.2 Nguyên nhân gây ngộ độc thực phẩm 2.1.3 Tình hình ngộ độc thực phẩm vi sinh vật gây giới nước CHDCND Lào 2.1.4 Một số nghiên cứu ô nhiễm thực phẩm vi khuẩn E.coli Salmonella gây giới nước CHDCND Lào 12 2.2 Các nguồn ô nhiễm vi khuẩn vào thịt 13 2.2.1 Nhiễm khuẩn từ động vật 13 2.2.2 Lây nhiễm từ khơng khí 13 2.2.3 Lây nhiễm từ nước 14 2.2.4 Lây nhiễm từ đất 14 2.2.5 Nhiễm khuẩn trình giết mổ, chế biến bảo quản thịt 14 2.2.6 Lây nhiễm q trình lưu thơng phân phối 14 2.3 Một số đặc điểm vi khuẩn E.coli 15 2.3.1 Đặc điểm hình thái, ni cấy, đặc tính sinh hóa sức đề kháng vi khuẩn E.coli 15 2.3.2 Cấu trúc kháng nguyên 16 iii download by : skknchat@gmail.com 2.3.3 Đặc tính gây bệnh 18 2.3.4 Ý nghĩa việc xác định tổng số E.coli thịt 19 2.4 Một số đặc điểm vi khuẩn Salmonella 19 2.4.1 Đặc điểm hình thái 20 2.4.2 Đặc tính ni cấy 20 2.4.3 Đặc tính sinh hóa 21 2.4.4 Sức đề kháng vi khuẩn Salmonella 21 2.4.5 Cấu trúc kháng nguyên 22 2.4.6 Yếu tố bám dính 23 2.4.7 Các yếu tố gây bệnh Salmonella 24 2.4.8 Ý nghĩa việc xác định có mặt vi khuẩn Salmonella thịt 26 2.5 Những hiểu biết thuốc kháng sinh 26 2.5.1 Khái niệm 26 2.5.2 Phân loại thuốc kháng sinh 26 2.5.3 Cơ chế tác dụng thuốc kháng sinh 28 2.6 Hiện tượng kháng thuốc vi khuẩn e.coli Salmonella 28 2.6.1 Tính kháng thuốc vi khuẩn 28 2.6.2 Cơ chế gây tượng kháng thuốc vi khuẩn 30 2.6.3 Khả kháng kháng sinh vi khuẩn E coli 31 2.6.4 Khả kháng kháng sinh vi khuẩn Salmonella 32 2.6.5 Phương pháp xác định độ mẫn cảm vi khuẩn gây bệnh số thuốc kháng sinh 34 Phần Vật liệu phương pháp nghiên cứu 36 3.1 Đối tượng, địa điểm nghiên cứu 36 3.2 Thời gian nghiên cứu 36 3.3 Nội dung nghiên cứu 36 3.4 Vật liệu nghiên cứu 36 3.4.1 Vật liệu nghiên cứu 36 3.4.2 Trang thiết bị, dụng cụ 37 3.5 Phương pháp nghiên cứu 37 3.5.1 Phương pháp điều tra 37 3.5.2 Phương pháp thu thập mẫu 37 iv download by : skknchat@gmail.com 3.5.3 Phương pháp phân lập vi khuẩn E.coli Salmonella 38 3.5.4 Phương pháp kiểm tra tính mẫn cảm với kháng sinh chủng E.coli Salmonella phân lập 40 3.5.5 Phương pháp xử lý số liệu 42 Phần Kết thảo luận 43 4.1 Kết điều tra tình trạng sử dụng kháng sinh, phương thức giết mổ, vận chuyển bày bán thịt lợn địa bàn huyện Luangprabang,tỉnh Luangprabang, Lào 43 4.1.1 Tình hình sử dụng kháng sinh chăn ni lợn địa bàn huyện Luangprabang, tỉnh Luangprabang, Lào 43 4.1.2 Thực trạng giết mổ vận chuyển thịt đến bán số chợ thuộc huyện Luangprabang, tỉnh Luangprabang, Lào 44 4.1.3 Kết điều tra thực trạng vệ sinh an toàn thực phẩm quầy thịt lợn địa bàn huyện 46 4.2 Kết phân lập vi khuẩn E.coli Samonella thịt lợn sở nghiên cứu 48 4.2.1 Kết phân lập vi khuẩn E coli thịt lợn số chợ thuộc huyện Luangprabang, tỉnh Luangprabang, Lào 48 4.2.2 Kết phân lập vi khuẩn Salmonella thịt lợn số chợ thuộc huyện Luangprabang, tỉnh Luangprabang, Lào 49 4.2.3 Phân tích số yếu tố nguy ảnh hưởng đến tỷ lệ nhiễm vi khuẩn E.coli Salmonella thịt lợn 52 4.3 Kết xác định tình trạng kháng kháng sinh vi khuẩn E.coli Salmonella phân lập mẫu thịt lợn sơ nghiên cứu 54 Phần Kết luận kiến nghị 59 5.1 Kết luận 59 5.2 Kiến nghị 59 Phụ lục 65 v download by : skknchat@gmail.com DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt BGA Brilliant green agar BhI Brain Heart Infusion E coli Escherichia coli EHEC Enterohaemorrhagic E Coli EIEC Enteroinvasive E Coli EMB Eosin – Methylene Blue EPEC Enteropathogenic E Coli ETEC Enterotoxigenic E coli FAO Food and Agriculture Organization FDA Food & Drug