(LUẬN văn THẠC sĩ) nghiên cứu công nghệ đông lạnh bảo tồn tinh dịch chó malinois

HỌC VIỆN NƠNG NGHIỆP VIỆT NAM ĐẶNG ĐÌNH THÀNH NGHIÊN CỨU CƠNG NGHỆ ĐƠNG LẠNH BẢO TỒN TINH DỊCH CHĨ MALINOIS Chuyên ngành: Mã số: Chăn nuôi 60.62.01.05 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Bá Mùi TS Đỗ Văn Thu NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP - 2016 download by : skknchat@gmail.com LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan chưa dùng để bảo vệ lấy học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cám ơn, thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng năm 2016 Tác giả luận văn Đặng Đình Thành i download by : skknchat@gmail.com LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới hai người thầy PGS TS Nguyễn Bá Mùi TS Đỗ Văn Thu người hướng cho ý tưởng khoa học, tận tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho hồn thành luận văn Tơi xin trân trọng cảm ơn tập thể phòng Sinh học tế bào sinh sản, Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam tạo điều kiện cho tơi hồn thành khóa học luận văn Tôi xin trân trọng cảm ơn tập thể cán công nhân viên Cục Cảnh sát quản lý, huấn luyện sử dụng động vật ngiệp vụ (K204) - Bộ Cơng an giúp đỡ tơi q trình thực nghiên cứu Tôi xin cảm ơn tất thầy cô giáo Học viện Nông nghiệp Việt Nam dạy dỗ, chia sẻ, động viên, giúp vượt qua khó khăn để hồn thành tốt khóa học nghiên cứu Cuối cùng, tơi xin tỏ lịng biết ơn đến bố mẹ, gia đình, bè bạn, người ln bên tơi, động viên, góp ý tạo điều kiện tốt cho suốt thời gian học tập nghiên cứu Hà Nội, ngày tháng năm 2016 Tác giả luận văn Đặng Đình Thành ii download by : skknchat@gmail.com MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục từ viết tắt vi Danh mục bảng vii Danh mục hình viii Danh mục sơ đồ ix Trích yếu luận văn x Thesis abstract xi Phần Mở đầu 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.3 Ý nghĩa khoa học đề tài 1.2 Mục tiêu Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Tổng quan chó Malinois 2.2.1 Tinh 2.2 2.2.2 2.2.3 2.2.4 2.3 2.3.1 2.3.2 2.3.3 2.3.4 2.3.5 2.3.6 Tinh dịch chó Tinh trùng Hình thái- cấu tạo tinh trùng Đặc tính tinh trùng chó Một số tiêu sinh học tinh dịch chó Lượng tinh dịch (Vml) Hoạt lực tinh trùng (A%) Nồng độ tinh trùng (C) Tinh trùng kỳ hình (K%) Tổng số tinh trùng tiến thẳng lần lấy tinh (V.A.C) 10 Tỷ lệ tinh trùng sống (Ls%) 10 iii download by : skknchat@gmail.com 2.4 Đặc điểm lý hoá tinh dịch chó 11 2.4.2 Áp lực thẩm thấu (posm) 11 2.4.1 2.4.3 2.4.4 2.4.5 2.5 2.6 2.7 Tỷ trọng tinh dịch (d) 11 Năng lực đệm tinh dịch (β) 11 Độ nhớt tinh dịch.(η) 11 pH tinh dịch 11 Nguyên tắc xây dựng môi trường đơng lạnh bảo tồn tinh dịch chó 12 Nghiên cứu môi trường đông lạnh bảo tồn tinh dịch chó 13 Thụ tinh nhân tạo cho chó 15 2.7.1 Sơ lược q trình giao phối phóng tinh 15 2.7.3 Thụ tinh nhân tạo 17 2.7.2 2.8 Các chu kỳ động dục chó 16 Tình hình phát triển sử dụng chó malinois Việt Nam 19 Phần Vật liệu phương pháp nghiên cứu 20 3.1 Địa điểm nghiên cứu 20 3.3 Đối tượng nghiên cứu 20 3.2 3.4 3.4.1 3.4.2 3.4.3 3.5 3.5.1 3.5.2 3.5.3 3.5.4 Thời gian nghiên cứu 20 Nội dung nghiên cứu 21 Đánh giá số tiêu sinh học tính chất lý hóa học tinh