Administration Gr (-) Gram âm Gr (+) Gram dương IMViC Indole, Methyl Red, Voges Proskauer Citrat lT Heat labile enterotoxin MKTTn Muller Kauffman Tetrathionate MPN Most Probable Number MR Methyl red PBW Pepton Buffer Water RV Rappaport – Vassiliadis Soya Pepton SS Salmonella – Shigella ST Heat stable enterotoxin TcVS Tiêu chuẩn vệ sinh TSI Triple sugar iron VP Voges proskauer WHO World Health Organization XlD Xylolysin deoxychocolat XLT4 Xyloze – Lyzine – Tergitol vi download by : skknchat@gmail.com DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Bảng đánh giá mức độ mẫn cảm với số loại kháng sinh vi khuẩn 41 Bảng 4.1 Tình hình sử dụng loại kháng sinh chăn nuôi lợn địa bàn huyện Luangprabang, tỉnh Luangprabang, Lào 43 Bảng 4.2 Kết điều tra phương thức giết mổ vận chuyển thịt lợn chợ địa bàn huyện Luangprabang, tỉnh Luangprabang, Lào 43 Bảng 4.3 Kết điều tra điều kiện an toàn vệ sinh thực phẩm quầy thịt lợn 47 Bảng 4.4 Kết phân lập vi khuẩn E.coli từ mẫu thịt lợn 50 Bảng 4.5 Kết phân lập vi khuẩn Salmonella từ mẫu thịt 49 Bảng 4.6 Kết phân tích số yếu tố nguy dẫn đến thịt bị nhiễm E.coli 52 Bảng 4.7 Kết phân tích số yếu tố nguy dẫn đến thịt bị nhiễm Salmonella 53 Bảng 4.8 Mức độ kháng kháng sinh chủng E.coli phân lập từ số chợ thuộc huyện Luangprabang, Lào 54 Bảng 4.9 Mức độ kháng kháng sinh chủng Salmonella phân lập từ số chợ thuộc huyện Luangprabang, Lào (n=18) 58 vii download by : skknchat@gmail.com DANH MỤC HÌNH Hình 4.1 Tỷ lệ phương thức giết mổ lợn cung cấp cho số chợ thuộc huyện Luangprabang, tỉnh Luangprabang, Lào 45 Hình 4.2 Tỷ lệ phương thức vận chuyển thịt lợn đến số chợ thuộc huyện Luangprabang, tỉnh Luangprabang, Lào 46 Hình 4.3 Tỷ lệ mẫu thịt lợn nhiễm vi khuẩn E.coli số chợ địa bàn huyện Luangprabang, tỉnh Luangprabang, Lào 48 Hình 4.4 Tỷ lệ mẫu thịt lợn nhiễm vi khuẩn Salmonella số chợ địa bàn huyện Luangprabang, tỉnh Luangprabang, Lào 50 Hình 4.5 Mức độ kháng kháng sinh chủng vi khuẩn E.coli phân lập 56 Hình 4.6 Mức độ kháng kháng sinh chủng vi khuẩn Salomonella phân lập 58 viii download by : skknchat@gmail.com TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tác giả: Phongsavath SAYKOSON Tên Luận Văn: “Nghiên cứu xác định tỷ lệ nhiễm tình trạng kháng kháng sinh vi khuẩn E coli Salmonella phân lập từ thịt lợn huyện Luangprabang, tỉnh Luangprabang, Lào” Chuyên ngành: Thú y Mã số: 8640101 Cơ sở đào tạo: Học viện nơng nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu - Xác định mức độ trạng kháng kháng sinh vi khuẩn E coli Salmonella phân lập từ thịt lợn bán số chợ thuộc huyện Luangprabang, tỉnh Luangprabang - Xác định tỷ lệ nhiễm E coli Salmonella thịt lợn bán chợ thuộc huyện Luangprabang, tỉnh Luangprabang - Cập nhật số liệu tình trạng kháng kháng sinh vi khuẩn E coli Salmonella Góp phần xây dựng liệu kiểm soát vi khuẩn kháng thuốc huyện Luangprabang, tỉnh Luangprabang, Lào Phương pháp nghiên cứu - Phương pháp điều tra cách vấn trực tiếp chủ sở chăn nuôi - Phương pháp thu thập mẫu theo TCVN (TCVM 4833-1:2002); (TCVN 4833-2:2002) - Phương pháp phân lập vi khuẩn E.coli theo kĩ thuật đếm số xác suất 6846 : 2007 (ISO 7251 : 2005) - Phương pháp phân lập vi khuẩn Salmonella theo TCVN (TCVN 4829 : 2005), (ISO 6579 : 2002) - Phương pháp kiểm tra tính mẫn cảm với kháng sinh chủng vi khuẩn E.coli phân lập theo phương pháp Bauer - Kirby - Phương pháp xử lý số liệu Kết nghiên cứu Thực trạng sử dụng kháng sinh chăn nuôi lợn, phương thức giết mổ, vận