dịch chó Malinois 21 Nghiên cứu công nghệ đơng lạnh tinh dịch chó Malinois ứng dụng sản xuất tinh chó đơng lạnh bảo tồn -196C 21 Sản xuất tinh chó Malinois đơng lạnh 21 Phương pháp nghiên cứu 22 Phương pháp lấy tinh 22 Phương pháp nghiên cứu sinh học tinh dịch chó 22 Nghiên cứu môi trường bảo tồn 23 Phương pháp xử lý số liệu 29 Phần Kết vào thảo luận 30 4.1 4.1.1 Sinh học tinh dịch chó Malinois 30 Một số đặc điểm sinh học tinh dịch chó Malinois 30 iv download by : skknchat@gmail.com 4.1.2 4.2 4.2.1 4.2.2 4.2.3 4.2.4 4.2.5 4.2.6 4.2.7 4.2.8 4.2.9 4.3 Tính chất lý hóa tinh dịch chó Malinois 35 Nghiên cứu hồn thiện cơng nghệ đơng lạnh tinh dịch chó ứng dụng sản xuất tinh chó Malinois đơng lạnh bảo tồn -196c 36 Tính chất hóa - lý số mơi trường đông lạnh tinh dịch 36 Ảnh hưởng glycerol dimethyl sulfoxide (DMSO) lên chất lượng tinh đông lạnh 36 Ảnh hưởng nồng độ glycerol lên chất lượng tinh đông lạnh 38 Ảnh hưởng thời điểm bổ sung phần mơi trường có glycerol lên chất lượng tinh đơng lạnh 40 Ảnh hưởng thời gian ủ tinh dịch trước đông lạnh lên phẩm chất tinh đông lạnh 41 Ảnh hưởng nhiệt độ đông lạnh lên chất lượng tinh đông lạnh 43 Ảnh hưởng tốc độ giải đông lên phẩm chất tinh đông lạnh 44 Kết sản xuất đơng lạnh tinh dịch chó 46 Kết kiểm tra định kỳ chất lượng tinh chó Malinois đơng lạnh 49 Kết thụ tinh nhân tạo cho chó Malinois 51 Phần Kết luận kiến nghị 53 5.1 5.2 Kết luận 53 Kiến nghị 53 Tài liệu tham khảo 54 Phụ lục 57 v download by : skknchat@gmail.com DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Chữ viết tắt   A C D Nghĩa tiếng Việt Độ nhớt Năng lực đệm Hoạt lực tinh trùng Nồng độ tinh trùng Tỷ trọng DMSO Dimethyl sulfoxide OEP Orvus ES Paste K Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình Posm Áp lực thẩm thấu TTNT Thụ tinh nhân tạo SL V V.A.C Tỷ lệ tinh trùng sống Lượng tinh dịch Tổng số tinh trùng tiến thẳng vi download by : skknchat@gmail.com DANH MỤC BẢNG Bảng 4.1 Một số tiêu sinh học tinh dịch chó Malinois (n=54) 31 Bảng 4.2 Tính chất lý hóa tinh dịch chó Malinois (n= 54) 35 Bảng 4.3 Một số tính chất hố - lý môi trường đông lạnh tinh dịch (n=20) 36 Bảng 4.4 So sánh ảnh hưởng glycerol DMSO lên chất lượng tinh dịch (n=54) 37 Bảng 4.5 Ảnh hưởng nồng độ glycerol môi trường lên chất lượng tinh đông lạnh (n=54) 39 Bảng 4.6 Ảnh hưởng thời điểm bổ sung mơi trường có glycerol lên chất lượng tinh chó đơng lạnh (n=30) 40 Bảng 4.7 Ảnh hưởng thời gian ủ tinh dịch trước đông lạnh lên phẩm chất tinh đông lạnh (n=30) 42 Bảng 4.8 Ảnh hưởng nhiệt độ đông lạnh lên chất lượng tinh đông lạnh (n=30) 43 Bảng 4.9 Ảnh hưởng tốc độ giải đông (nhiệt độ thời gian) lên chất lượng tinh đông lạnh – giải đông (n=40) 44 Bảng 4.10 Hoạt lực tinh trùng trình đơng lạnh (n=30) 47 Bảng 4.11 Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình trình đơng lạnh (n=30) 48 Bảng 4.12 Tỷ lệ sống tinh trùng q trình đơng lạnh (n=30) 49 Bảng 4.13 Hoạt lực tinh trùng tinh đông lạnh thời gian bảo tồn 1960C (n=16) 49 Bảng 4.14 Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình tinh đơng lạnh thời gian bảo tồn 1960C (n=16) 50 Bảng 4.15: Kết thụ tinh nhân tạo tinh chó Malinois đơng lạnh 52 vii download by : skknchat@gmail.com