chuyển bày bán thịt lợn số chợ địa bàn huyện Luangprabang, tỉnh Luangprabang, Lào Qua điều tra phương pháp vấn trực tiếp hộ chăn nuôi cho thấy 100% số hộ sử dụng kháng sinh chăn ni lợn với mục đích phịng, trị bệnh ix download by : skknchat@gmail.com Nguyên nhân gỗ vật liệu khó vệ sinh so với vật liệu gạch men hay kim loại, dẫn đến lưu cữu vi khuẩn Salmonella mặt bàn lây nhiễm vào thịt lợn Ngoài ra, thịt lợn nhiễm Salmonella cịn nhiễm chéo từ nguồn lây ô nhiễm bãi rác, cống rãnh hay phân gia súc, gia cầm loại côn trùng ruồi, nhặn đưa đến khơng có dụng cụ xua đuổi hạn chế tiếp xúc chúng vào thịt Ngồi ra, vi khuẩn Salmonella lây nhiễm vào thịt qua tạp dề hay quần áo người bán hàng người bán hàng không vệ sinh hàng ngày, khơng có ý thức đảm bảo vệ sinh loại thực phẩm bày bán Để ngăn chặn hạn chế nhiễm Salmonella vào thịt, nơi bán thịt phải có đầu tư sở vật chất, đồng thời thực triệt để biện pháp vệ sinh, khử trùng, tiêu độc thú y q trình giết mổ bán hàng, ngồi cần nâng cao ý thức người bán thịt việc tổ chức lớp tập huấn vệ sinh an toàn thực phẩm ngộ độc thực phẩm 4.3 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH TÌNH TRẠNG KHÁNG KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN E.COLI VÀ SALMONELLA PHÂN LẬP ĐƯỢC TRÊN CÁC MẪU THỊT LỢN TẠI CƠ SƠ NGHIÊN CỨU 4.3.1 Kết xác định tình trạng kháng kháng sinh vi khuẩn E coli phân lập mẫu thịt sở nghiên cứu Tiến hành thử nghiệm tính mẫn cảm chủng với loại kháng sinh khác Kết thu tổng hợp trình bày Bảng 4.8 Hình 4.5 Bảng 4.8 Mức độ kháng kháng sinh chủng E.coli phân lập từ số chợ thuộc huyện Luangprabang, Lào (n=18) STT Tên kháng sinh Mức độ kháng kháng sinh Amoxicillin R 14 (77,8%) I (11,1%) S (11,1%) Ampicillin 16 (88,9%) (5,5%) (5,5%) Doxycycline (27,2%) (16,6%) 10 (55,5%) Gentamycin (50%) (16,6%) (33,3%) Kanamycin (33,3%) (16,1%) (50%) Streptomycin 12 (66,6%) (22,2%) (11,1%) Tetracycline 11 (61,1%) (16,1%) (22,2%) R: kháng, I: mẫn cảm trung bình, S: mẫn cảm 54 download by : skknchat@gmail.com Theo Trần Thị Hương Giang Huỳnh Thị Mỹ Lệ (2012), chăn nuôi, hầu hết chủ trang trại có biết đến tượng “nhờn thuốc”, mà họ thường phối hợp nhiều loại kháng sinh điều trị, dung dạng kháng sinh tổng hợp Họ bày tỏ mối lo ngại trước không ngừng phải đổi loại kháng sinh điều trị bệnh Một nguy quan trọng gây tượng kháng thuốc là: Hiện nhiều chủng loại kháng sinh thường đặt tên “thương mại”, họ sử dụng mà hiểu thành phần chế tác dụng Thực tế, theo kinh nghiệm chủ hộ chăn ni, liệu trình sử dụng kháng sinh điều trị bệnh vật nuôi thường kéo dài so với hướng dẫn nhà sản xuất, tâm lý thuốc kháng sinh nội không tốt thuốc kháng sinh ngoại tâm lý hàm lượng thành phần hoạt chất sản phẩm không đạt đủ nhãn sản phẩm công bố, dẫn đến việc tự ý sử dụng tăng liều lượng so với khuyến cáo lên từ 1,5 – lần, việc ước lượng liều (g/kg thể trọng, ml/kg thể trọng) mà không theo hướng dẫn sử dụng Theo Carattoli A (2003), nhiều địa phương, chủ hộ lạm dụng việc sử dụng kháng sinh dùng phịng bệnh cho vật ni, bổ sung vào thức ăn chăn ni cho mục đích kích thích sinh trưởng, có mặt thường xuyên nhiều loại kháng sinh lúc bổ sung vào thức ăn nguyên nhân xảy tượng di truyền dọc di truyền ngang tính kháng thuốc gen nằm Plasmid (Resistance) chủng vi khuẩn E.coli Một số kết nghiên cứu trước tác giả tỷ lệ kháng thuốc Salmonella phản ánh quan tâm cộng đồng nhà khoa học loài vi khuẩn gây ngộ độc thực phẩm Theo Tô Liên Thu (2004), nghiên cứu tình trạng kháng kháng sinh vi khuẩn Salmonella E.coli phân lập từ thịt lợn thịt gà vùng đồng Bắc cho kết chủng Salmonella E.coli phân lập từ thịt gà kháng lại loại kháng sinh thông thường Streptomycin, Ampicilin, Tetracyclin với tỷ lệ cao Tác giả Trương Hà Thái cs (2017) cho thấy tỷ lệ kháng kháng sinh Streptomycin 47,3%, Ampicillin 39,8% Do việc lạm dụng kháng sinh chăn nuôi nên tượng kháng kháng sinh ngày trở nên phổ biến, gây khó khăn cho công tác điều trị nhân y thú y Vì vậy, cần có chiến lược quản lý sử dụng thuốc kháng sinh hiệu Để có chiến lược sử dụng kháng sinh cần có số liệu 55 download by : skknchat@gmail.com thống kê đầy đủ trạng kháng kháng sinh Chúng tiến hành kiểm tra mức độ kháng kháng sinh vi khuẩn E.coli phân lập từ mẫu thịt lợn thu thập huyện Luangprabang, Lào Kết trình bày Hình 4.4 Hình 4.5 Mức độ kháng kháng sinh chủng vi khuẩn E.coli phân lập So sánh với kết trước Việt Nam mức độ mẫn cảm với kháng sinh 68 chủng vi khuẩn phân lập Nguyễn Văn Tuyên (2016) cho thấy có 67,65% - 91,18% số lượng chủng mẫn cảm với Endrofloxacin, Nofloxacin Gentamycin, Spectinomycin Các chủng E.coli phân lập kháng lại Tetramaycin (80,88%), Streptomycin (77,94%), Oxacillin (66,18%) Erythromycin (42,65%) Kết có thấp hơn, việc sử dụng kháng sinh thiếu kiểm soát, kết hợp nhiều kháng sinh lúc, đặc biệt việc sử dụng kháng sinh thức ăn chất kích thích tăng trọng đề phòng bệnh cho gia súc gia cầm chăn nuôi Nhưng theo kết nghiên cứu Trương Hà Thái cs (2012) tỷ lệ kháng với kháng sinh Streptomycin 47,3%, theo Bùi Thị Tho (1996), tỷ lệ kháng với Streptomycin 63,64%, theo Nguyễn Viết Không cs (2012) , tỷ lệ kháng với Streptomycin 84,44% 35,56% nghiên cứu chúng tơi có kết thấp 56 download by : skknchat@gmail.com Như vậy, chủng vi khuẩn E.coli phân lập có tỷ lệ kháng cao với kháng sinh: Amoxicilin, Ampicillin, Streptomycin Tetracycline, Gentamycin Đây kháng sinh cũ, sử dụng phổ biến phòng điều trị bệnh, sau thời gian dài sử dụng, vi khuẩn hình thành tính kháng thuốc Vi khuẩn E.coli mẫn cảm với số thuốc kháng sinh neomycin, kanamycin, doxycycline, colistin ssulfa thoxacole Tuy nhiên, khơng có chiến lược sử dụng kháng sinh cách hợp lý sau thời gian kháng sinh bị vi khuẩn kháng lại việc điều trị bệnh cho gia súc, gia cầm khó khăn nhiều 4.3.2 Kết xác định tình trạng kháng kháng sinh vi khuẩn Salmonella phân lập mẫu thịt sở nghiên cứu Vi khuẩn Salmonella phân lập từ chợ địa bàn huyện Luangprabang, tỉnh Luangprabang, Lào tăng sinh môi trường BHB, ủ điều kiện 37°C, thời gian 24 Tiến hành thử nghiệm tính mẫn cảm chủng với 10 loại kháng sinh khác nhau, đại diện cho nhóm kháng sinh Kết thu tổng hợp trình bày bảng 4.9 hình 4.6 Bảng 4.9 Mức độ kháng kháng sinh chủng Salmonella phân lập từ số chợ thuộc huyện Luangprabang, Lào (n=18) STT Tên kháng sinh Mức độ kháng kháng sinh R I S Amoxicillin 12 (66,7%) (22,2%) (11,1%) Ampicillin 14 (77,8%) (11,1%) (11,1%) Doxycycline (11,1%) (22,2%) 12 (66,7%) Gentamycin 10 (55,5%) (27,7%) (16,6%) Kanamycin (27,7%) (16,6%) 10 (55,5%) Streptomycin 15 (83,3%) (11,1%) (5,5%) Tetracycline 11 (61,1%) (16,6%) (22,2%) R: kháng, I: mẫn cảm trung bình, S: mẫn cảm Tác giả Nguyễn Viết Không cs (2012), nghiên cứu tình trạng nhiễm Salmonella điểm giết mổ gia cầm quy mô nhỏ huyện ngoại thành Hà Nội cho biết chủng Salmonella có khả kháng kháng sinh thông thường với tần số khác Ampicillin 62,22% Gentamycin 33,33% So sánh kết nghiên cứu với kết số tác giả 57 download by : skknchat@gmail.com nghiên cứu trước khả mẫn cảm