DANH MỤC HÌNH Hình 3.1 Chó Malinois đực tham gia nghiên cứu 20 Hình 4.1 Tinh trùng sống - chết 33 Hình 4.2 Tinh trùng kỳ hình chó Malinois 34 Hình 4.3 Ảnh hưởng chất bảo vệ lạnh lên hoạt lực tinh trùng sau đơng lạnh 38 Hình 4.4 Ảnh hưởng nồng độ glycerol lên hoạt lực tinh trùng trước sau đông lạnh 39 Hình 4.5 Ảnh hưởng thời điểm bổ sung mơi trường có glycerol lên hoạt lực tinh trùng sau đơng lạnh 41 Hình 4.6 Ảnh hưởng thời gian ủ tinh dịch trước đông lạnh lên hoạt lực tinh trùng 42 Hình 4.7 Ảnh hưởng nhiệt độ đông lạnh lên hoạt lực tinh trùng 44 viii download by : skknchat@gmail.com DANH MỤC SƠ ĐỒ Sơ đồ 3.1 Quy trình thụ tinh nhân tạo cho chó sử dụng tinh đơng lạnh dạng cọng rạ 29 Sơ đồ 4.1 Quy trình đơng lạnh tinh dịch chó Malinois 46 ix download by : skknchat@gmail.com Tinh đông lạnh cọng rạ giải đông theo hai phương pháp (giải đông chậm giải đông nhanh) Giải đông chậm: nhúng tinh cọng rạ vào nước ấm 370C khoảng thời gian 15 giây, 30 giây, 60 giây Giải đông nhanh: nhúng tinh đơng lạnh vào nước nóng 700C khoảng thời gian giây Kết ảnh hưởng phương pháp giải đông tốc độ giải đông lên phẩm chất tinh trùng sau đông lạnh giải đông thể bảng Kết cho thấy: phương pháp giải đơng tinh đơng lạnh ảnh hưởng khơng có ý nghĩa lên hoạt lực tinh trùng sau đông lạnh Tuy nhiên, thực tế nên chọn phương pháp giải đông chậm, phương pháp có độ an tồn cao phương pháp giải đông nhanh Các phương pháp giải đơng tinh đơng lạnh ảnh hưởng khơng có ý nghĩa lên tỷ lệ tinh trùng kỳ hình hoạt lực tinh trùng sau đông lạnh Tốc độ giải đông tinh đơng lạnh có ảnh hưởng lên tỷ lệ tinh trùng sống sau đông lạnh - giải đông Giải đông tinh đông lạnh nhiệt độ 370C, khoảng thời gian 30 giây 60 giây giải đông nhiệt độ 70oC thời gian giây cho tỷ lệ tinh trùng sống cao có ý nghĩa thống kê (P0,05) Cụ thể, chó Ken, tỷ lệ tinh trùng kỳ hình trung bình giải đông sau đông lạnh 24,27% Sau 03 tháng bảo tồn, tỷ lệ 24,59%, sau tháng 24,55% Tương tự chó cịn lại, khác tỷ lệ tinh trùng kỳ hình sau đơng lạnh – giải đơng khác khơng có nghĩa thống kê Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình sau đơng lạnh – giải đơng chó thí nghiệm khác khơng có ý nghĩa thống kê (P>0,05) 50 download by : skknchat@gmail.com Các nghiên cứu rằng, chất lượng tinh trùng bị ảnh hưởng lớn yếu tố thời gian khai thác, chất lượng giống môi trường bảo quản Mơi trường bảo quản có vai trị quan trọng việc trì chất lượng tinh dịch thời gian bảo tồn, đảm bảo khả thụ tinh tinh trùng sau giải đông Ở nghiên cứu này, tiến hành giải đông tinh đông lạnh nhiều thời điểm khác nhau, kết cho thấy tỷ lệ tinh trùng kỳ hình khác khơng có ý nghĩa tinh dịch giải đơng thời điểm sau đông lạnh sau 04 tháng bảo quản Điều bước đầu cho phép kết luận, môi trường bảo quản sử dụng phù hợp cho việc đông lạnh bảo quản tinh dịch chó Malinois nitơ lỏng -1960C 4.3 KẾT QUẢ THỤ TINH NHÂN TẠO CHO CHĨ MALINOIS Chúng tơi tiến hành sử dụng tinh đông lạnh dạng cọng rạ chó Ken, Zon, Fido, Miki bảo tồn nitơ lỏng -1960C để thụ tinh nhân tạo cho 10 chó giống Cục Cảnh sát quản lý, huấn luyện sử dụng động vật nghiệp vụ (K204) - Bộ Công an Tỉ lệ mang thai đạt 60%, số sinh 44 tỉ lệ đực/cái 22/20 Số chó trung bình con/lứa Khối