kháng kháng sinh vi khuẩn Salmonella với loại kháng sinh có biến đổi số loại kháng sinh khác Việc lựa chọn sử dụng loại kháng sinh khác việc phịng điều trị bệnh cho vật ni khơng hợp lý dẫn đến tỷ lệ chủng vi khuẩn Salmonella kháng với hay nhiều loại kháng sinh biến động theo thời gian Do việc làm dụng kháng sinh chăn nuôi nên tượng kháng kháng sinh ngày trở nên phổ biến, gây khó khăn cho công tác điều trị nhân y thú y Vì vậy, cần có chiến lược quản lý sử dụng thuốc kháng sinh hiệu Để có chiến lược sủ dụng kháng sinh cần có số liệu thống kê đầy đủ trạng kháng kháng sinh Chúng tiến hành kiểm tra mức dộ kháng kháng sinh vi khuẩn Salmonella phân lập từ mẫu thịt lợn thu thập huyện Luangprabang, tỉnh Luangprabang, Lào, kết trình bày Hình 4.6 Hình 4.6 Mức độ kháng kháng sinh chủng vi khuẩn Salomonella phân lập 58 download by : skknchat@gmail.com PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Qua điều tra phương pháp vấn trực tiếp hộ chăn nuôi cho thấy 100% số hộ sử dụng kháng sinh chăn nuôi lợn với mục đích phịng, trị bệnh kích thích tăng trưởng loại kháng sinh sử dụng phổ biến là: Amoxicilin, Ampicillin, Gentamycin, Kanamycin, Doxycycline, Streptomycin Tetracyclin Trong 45 mẫu kiểm tra lấy số chợ địa bàn huyện Luangprabang cho thấy có 35 mẫu chiếm tỷ lệ 77,77% (35/45) phát thấy vi khuẩn E.coli 37 mẫu chiếm tỷ lệ 82,22% (37/45) phát thấy vi khuẩn Salmonella chủng vi khuẩn E.coli phân lập kháng lại với Ampicilin chiếm tỷ lệ 88,88%, Amoxicilin chiếm tỷ lệ 77,77%, Streptomycin chiếm 66,66%, Tetracycline chiếm 61,11% Gentamycin chiếm 50% vi khuẩn Salmonella kháng lại với Streptomycin chiếm tỷ lệ 83,3%, Ampicilin chiếm tỷ lệ 77,8%, Amoxicillin chiếm 66,7%, Tetracycline chiếm tỷ lệ 61,1% Gentamycine chiếm tỷ lệ 55,5% 5.2 KIẾN NGHỊ - Người chăn nuôi cần lựa chọn loại kháng sinh cơng ty uy tín lớn thị trường, sản phẩm phải có nhãn mác rõ ràng để giảm thiểu tình trạng sử dụng kháng sinh tràn lan khơng có hiệu quả, dẫn đến tình trạng kháng thuốc loại vi khuẩn làm ảnh hưởng nặng nề đến kinh tế sức khỏe cộng đồng - Xây dựng mơ hình giám sát nhiễm vi sinh vật hoá chất độc hại lị mổ Từng bước áp dụng chương trình quản lý, giám sát vệ sinh an toàn thực phẩm nhằm giảm thiểu ô nhiễm vi sinh vật vào thịt 59 download by : skknchat@gmail.com TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu tiếng Việt: Bộ Y Tế (2006) Quyết định 39/2006/QĐ-BYT Bộ Y Tế ngày 13/12/2006 V/v Ban hành quy chế điều tra ngộ độc thực phẩm Bùi Thị Tho (1996) Nghiên cứu tác dụng số thuốc hoá học trị liệu Phytoncyd E.coli phân lập từ bệnh lợn phân trắng, Luận văn PTS Nông nghiệp, Trường Đại học Nông nghiệp I, Hà Nội Bùi Thị Tho (2003) Thuốc kháng sinh nguyên tắc sử dụng kháng sinh chăn nuôi Nhà xuất Hà Nội Cam Thị Thu Hà (2013) Báo cáo luận văn Thạc sĩ Đại học Nông nghiệp Hà Nội Cam Thị Thu Hà Phạm Hồng Ngân (2016) Một số yếu tố nguy ảnh hưởng tới tỷ lệ nhiễm vi khuẩn Salmonella spp thịt lợn bán số chợ thuộc huyện Gia Lâm, thành phố Hà Nội Tạp chí KH Nơng nghiệp Việt Nam 14-2017 1271-1276 Cục An toàn thực phẩm (2012) E.coli bùng phát Hockaido Cục quản lý chất lượng vệ sinh an toàn thực phẩm (2002) An toàn thực phẩm sức khỏe đời sống phát triển kinh tế xã hội NXB Y học, Hà Nội Đào Trọng Đạt, Phan Thanh Phượng Lê Ngọc Mỹ (1995) Bệnh đường tiêu hóa lợn Nhà xuất Nơng nghiệp, Hà Nội Đinh Bích Th Nguyễn Thị Thạo (1995) Nghiên cứu tình hình sử dụng kháng sinh tính nhạy cảm kháng sinh vi khuẩn gây bệnh chăn ni thú y Tạp chí