lượng sơ sinh chó đạt trung bình 352g/con, tương đương với khối lượng sơ sinh chó sinh phối giống tự nhiên (350g/kg) Có chó khơng mang thai, nhiên, việc chó khơng mang thai có nhiều ngun nhân gây Trong khn khổ đề tài, chúng tơi khơng có đủ điều kiện thời gian để đánh giá xác ngun nhân khơng mang thai chó Các tinh cọng rạ sử dụng cho thụ tinh có chất lượng đồng đều, hoạt lực tinh trùng sau giải đông đạt 38 - 40% Sử dụng cọng rạ tích 0,25 ml, phối cọng rạ/một lần (tương đương 50 x106 tinh trùng) phối lần Khoảng cách thời gian lần phối 48 Trong nghiên cứu này, sử dụng hầu hết tinh cọng rạ có thời gian bảo tồn từ 20 ngày đến 70 ngày Kết cho thấy tinh trùng chó Malinois bảo quản dạng đơng lạnh nitơ lỏng có chất lượng cao ổn định theo thời gian Kết nghiên cứu có ý nghĩa lớn, thành cơng nghiên cứu cơng nghệ đơng lạnh tinh chó Malinois giúp cho việc bảo tồn nguồn gen q chó có chất lượng tốt 51 download by : skknchat@gmail.com Bảng 4.15 Kết thụ tinh nhân tạo tinh chó Malinois đông lạnh Tên đực giống Hoạt lực tinh trùng sau giải đông Liều phối (Cọng rạ Ken 40 02 Zon 40 Ken Zon Fido 40 40 38 Chó giống Ngày phối giống lần Ngày phối giống lần Ngày đẻ Đực Igor 05.01 2016 07.01 2016 09.03.2016 02 Monika 15.01 2016 17.01 2016 Không chửa 02 Melisa 30.01.2016 Không chửa 02 Benzi 13.02 2016 15.04.2016 0,25 ml) 02 02 Daisy Lady 27.01.2016 28.01.2016 29.01.2016 375 28.03.2016 336 10.04.2016 381 394 22 20 352 Miki 40 02 Mony 12.02 2016 14.02 2016 Không chửa 02 Sera 25.02.2016 27.02.2016 Không chửa Fido 40 40 02 Lusa 11.02 2016 16.02.2016 Tổng số: 42 10.02.2016 11.03.2016 02 Fido 08.02.2016 10.01 2016 18.02.2016 (g) (20) 38 39 Elsa 08.01 2016 Cái Khối lượng sơ sinh trung bình (22) Ken Miki Số 17.04.2016 52 download by : skknchat@gmail.com 4 320 306 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN - Đánh giá số tiêu sinh học tính chất lý - hóa học tinh dịch chó Malinois Lượng tinh dịch chó 1,94 ml, hoạt lực tinh trùng tiến thẳng 72,86%, nồng độ tinh trùng 245,53 triệu/ml, tỷ lệ tinh trùng sống 82,70%, tỷ lệ tinh trùng kỳ hình 18,85%, pH 6,71, Áp lực thẩm thấu 344,12 miliosmol/kg, lực đệm 1314,19, tỷ trọng 1,03, độ nhớt 3,12 - Xây dựng thành công môi trường đơng lạnh tinh dịch chó Malinois Đồng thời nghiên cứu ảnh hưởng số yếu tố ảnh hưởng đến phẩm chất tinh dịch chó Malinois sau đơng lạnh – giải đông: bổ sung chất bảo vệ lạnh glyceron 6,5 - 7% vào môi trường đông lạnh, thời gian ủ tinh dịch khoảng - - Đã sản xuất bảo tồn 219 liều tinh chó Malinois đơng lạnh cọng rạ (hoạt lực tinh trùng sau đơng lạnh 38 - 40%) Tinh chó đơng lạnh có chất lượng ổn định thời gian bảo tồn nitơ lỏng -1960C - Thụ tinh nhân tạo cho chó Malinois sử dụng tinh đơng lạnh bảo tồn 1960C Tỷ lệ thụ thai đạt 60%, số chó sinh 42 , số trung bình con/ổ, tỷ lệ đực 22/20, khối lượng sơ sinh chó 352g/con 5.2 KIẾN NGHỊ Cho áp dụng công nghệ đông lạnh tinh dịch TTNT chó Malinois vào thực tiễn sản xuất 53 download by : skknchat@gmail.com TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu nước Đỗ Văn Thu (2010) Ứng dụng công nghệ bảo tồn tinh dịch thụ tinh nhân tạo chó để nhân giống bảo tồn số giống chó nghiệp vụ ngành Cơng an Báo cáo tổng kết đề tài