KHKT thú y III (3).tr 36-38 10 Đỗ Hồng Lan Chi, Bùi Lê Thanh Khiết, Nguyễn Thị Thanh Kiều Lâm Minh Triết (2014) Vi sinh vật môi trường Nhà xuất Đại học quốc gia thành phố Hồ Chí Minh 11 Lưu Quốc Toản, Nguyễn Việt Hùng Bùi Mai Hương (2013) Đánh giá nguy thịt lợn nhiễm Salmonella Hà Nội Tạp chí Y học dự phịng XXIII 140 12 Nguyễn Ngọc Tuân, Lê Hữu Ngọc Huỳnh Văn Điểm (2006) Tình hình nhiễm Salmonella phân thịt heo, bò số tỉnh miền Tây Nam Bộ Tạp chí KHKT Nơng Lâm nghiệp 13 Nguyễn Như Thanh (2001) Vi sinh vật Thú y Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội 14 Nguyễn Như Thanh, Nguyễn Bá Hiên Trần Thị Lan Hương (1997) Giáo trình vi sinh vật thú y NXB Nông Nghiệp, Hà Nội 60 download by : skknchat@gmail.com 15 Nguyễn Thị Ngà (2011) Nghiên cứu tính kháng kháng sinh chủng Salmonella E coli gây bệnh phân lập từ lợn số trang trại lị mổ khu vực phía Bắc Luận văn Thạc sĩ Nông nghiệp, trường ĐH Nông nghiệp Hà Nội 16 Nguyễn Viết Không Phạm Thị Ngọc (2012) Ô nhiễm Salmonella điểm giết mổ gia cầm qui mô nhỏ huyện ngoại thành Hà Nội.Tạp chí Nơng nghiệp phát triển nơng thơn tr 60-67 17 Nguyễn Vĩnh Phước (1976) Các phương pháp bảo quản thú sản thực phẩm Nhà xuất Đại học Trung học chuyên nghiệp, Hà Nội Tập III 18 Nguyễn Xuân Thành, Vũ Hoàn, Nguyễn Thị Minh Hồng Hải (2005) NXB Nơng nghiệp, Hà Nội 19 Nguyễn Khánh Linh (2011) An toàn thực phẩm Hệ vi khuẩn đường ruột, GV Khoa Khoa học ứng dụng Trường ĐH Tơn Đức Thắng, Số 14-15 20 Nguyễn Hữu Hịa, Bài giảng Vệ Sinh An Toàn Thực Phẩm Trường Đại Học Nông Lâm Thái Nguyên, 2016 21 Phạm Khắc Hiếu Bùi Thị Tho (1999) Một số kết nghiên cứu tính kháng thuốc vi khuẩn gây bệnh thú y Kết nghiên cứu khoa học kỹ thuật Khoa Chăn nuôi - Thú y (1996-1998) Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 22 Phạm Hồng Sơn (2008), Giáo trình Vi sinh vật học thú y, trường Dại học Huế, 2008 23 Tạp chí Y học Dự phịng (2016), Thực trạng ngộ độc thực phẩm độc tố tự nhiên Việt Nam giai đoạn 2010-2014 XXVI (I) 24 TCVN 4829 : 2005 Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn nuôi - Phương pháp phát Salmonella đĩa thạch, 25 TCVN 4833 - 1:2002 Thịt sản phẩm thịt - lấy mẫu chuẩn bị mẫu thử; Phần I 26 TCVN 4833 - 2:2002 Thịt sản phẩm thịt - lấy mẫu chuẩn bị mẫu thử; Phần II 27 Tơ Liên Thu (2004) Tình trạng kháng kháng sinh vi khuẩn Salmonella E.coli phân lập từ thịt lợn thịt gà vùng đồng Bắc Tại chí khoa học kỹ thuật thú y XI (4) tr.29-36 28 Trần Thị Hương Giang Huỳnh Thị Mỹ Lệ (2012) Xác định tỷ lệ nhiễm độc lực vi khuẩn Escherichia coli phân lập từ thịt (lợn, bò, gà) số huyện ngoại thành Hà Nội Tạp chí khoa học phát triển.10 (2) tr 295 - 300 29 Trần Xuân Đông (2002) Khảo sát thực trạng hoạt động giết mổ gia súc, số tiêu vệ sinh thú y sở giết mổ địa bàn thành phố Hạ Long thị xã tỉnh Quảng Ninh Luận văn thạc sĩ nông nghiệp, ĐHNN Hà Nội 61 download by : skknchat@gmail.com 30 Trương Hà Thái, Nguyễn Thị Lan, Takuya Hirai Ryoji Yamaguchi (2012) Antimicrobial resistance in Salmonella serovars isolated from meat shops at the markets in North Vietnam 31 Trương Hà Thái, Phạm Hồng Ngân, Chu Thị Thanh Hương Cam Thị Thu Hà (2017) Khả kháng kháng sinh E.coli Salmonella phân lập từ trứng gia cầm bán số chợ địa bàn thành phố Hà Nội Tạp chí khoa học nơng nghiệp Việt Nam 15 (6) tr 770 -775 32 Trương Nam Hải (2011) Salmonella: Kít chẩn đốn vacxin sở protein tái tổ hợp Nhà xuất khoa học tự nhiên công ngệ Hà Nội II Tài liệu tiếng Anh: 33 Angkititrakul