cấp Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam Đỗ Văn Thu Nguyễn Anh (2008) Nghiên cứu số đặc điểm sinh học tinh dịch chó nghiệp vụ phục vụ cho cơng tác bảo tồn thụ tinh nhân tạo Tạp chí sinh học 03(30) tr 169-175 Đỗ Văn Thu, Nguyễn Anh Nguyễn Tuấn Anh (2008) Nghiên cứu mơi trường pha lỗng tinh dịch chó bảo tồn 5oC Tạp chí sinh học 01(30) tr 87-93 Đỗ Văn Thu, Đồn Việt Bình, Lê Thành Đô, Lê Thị Huệ, Trần Xuân Khôi Võ Thị Ninh (2013) Nghiên cứu ảnh hưởng Glycerol ethylene glycol lên chất lượng tinh chó đơng lạnh bảo tồn -196oC Báo cáo hội nghị khoa học công nghệ sinh học tồn quốc, tr 917-921 Trần Xn Khơi (2013) Nghiên cứu hồn thiện cơng nghệ đơng lạnh tinh dịch chó Berger Luận văn Thạc sỹ, Đại học Thái Nguyên Tài liệu nước Andersen (1975) Insermination with frozen dog semen based on a new insermination technique Zuchthygien Vol 10 pp 1-4 Cardoso Rde C., A R Silva, D C Uchoa and L D da Silva (2003) Cryopreservation of canine semen using a coconut water extender with egg yolk and three different glycerol concentrations Theriogenology Vol 59(3-4) pp 743751 Chemineau and Y Caynie (1991) Training manual on artificial insemination in sheepand goats FAO Animal production and Health 83 – Rome, Italia Farstad W and K A Berg (1989) Factors influencing the success rate of artificial insemination with frozen semen in the dog Journal of reproduction and fertility Supplement Vol 39 pp 289-292 10 Farstad W (2000) Assisted reproductive technology in canid species Theriogenology Vol 53 (1) pp 175-186 11 Hermansson U and C Linde-Forsberg (2006) Freezing of stored, chilled dog spermatozoa Theriogenology Vol 65 pp 584-593 54 download by : skknchat@gmail.com 12 Linde-Forsberg C and M Forsberg (1993) Results of 527 controlled artificial inseminations in dogs Journal of reproduction and fertility Supplement Vol 47 pp 313-323 13 Linde-Forsberg C., B Strom Holst and G Govette (1999) Comparison of fertility data from vaginal vs intrauterine insemination of frozen-thawed dog semen: a retrospective study Theriogenology Vol 52(1) pp 11-23 14 Linde-Forsberg C (1991) Achieving canine pregnancy by using frozen or chilled extended semen Vet Clin North Am Small Anim Pract Vol 21(3) pp 467-485 15 Nizanski W., A Dubiel, W Bielas and G J Dejneka (2001) Effects of three cryopreservation methods and two semen extenders on the quality of dog semen after thawing Journal of reproduction and fertility Supplement Vol 57 pp 365-369 16 Pena A and C B Linde-Forsberg (2000) Effects of spermatozoal concentration and post-thaw dilution rate on survival after thawing of dog spermatozoa Theriogenology Vol 54(5) pp 703-718 17 Pinto C R., D L Paccamonti and B E Eilts (1999) Fertility in bitches artificially inseminated with extended, chilled semen Theriogenology Vol 52(4) pp 609-616 18 Platz C C and S W Seager (1977) Successful pregnancies with concentrated frozen canine semen Lab Anim Sci Vol 27(6) pp 1013-1016 19 Rijsselaere T., A Van Soom, D Maes, A de Kruif (2002) Effect of centrifugation on in vivo survival of fresh diluted canine spermatozoa Theriogenology Vol 57 pp 1669-1681 20 Rohloff D., C Laiblin and S Heidrich (1978) Cryoprotective ability of glycerin