S., Chomvarin, Chomvarin, C., Chaita, T., Kanistanon, K., Waethewutajarn and S, (2005) Epidemiology of antimicrobial resistance in Salmonella isolate from pork, chicken meat and humans in Thailand 34 Bounnanh Phantouamath, Noikaseumsy Sithivong, Sithat Insisiengmay, Naomi Higa (2003) Incidence of Escherichia coli with genes causing diarrhea: A study in Lao People's Democratic Republic 35 Brody J.E (2001) Studies Find Resistant Bacteria The New York Times October 18 2001, I screen cited 2004 May 36 Carattoli A (2003) Plasmid-mediated antimicrobial resistance in Salmonella enterica Current issues in molecular biology 113-122 37 CIRAD (2006) Training Course Salmonella 38 DeWaal C.S and N Robert (2005b) South East Asian Region, Food Safety Around the World, Washington, D.C 14-16 39 Dias de Oliveria S., F Siqueira Flores, L.R Dos Santos and A Branddelli (2005) Antimicrobial resistance in Salmonella entiritidis strains isolate from broiler carcasses, food, human and poultry – relate sample 40 Erhard T (1983) Plasmid parttern of Salmonella typhimurium strain 69-77 41 FDA (1983) Foodborne Pathogenic Microorganisms and Natural Toxins Handbook Staphylococus aureus 42 Finlay B.B and Falkow (1988) The early dynamic response of the calf ileal epithelium to Salmonella typhimurium Vet Pathol 43 FAO / WHO Regional Conference on Food Safety for Asia and the Pacific, Seremban, Malaysia, 24-27 May 2004) 62 download by : skknchat@gmail.com 44 Global Journal of Antimicrobial Resistance (2013) studied the prevalence of Salmonella in meat in retail markets in Pakse, Champasak Province, Laos and antibiotic susceptibility of isolated strains 45 Kim H.B, H Beak, Y.H Jang, S.C, Suk Chan Jung, A Kima and N.H Choe (2011) Prevalence and antimicrobial resistance of Salmonella spp And Escherichia coli isolated from pigs at slaughterhouses in Korea African Journal of Microbiology Research 5(7) 823-830 46 Khampheuy Munthalath, Masaaki Iwanaka and Sithat Insisiengmay (1997), The causes of diarrhea and healthy carriers in Vientiane, Lao PDR 47 Luca Guardabassi, Stefan Schwarz and David H Loyd (2004) Journal of Antimicrobial Chemotherapy: pet animal as reservoirs of antimicrobial resistant bacteria 48 Ministry of Information, Culture and Tourism, Tourism Development Department, Statistics of tourists visiting Luangprabang in 2017 49 Ministry of Agriculture and Forestry, Department of Livestock and Fisheries, statistics of pork consumption in Laos PDR, 2018 50 Nowak B.T., V Müffling and S Chaunchom and J Hartung (2007) Salmonella contamination in pigs at slaughter and on the farm: A field study using an antibody ELISA test and a PCR technique International Journal of Food Microbiology 115 259-267 51 Pulsrikarn C., P Chaichana, S Pornruangwong, Y Morita and S Y a Boonnmar (2012) Serotype, Antimicrobial Susceptibility, and Genotype of Salmonella Isolates from Swine and Pork in Sa Kaew Province, Thailand 52 Phouth Inthavong, Lertrak Srikitjakarn, Moses Kyule, Karl-Hans Zessin, Maximillian Baumann, Bounlom Douangngeun and Reinhard Fries (2006) examine infections at several slaughterhouses in Vientiane, Laos 53 Phawin Phadungthot (2004), Bacterial pathogens in food, Veterinary medicine branch, Veterinary science public health, Chiang Mai University, Thailand 54 Quinn P.J, M.E Carter, B Makey and G.R Carter (2004) Clinical veterinary microbiology Wolfe Pulishing London WC1 H9LB England 209-236 55 Reid C.M (1991) Escherichia coli - Microbiological