and DMSO in the deep freezing of dog sperm Berl Munch Tierarztl Wochenschr Vol 91(2) pp 31-33 21 Rota A., A Frishling, I Vannozzi, F Camillo and S Romagnoli (2001) Effect of the inclusion of skimmed milk in freezing extenders on the viability of canine spermatozoa after thawing Journal of reproduction and fertility Supplement Vol 57 pp 377-381 22 Rota A., B Strurm and C Linde-Forsberg (1995) Effects of seminal plasma and three extenders on canine semen stored at 40C Theriogenology Vol 44 pp 855-900 23 Salisbury G W W (1978) Physiology of reprodution and artificial insemination of cattle, Second Edition, Fracisco WW H Framan and Company Samsuddin M, Y Amiri and M.M.U Bhuiyan 24 Seager S W and C C Platz (1977) Artificial insemination and frozen semen in the dog Vet Clin North Am Vol 7(4) pp 757-764 55 download by : skknchat@gmail.com 25 Silva A R., R C Cardoso, D C Uchoa and L D Silva (2003) Quality of canine semen submitted to single or fractionated glycerol addition during the freezing process Theriogenology Vol 59(3-4) pp 821-829 26 Silva L D., K Onclin, B Lejeune and J P Verstegen (1996) Comparisons of intravaginal and intrauterine insemination of bitches with fresh or frozen semen Vet Rec Vol 138(7) pp 154-157 27 Sirivaidyapong S., P Ursem, M M Bevers and B Colenbrander (2001) Effect of prostatic fluid on motility, viability and acrosome integrity of chilled and frozenthawed dog spermatozoa Journal of reproduction and fertility Supplement Vol 57 pp 383-386 28 Thomassen R., W Farstad, A Krogenaes, J A Fougner and K A Berg (2001) Artificial insemination with frozen semen in dogs: a retrospective study Journal of reproduction and fertility Supplement Vol 57 pp 341-346 29 Tsutsui T., T Tezuka, Y Mikasa, H Sugisawa, N Kirihara, T Hori and E Kawakami (2003) Artificial insemination with canine semen stored at a low temperature The Journal of Veterinary Medical Science Vol 65(3) pp 307-312 30 Yildiz C., A Kaya, M Aksoy and T Tekeli (2000) Influence of sugar supplementation of the extender on motility, viability and acrosomal integrity of dog spermatozoa during freezing Theriogenology Vol 54(4) pp 579-585 56 download by : skknchat@gmail.com PHỤ LỤC Một số hình ảnh q trình nghiên cứu Chó Malinois tham gia nghiên cứu Chuẩn bị môi trường Khai thác tinh dịch 57 download by : skknchat@gmail.com Kiểm tra chất lượng tinh dịch Đông lạnh tinh dịch Giải đông kiểm tra chất lượng tinh dịch 58 download by : skknchat@gmail.com Thụ tinh nhân tạo cho chó Malinois Chó mang thai nhờ TTNT Chó sinh nhờ TTNT 59 download by : skknchat@gmail.com ... hành nghiên cứu đề tài ? ?Nghiên cứu công nghệ đông lạnh bảo tồn tinh dịch chó Malinois? ?? 1.2 MỤC TIÊU Xây dựng công nghệ đông lạnh bảo tồn tinh dịnh chó Malinois, phục vụ thụ tinh nhân tạo bảo tồn. .. dịch chó Malinois - Nghiên cứu cơng nghệ đơng lạnh tinh dịch chó Malinois ứng dụng sản xuất tinh chó đơng lạnh bảo tồn -196C - Sản xuất tinh chó Malinois đơng lạnh Phương pháp nghiên cứu - Theo... môi trường đông lạnh phù hợp với tinh dịch chó Malinois - Đã sản xuất bảo tồn 219 liều tinh chó Malinois đơng lạnh cọng rạ (hoạt lực tinh trùng sau đông lạnh 38 - 40%) Tinh chó đơng lạnh có chất