methods for the meat industry, New Zealand Public 63 download by : skknchat@gmail.com 56 Rattanaphone Phetsouvanh, Yukata Midorikawa and Satoshi Nakamura (1999), The Seasonal variation in the Microbial Agents implicated in the etiology of Diarheal diseases among children in Laos PDR 57 Selbitz H.J (1995) Grundsaetzliche Sicherheisanfornderungen bein Einsatz von lebendimpfstoffen bei lebensmittelliefernden Tieren Berl Much, Tieruzl Wschr 58 Soumalee Bounma, Khanchana Markvichit, Hirokasu Kimura and Yukio Morita (2008) Salmonella prevalence in slaughtered cattle and pigs and antimicrobial susceptibility in Vientiane, Lao PDR 59 Soumalee Bounma, Yukio Morita, Phatharaphron Chaichana, Thongsay Sychanh and Thongdam khounsy (2013) Salmonella prevalence in meat at retail markets in Pakse, Champasak province, Laos and antibiotic susceptibility of isolated strains 60 Tetsu Yamashiro, Naomi Higa, Noboru Nakasone, Praseunthong Vongsanith (1998) Study the etiology of diarrhea patients in Vientiane, Lao PDR 61 Wayne P (2014) Clinical and Laboratory Standards Institute: Performance standards for antimicrobial susceptibility testing: Twenty-fourth informational supplement, M100-S24 Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) 62 WHO/SEARO (2008) Nutrition and Food Safety in the South-East Asia Region, Report and Documentation of the Technical Dicussion, New Delhi 63 Wise R Hart, O C (1999) Antimicrobial resistance is a major threat to public health Bristish medical jounal 317 64 download by : skknchat@gmail.com PHụ LụC Phụ lục Sơ đồ phân lập vi khuẩn E coli Kỹ thuật đếm số có xác suất lớn 6846:2007 (ISO 7251:2005) 25 g thịt + 225 ml nước sinh ml ml (+) ml ml (+) ml MacConkey ml (+) ml nước sinh lý EMB Brilliant Green 65 download by : skknchat@gmail.com Thử nghiệm IMViC Phụ lục Sơ đồ phân lập vi khuẩn Salmonella TCVN 4829:2005 (ISO 6579:2002) 25 g mẫu + 225 ml BPW ủ 37°C/18-24h Tăng sinh RV Muller Kauffmann ủ 42°C/18-24h ủ 42°C/18-24h BGA XLT4 ủ 37°C/24h ủ 37°C/24h Tăng sinh chọn lọc Phân lập nhận diện Khẳng định Thử nghiệm H2S, urea, Indol 66 download by : skknchat@gmail.com Phụ lục Yêu cầu vệ sinh tiêu vi sinh vật thịt theo TCVN 7046: 2009 Tên vi sinh vật Mức tối đa 1.Tổng số vi khuẩn hiếu khí, CFU grram sản phẩm 105 2.Colifrom, CFU gram sản phẩm 102 3.E.coli, CFU gram sản phẩm 102 4.Staphylococcus aureus, CFU gram sản phẩm 102 5.Clostridium perfrigens CFU gram sản phẩm 102 6.Salmonella 25g sản phẩm Không cho phép Đối với thịt xảy nhỏ 106 Phụ lục Một số loại kháng sinh sủ dụng địa bàn huyện Luangprabang, tỉnh Luangprabang, lào 67 download by : skknchat@gmail.com Phụ lục Mẫu thu thập số chợ thuộc địa bàn huyện Luangprabang, tỉnh Luangprabang, Lào Phụ lục Thịt bày bán chợ thuộc huyện Luangprabang, tỉnh Luangprabang, Lào 68 download by : skknchat@gmail.com ... vi? ??t tắt Nghĩa tiếng Vi? ??t BGA Brilliant green agar BhI Brain Heart Infusion E coli Escherichia coli EHEC Enterohaemorrhagic E Coli EIEC Enteroinvasive E Coli EMB Eosin – Methylene Blue EPEC Enteropathogenic... kháng sinh vi khuẩn E Coli Salmonella phân lập từ thịt lợn huyện Luangprabang, tỉnh Luangprabang, Lào? ?? 1.2 MỤC ĐÍCH CỦA ĐỀ TÀI - Xác định tỷ lệ nhiễm E. coli Salmonella thịt lợn bán chợ thuộc huyện. .. LUẬN VĂN Tác giả: Phongsavath SAYKOSON Tên Luận Văn: ? ?Nghiên cứu xác định tỷ lệ nhiễm tình trạng kháng kháng sinh vi khuẩn E coli Salmonella phân lập từ thịt lợn huyện Luangprabang, tỉnh Luangprabang,